細胞工程實驗-煙草葉片的組織培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-07-26 16:35 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，則還需用洗滌液浸泡數(shù)小時，然后再用自來水充分沖洗。 裝有固體培養(yǎng)基的器皿應(yīng)先將其刮去，然后洗滌。帶菌的器皿在洗滌前先浸在2％煤酚皂溶液（來蘇爾）或0．25％新潔爾滅消毒液內(nèi)24小時或煮沸半小時，再用上法洗滌。帶病原菌的培養(yǎng)物最好先行高壓蒸汽滅菌，然后將培養(yǎng)物倒去，再進行洗滌。 3．新購置的玻璃器皿含有游離堿，一般先用2%鹽酸或洗液浸泡數(shù)小時后，再用水沖洗干凈。金屬器皿的清洗 不宜用洗滌液清洗，一般用酒精擦拭，并且保持干燥。新用具因其有潤滑油及防銹油涂護，用前要用含四氯化碳的布擦去油脂，再用濕布擦，烘干，消毒。包裝 目的是防止消毒滅菌后再次污染，故在消毒處理前經(jīng)過嚴格包裝。清洗后先晾干再包裝起來，才可消毒。包裝材料一般用報紙（節(jié)省）。二、培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基母液的配制和保存 MS培養(yǎng)基含有近30種營養(yǎng)成分，為了避免每次配制培養(yǎng)基都要對這幾十種成分進行稱量，可將培養(yǎng)基中的各種成分，按原量的20倍或100倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養(yǎng)基母液。這樣每次使用時，取其總量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀釋，制成培養(yǎng)液?，F(xiàn)將制備培養(yǎng)基母液所需的各類物質(zhì)的量列出，供配制時使用。Ms培養(yǎng)基的配方：大量元素(母液Ⅰ) g／LNH4NO3 KNO3 CaCl22H2O MgSO47H2O KH2PO4 幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 L。微量元素(母液Ⅱ) mg/LKI 83H3BO3 620MnSO44H2O 1560ZnSO47H2O 860Na2MoO42H2O 25CuSO45H2O CoCl26H2O 幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 L。鐵鹽(母液Ⅲ)FeSO47H2O 556mgNa2EDTA2H2O 746mg溶解后定容至100ml肌醇 1g溶解定容至100ml維生素（100x）煙酸 100mg鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100mg鹽酸硫胺素(維生素B1) 20mg逐一溶解后定容至100ml激素的配制2，4二氯苯氧乙酸(2，4D)、萘乙酸(NAA)、6—芐基嘌呤(6BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液()。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各20 mg，將2，4D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預溶，將6BA用少量(1 mL) mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL。Ms培養(yǎng)基的配制大量元素母液 100ml微量元素母液 10ml維生素 1ml肌醇 10ml鐵鹽 5ml蔗糖 30g瓊脂粉 8gMS培養(yǎng)基配制培養(yǎng)液時的注意事項配制培養(yǎng)液時應(yīng)注意： ?、僭谑褂锰崆芭渲频哪敢簳r，應(yīng)在量取各種母液之前，輕輕搖動盛放母液的瓶子，如果發(fā)現(xiàn)瓶中有沉淀、懸浮物或被微生物污染，應(yīng)立即淘汰這種母液，重新進行配制； ?、谟昧客不蛞埔汗芰咳∨囵B(yǎng)基母液之前，必須用所量取的母液將量筒或移液管潤洗2次； ?、哿咳∧敢簳r，最好將各種母液按將要量取的順序?qū)懺诩埳?，量?種，劃掉1種，以免出錯。溶化瓊脂 用粗天平分別稱取瓊脂8 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸餾水750 mL，用電爐加熱，邊加熱邊用玻璃棒攪拌，直到液體沸騰五分鐘。然后再將配好的混合培養(yǎng)液加入到煮沸的瓊脂中，最后加蒸餾水定容至1 000 mL，攪拌均勻。 需要注意的是，在加熱瓊脂、制備培養(yǎng)基的過程中，操作者千萬不能離開，否則沸騰的瓊脂外溢，就需要重新稱量、制備。此外，如果沒有搪瓷量杯，可用大燒杯代替。但要注意大燒杯底的外表面不能沾水，否則加熱時燒杯容易炸裂，使溶液外溢，造成燙傷。調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol
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