【文章內(nèi)容簡介】 在基線選擇2～8時(shí)觀察熒光強(qiáng)度（是否有三期特征）。并分別在Delta Rn 、Ct Number和 Rn 。 得出定量結(jié)果：調(diào)節(jié)基線和閾值以得到一較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。電腦據(jù)此曲線給出陽性結(jié)果值。此時(shí)應(yīng)排除某些陰性標(biāo)本因熒光曲線假性上揚(yáng)而得出的假陽性結(jié)果和某些弱陽性標(biāo)本因終末熒光值過低而顯示的假陰性。 發(fā)放報(bào)告：及時(shí)登記檢測結(jié)果記錄，發(fā)放臨床報(bào)告。：出現(xiàn)下述四種情況中的任何一種或多種，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不可發(fā)，查找原因，重做實(shí)驗(yàn)。 陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增。 陽性對(duì)照無擴(kuò)增。 。 室內(nèi)質(zhì)控血清檢測結(jié)果出現(xiàn)失控情況，實(shí)驗(yàn)失控的具體標(biāo)準(zhǔn)詳見室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。：達(dá)到下列要求后，當(dāng)次實(shí)驗(yàn)有效，可以發(fā)放結(jié)果。，陽性對(duì)照擴(kuò)增。，斜率、截距和相關(guān)系數(shù)三個(gè)參數(shù)的數(shù)值均在范圍內(nèi)。，具體標(biāo)準(zhǔn)詳見5. 本文涉及以下表格室間質(zhì)評(píng)記錄表 PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表 室內(nèi)質(zhì)控圖 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：ABCD3PR10版本/修訂號(hào)：A/0主題內(nèi)容臨床標(biāo)本的保存操作程序生效日期：20060808 第 22 頁 共91 頁臨床標(biāo)本的保存操作程序1．目的：臨床標(biāo)本正確保存，以便必要時(shí)復(fù)查。2．適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標(biāo)本。3．負(fù)責(zé)人： 操作人： 4．程序：4．1 處理前的標(biāo)本保存a）HBV：全血標(biāo)本可4℃下短期（24h內(nèi)）保存，長期保存則需分離出血清（血漿），保存于20℃下。d）HCV：在1小時(shí)內(nèi)分離血清，吸取200181。l，加入20u Rnasin，保存于20℃。盡可能快的提取RNA。c）TB：痰或胸腹水、腦脊液、膿液標(biāo)本用于TB檢測的短期保存可置于4℃下，長期保存則于20℃下。d）CT：標(biāo)本短期（24h內(nèi)）保存置于4℃下，長期保存則需在20℃下。4．2 報(bào)告發(fā)出后的標(biāo)本保存：a） 提取的核酸標(biāo)本當(dāng)天檢測可置4℃保存，如當(dāng)天不檢測應(yīng)置20℃保存。報(bào)告發(fā)出后第二天丟棄。b） 原始血清/血漿樣本在報(bào)告發(fā)出后放入低溫冰箱20℃保存1個(gè)星期，以備復(fù)查。超過1個(gè)星期保存期的標(biāo)本由室負(fù)責(zé)人酌情處理，一般按生物傳染性物品交醫(yī)院統(tǒng)一處理。c）血清/血漿標(biāo)本放置低溫冰箱保存時(shí)須有記錄，按編號(hào)順序存放，并由專人負(fù)責(zé)管理。4．3 特殊標(biāo)本的處理：對(duì)暫不檢測的項(xiàng)目和規(guī)定時(shí)間外收到的零散樣本，要隨時(shí)登記和交班，以免漏檢，遺失和延誤檢驗(yàn)。對(duì)特殊樣本或特殊病人的樣本，實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，所謂特殊樣本是指難于采集的樣本，以及特殊病人的樣本一律實(shí)行“首接”負(fù)責(zé)制，無論那位工作人員，一旦收到樣本后，均須負(fù)其責(zé)任，不得以任何借口推托，及時(shí)和正確保管和轉(zhuǎn)送樣本到有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或有關(guān)人員，同時(shí)作交班記錄和雙簽名。對(duì)于做長期病情動(dòng)態(tài)考察的病人標(biāo)本一律置于20℃下長期保存，使用時(shí)再按需取出檢測。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 拒收標(biāo)本記錄本 標(biāo)本超低溫保存記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：ABCD3PR11版本/修訂號(hào)：A/0主題內(nèi)容臨床標(biāo)本采集運(yùn)送接收程序生效日期：20060808 第 24 頁 共91 頁臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送、接收程序1．目的：規(guī)范臨床待檢標(biāo)本的正確采集、送檢和處理。2．適用范圍：分子診斷室的所有臨床檢測標(biāo)本。3．負(fù)責(zé)人： 操作人： 4．程序：4．1 標(biāo)本的采集4．1．1 標(biāo)本由臨床各科室接受過臨床基因擴(kuò)增檢測有關(guān)標(biāo)本采集、保存、運(yùn)輸知識(shí)培訓(xùn)的醫(yī)護(hù)人員采集并送至實(shí)驗(yàn)室。4．1．2標(biāo)本采集要求a）血液標(biāo)本：，血標(biāo)本采集后在2小時(shí)內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室（HCV采用EDTA抗凝的血漿）。離心（檢驗(yàn)單與標(biāo)本一道），編號(hào)。b）痰標(biāo)本：用帶蓋的無菌一次性塑料瓶收集清晨第一口痰標(biāo)本送檢。（對(duì)于無痰或少痰的患者，可用45℃加溫的100g/L NaCl水溶液霧化吸入或改變體位以使痰液易于咳出；對(duì)于小兒可以輕壓胸骨柄上方以誘導(dǎo)咳痰，用消毒棉拭子刺激喉部引起咳嗽反射，用棉拭子采集標(biāo)本。）標(biāo)本在室溫下保存不能超過24小時(shí)。c）生殖道拭子：尿道或陰道分泌物由醫(yī)生用專用取樣拭子（滅菌，一次性）采集樣本，及時(shí)送檢。采集生殖道拭子標(biāo)本，要求男性病人在采樣前2小時(shí)內(nèi)不能排尿，采樣時(shí)，將棉拭子伸入男性尿道及女性宮頸口2～3cm，轉(zhuǎn)動(dòng)一周以獲得上皮細(xì)胞。d）尿液：由病人自留尿液于無菌封閉的杯中送檢。e）腦脊液和胸腹水：由臨床醫(yī)生采集后放入消毒的試管中及時(shí)送檢。注意：所有上述用于臨床標(biāo)本采集的容器如試管或離心管，均應(yīng)使用前高壓滅菌和密封。4．2 標(biāo)本的運(yùn)送標(biāo)本采集后，密閉、標(biāo)（貼）姓名，應(yīng)盡可能快的送至檢測實(shí)驗(yàn)室，如運(yùn)送時(shí)間需2小時(shí)以上，必須用冰盒送至實(shí)驗(yàn)室。標(biāo)本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，如用于RNA測定加入4mol/L異硫氰酸胍鹽（GITC）的血清（漿）標(biāo)本和用于DNA測定的EDTA抗凝血等，則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。4．5 接收4．5．1嚴(yán)格對(duì)各類樣本的查對(duì)和雙簽制度，對(duì)病房各樣本及時(shí)進(jìn)行驗(yàn)收，查對(duì)，不符合要求的樣本一律退回，并有書面記錄。4．5．2 分類驗(yàn)證4．5．2．1 一般內(nèi)容進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的樣本在進(jìn)行編號(hào)、離心前，工作人員應(yīng)再次認(rèn)真查對(duì)姓名，聯(lián)號(hào)，住院號(hào)，病區(qū)床號(hào)，項(xiàng)目等。對(duì)不符合要求者應(yīng)作記錄，并及時(shí)通知采樣科室，正確及時(shí)地補(bǔ)采樣，以免延誤病人的檢測結(jié)果報(bào)告。對(duì)書寫不清楚的申請(qǐng)單，當(dāng)事者要及時(shí)與病房聯(lián)系(可電話)，明確受檢者姓名，住院號(hào)，性別，年齡，病區(qū)，床號(hào)和檢驗(yàn)項(xiàng)目等；并作相應(yīng)記錄。4．5．2．2 按檢測項(xiàng)目驗(yàn)證標(biāo)本a）HBV：所需標(biāo)本類型為未溶血的血清或血漿，注意血漿標(biāo)本所用的抗凝劑，用EDTAK2，不可使用肝素。標(biāo)本為全血時(shí)應(yīng)及時(shí)分離出血漿保存。b）HCV：同上，但標(biāo)本為血清時(shí)，要在1小時(shí)內(nèi)分離出血清用于檢測。c）TB：晨起第一口深部痰(不能為唾液)、胸腹水、腦脊液、膿液或穿刺液。d）CT：尿道或陰道分泌物。4．5．2．3 實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)標(biāo)本進(jìn)行查驗(yàn)，出現(xiàn)下表中不合要求的情況時(shí)，應(yīng)拒收標(biāo)本，登記并告知相關(guān)科室。類別拒收原因1未正確使用抗凝劑的標(biāo)本造成凝血的標(biāo)本2嚴(yán)重溶血3嚴(yán)重脂血4采血量不足（血清＜200uL、全血＜1mL） 5檢測項(xiàng)目TB的標(biāo)本是唾液而不是晨痰6標(biāo)本容器破裂，標(biāo)本被污染7標(biāo)本的病人姓名、年齡、性別等與檢驗(yàn)單不相符8RNA檢測，采樣時(shí)間超過 2小時(shí)9其他可能嚴(yán)重影響檢驗(yàn)結(jié)果的原因4．5．2．4 拒收程序a）對(duì)拒收的不合格標(biāo)本應(yīng)在拒收標(biāo)本記錄本上登記。b）填寫不合格標(biāo)本處置單，并隨同申請(qǐng)單送返送檢科室。c）必要時(shí)電話告之相關(guān)科室醫(yī)生或護(hù)士。5. 本文涉及以下圖表：PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表 PCR擴(kuò)增拒收標(biāo)本記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：ABCD3PR12版本/修訂號(hào)：A/0主題內(nèi)容PCR生物安全防護(hù)措施生效日期：20060808 第 25 頁 共91 頁P(yáng)CR生物安全防護(hù)措施1．目的：預(yù)防工作人員在實(shí)驗(yàn)過程中被感染或污染。2．適用范圍：適用于本室所有工作人員。3．負(fù)責(zé)人： 操作人： 4．細(xì)則：4．1 實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)施生物防護(hù)措施時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守各項(xiàng)相應(yīng)的規(guī)章制度，建立起強(qiáng)烈的生物防護(hù)意識(shí)。4．2 每天更換廢液缸的2%戊二醛溶液，并保證2%戊二醛溶液用量為廢液缸內(nèi)總液量的五分之一左右。配置消毒液時(shí)，正確量取足量的消毒劑（用量杯，保證濃度），水的用量也要正確，缸體密封性良好。4．3 實(shí)驗(yàn)臺(tái)面日常清潔時(shí)使用75%的酒精擦拭。4．4 每區(qū)每次實(shí)驗(yàn)后紫外燈照射30～60分鐘，如有需要可延長照射時(shí)間。4．5 所有來自病人的血液或體液標(biāo)本均應(yīng)視作傳染源，因此在標(biāo)本的采集、運(yùn)輸過程中，標(biāo)本容器應(yīng)完好無泄漏。4．6 處理標(biāo)本時(shí)應(yīng)穿工作服、戴手套，以免沾上皮膚。如手或其它部位的皮膚沾上血液或體液標(biāo)本以及試劑，應(yīng)立即沖洗干凈。有下列情況之一者，需另外消毒：手接觸有傳染性的微生物，水龍頭、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量細(xì)菌污染。消毒劑可用“84”消毒液。4．7 在實(shí)驗(yàn)過程中，病人標(biāo)本（血液、體液）或試劑不慎濺入眼內(nèi)應(yīng)立即用清水洗。4．8 實(shí)驗(yàn)過程中在使用針具等銳器時(shí)，盡量小心防止受傷。若被銳器刺破時(shí)，應(yīng)立即脫下手套，盡量擠壓傷處，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要時(shí)進(jìn)行預(yù)防補(bǔ)救措施。4．9 在實(shí)驗(yàn)過程中病人標(biāo)本（血液、體液）外漏時(shí)，應(yīng)立即用2%戊二醛滴上，濾紙或紗布蓋上半小時(shí)，然后用酒精擦洗，并用紫外燈消毒。4．10 實(shí)驗(yàn)完畢離開時(shí)，應(yīng)脫下所有該實(shí)驗(yàn)區(qū)個(gè)人防護(hù)裝備。4．11 實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行紫外消毒。4．12 遇有意外事故應(yīng)立即報(bào)告科室負(fù)責(zé)人，當(dāng)事人應(yīng)立即注射相關(guān)疫苗或進(jìn)行預(yù)防性治療，并進(jìn)行醫(yī)學(xué)觀察，嚴(yán)重者應(yīng)報(bào)告院技術(shù)負(fù)責(zé)人。5. 本文涉及以下表格紫外消毒車消毒記錄表 實(shí)驗(yàn)室清潔消毒記錄表 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：ABCD3PR13版本/修訂號(hào)：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序生效日期：20060808 第 26 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑配制程序1．目的：保證實(shí)驗(yàn)中用到的各種溶液符合實(shí)驗(yàn)要求。2．適用范圍：核酸擴(kuò)增熒光檢測實(shí)驗(yàn)室常用溶液：4%NaOH溶液、75%酒精、消毒劑（三氯異氰尿酸或 二氯異氰尿酸鈉）、2%戊二醛溶液等。3．負(fù)責(zé)人： 操作人： 4．程序：4．4 化學(xué)試劑的配制：4．4．1 用具：干燥潔凈的250ml量桶一只，1000ml量桶一只，1000ml燒杯一只，三角燒瓶兩只，天平一架，100ml塑料試劑瓶、2000ml廣口瓶各一只。4．4．2 配制步驟：4．4．2．1 配制4%NaOH溶液:a）用天平稱取4克分析純的NaOH固體，置于一只三角燒瓶中。b）用250ml量桶準(zhǔn)確取100ml水，緩緩注入盛放NaOH固體的三角燒瓶中。c）搖蕩三角燒瓶使NaOH固體充分溶解。d）然后緩緩傾倒入100ml塑料試劑瓶中密封保存?zhèn)溆谩?．4．2．2 配制消毒劑:a）一般桌面、器具和地面的消毒只要使有效氯達(dá)到500mg/L，即可達(dá)到消毒作用。b）消毒劑為粉狀（20克/袋），如配制一升的消毒劑溶液，則取500g，倒入燒杯中，緩緩加入1000ml水充分溶解，備用。c）如需加大消毒力度，則有效氯濃度加大。4．4．2．3 配制75%酒精溶液:a）一般常規(guī)消毒的75%酒精由醫(yī)院藥劑科提供。b）RNA提取的75%酒精的配制，試劑盒提供DEPC水，酒精用分析純的無水酒精，根據(jù)當(dāng)天的標(biāo)本數(shù)量進(jìn)行配制。4．4．2．4 配制2%戊二醛溶液:a）準(zhǔn)確量取戊二醛原液20ml倒入1000ml燒杯中。b）量取980ml水，緩緩倒入1000ml燒杯中，混勻，加至2000ml廣口瓶中備用。注意事項(xiàng)：每份配制好的溶液保質(zhì)期為14天 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 PCR室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：ABCD3PR14版本/修訂號(hào)：A/0主題內(nèi)容PCR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度生效日期：20060808 第 28 頁 共91 頁P(yáng)CR實(shí)驗(yàn)室記錄管理制度目的：確保檢驗(yàn)資料的記錄、保存狀態(tài)在控適用范圍：實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)、文本資料的記錄3．負(fù)責(zé)人： 操作人： 工作程序： 書面記錄文件的管理： 本實(shí)驗(yàn)室的書面記錄包括：001 ABCD人民醫(yī)院檢驗(yàn)科基因檢測實(shí)驗(yàn)室平面圖編號(hào)ABCD/001002實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡歷表編號(hào)ABCD/002003PCR實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表編號(hào)ABCD/003004PCR擴(kuò)增接收標(biāo)本記錄表編號(hào)ABCD/004005拒收標(biāo)本記錄本編號(hào)ABCD/005006標(biāo)本超低溫保存記錄表編號(hào)ABCD/006007PCR試劑購買記錄表編號(hào)ABCD/007008試劑驗(yàn)收記錄表編號(hào)ABCD/008009PCR室特殊耗材驗(yàn)收記錄表編號(hào)ABCD/009010普通耗材驗(yàn)收記錄表編號(hào)ABCD/010011室間質(zhì)評(píng)記錄表編號(hào)ABCD/011012PCR室內(nèi)質(zhì)控記錄表編號(hào)ABCD/012013室內(nèi)質(zhì)控圖編號(hào)ABCD/013014 PCR實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度記錄表編號(hào)ABCD/014015冰箱溫度質(zhì)控圖