植物組織培養(yǎng)試驗(編輯修改稿)
2025-07-27 04:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 1愈傷組織的誘導(1)將細葉連翹的幼嫩葉片用自來水沖洗凈，再用飽和的洗衣粉浸泡30min,沖洗30min，在超凈工作臺中，用70%乙醇浸泡30S，無菌水沖洗一次，%升汞中消毒8min，在消毒過程中不斷振蕩使外植體充分接觸消毒劑，倒出消毒劑，用無菌水沖洗葉片35次。(2)將消毒后的葉片在無菌濾紙上吸干水。(3)將切好的小葉片接入表2所示9種培養(yǎng)基中。(4)在25C177。1C，光照16h/d條件下進行培養(yǎng)。(5)1周后在葉片切口邊緣出現(xiàn)愈傷組織，培養(yǎng)46周，愈傷組織達到高峰。2愈傷組織的增殖(1)將生長良好的愈傷組織從外植體上切下，切掉變成褐色的部分，其余部分切成約黃豆大小，接入表3所示9種培養(yǎng)基中。(2)在25C177。1C，光照16h/d條件下進行培養(yǎng)。(3)愈傷組織生長旺盛，呈淺綠色或淺黃色，質地較為疏松。3實驗結果觀察及記錄對愈傷組織誘導及生長情況拍照記錄。材料接種后，在固定周期內(nèi)對材料的污染率、褐化率、死亡率、愈傷啟動率以及愈傷組織誘導率等情況做觀察記載及必要的統(tǒng)計，并根據(jù)需要調(diào)整試驗步驟。以下為一些數(shù)據(jù)記錄公式：啟動率＝未污染外植體啟動數(shù)/未污染外植體總數(shù)100％污染率＝接種污染數(shù)/接種總數(shù)100%死亡率＝未污染死亡數(shù)/未污染總數(shù)100％褐化率＝未污染褐化數(shù)/未污染總數(shù)100％愈傷組織誘導率＝產(chǎn)生愈傷組織的塊數(shù)/接種的總塊數(shù)100％其中，有部分外植體并未完全褐化，也長出部分愈傷組織，對于此種外植體，記錄數(shù)據(jù)時，既將其當成褐化外植體同時也當成產(chǎn)生愈傷的外植體。用SPSS統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)的方差分析。 實驗四 樹型金銀花愈傷組織的誘導和增殖的研究實驗一、實驗設計1研究的技術路線 在查閱有關文獻資料的基礎上，結合預備試驗，主要采用芽、幼嫩莖段和幼嫩葉片，著重從誘導愈傷方面研究樹型金銀花愈傷最佳誘導體系，主要采用單因素、雙因素、以及多因素正交設計的方法，同時用多元分析法進行分析，從而摸索出最佳誘導愈傷條件。篩選出最優(yōu)體系，具體技術路線如下圖：外植體選取 外植體表面滅菌 愈傷組織的誘導愈傷組織的增殖圖1 技術路線2 試驗方案 植物的最佳繁育方法，首先是由其遺傳特異性決定的，單就組織培養(yǎng)而言，它還受植物基因型、外植體種類、部位及培養(yǎng)基種類、激素類型及濃度、培養(yǎng)條件等諸多因素的影響。本試驗在參考已有資料的基礎上采用正交設計和隨機區(qū)組試驗設計，注重啟動培養(yǎng)基配方的研究，各階段設計方案如下：芽愈傷組織的誘導 本試驗以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基配方見表表3和表4。采用隨機區(qū)組試驗設計探索生長調(diào)節(jié)因子6BA,NAA對樹型金銀花頂芽或側芽誘導愈傷組織的適用量，6BA,NAA8個處理的隨機區(qū)組試驗設計（表2）。表2 芽愈傷誘導激素組合配比表(單位：mg/L)因素水平1234567 86BA1212 NAA 莖段愈傷組織的誘導本試驗以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，MS培養(yǎng)基配方見表1。采用隨機區(qū)組試驗設計探索生長調(diào)節(jié)因子6BA,NAA對樹型金銀花莖段誘導愈傷組織的適用量，6BA,NAA8個處理的隨機區(qū)組試驗設計（表2）。葉片愈傷組織的誘導(1)正交實驗設計本試驗也是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，采用正交設計探索生長因子6BA、2，4D、NAA以及蔗糖濃度對樹型金銀花幼嫩葉片愈傷組織誘導的適用量，每個因子設三種水平（表3），構成四因素三水平的試驗設計（表4）。表3葉片愈傷誘導正交設計因素水平表水平因素2,4Dmg/L6BAmg/LNAAmg/L蔗糖g/L115230345表4葉片愈傷誘導正交設計表處理2,4D6BANAA蔗糖111522303134541245513156111307233082145921215(2)單因素誘導葉片愈傷本試驗也是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，采用隨機區(qū)組試驗設計探索生長因子2，4D不同濃度對樹型金銀花幼嫩葉片愈傷組織誘導的影響，該因子設四種水平（表5），構成單因素四水平的試驗設計。表5葉片愈傷誘導2，4D單因素水平表水平（mg/L）12342，4D3試驗方法培養(yǎng)基的選擇查閱的中文文獻和外文文獻中絕大多數(shù)金銀花的組培都選用MS（Murashing and Skoog,1962）培養(yǎng)基，這說明MS培養(yǎng)基為金銀花組培的經(jīng)典培養(yǎng)基，故三種外植體均選取MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，以節(jié)約時間和減少浪費。 培養(yǎng)基的滅菌根據(jù)試驗設計各階段所需要培養(yǎng)基。培養(yǎng)基配制好后進行認真嚴格的濕熱滅菌，滅菌條件為121176。C，約110Pa下滅菌20分鐘，滅菌完成后取出待其冷去凝固后使用。如果為固體培養(yǎng)基，則在取出后應該適當搖蕩使培養(yǎng)基里面的瓊脂充分混勻，以防培養(yǎng)基凝固不好。 激素的選取根據(jù)外植體的不同分別選取了不同的激素，這些激素分別是:6BA、NAA、2，4D 外植體的選?、俣?選取3月份未萌發(fā)的芽,去除外層葉片。②幼嫩莖段 盡量選取莖段頂層。③葉片選取幼嫩葉片。 外植體滅菌滅菌試劑的選取75%酒精，%升汞，30%次氯酸鈉。
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