細(xì)胞工程2培養(yǎng)細(xì)胞常規(guī)檢查和特性鑒定(編輯修改稿)
2025-10-08 21:53 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ，一般發(fā)現(xiàn)污染后應(yīng)盡快棄之，以防污染擴(kuò)大影響其它細(xì)胞。防止污染關(guān)鍵在于嚴(yán)格無(wú)菌操作，為防止污染和搶救有價(jià)值的細(xì)胞，目前一般可采用一下措施： （ 1）抗生素 （ 2）加溫處理 （ 3）動(dòng)物體內(nèi)接種 ?細(xì)胞系特征及細(xì)胞系間交叉污染的測(cè)定 ?同工酶分析 ?血型及主要組織相容性抗原的測(cè)定 ?G顯帶技術(shù) ?DNA分析 二、細(xì)胞系的鑒定 ?細(xì)胞系組織來(lái)源的鑒定 ?具有特征性標(biāo)志的超微結(jié)構(gòu)分析 ?免疫學(xué)試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞骨架蛋白 ?組織特異性抗原的鑒定 ?細(xì)胞特殊功能的生化檢查方法 ?細(xì)胞來(lái)源及特征數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)化 第四節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞的低溫保存 ?細(xì)胞的冷凍保存是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的常用方法。細(xì)胞凍存與細(xì)胞傳代保存相比?？梢詼p少人力、經(jīng)費(fèi)，減少污染，減少細(xì)胞生物學(xué)特性變化。其原理是在低于 70℃ 的超低溫條件下，細(xì)胞內(nèi)部的生化反應(yīng)極其緩慢，甚至終止。 ?液體的固化有兩種方式，一種是形成尖銳的冰晶，另一種是進(jìn)入無(wú)定形的玻璃化狀態(tài)。根據(jù)凍存液在凍結(jié)后是否形成冰晶，凍存細(xì)胞可分為兩種方法： ?非玻璃化凍存 ?玻璃化凍存 ?冰晶損傷：凍存細(xì)胞過(guò)程中，因細(xì)胞內(nèi)水分結(jié)冰形成冰晶而致的細(xì)胞損傷，包括細(xì)胞膜和細(xì)胞器的損傷。 ?溶質(zhì)損傷：凍存細(xì)胞過(guò)程中，因細(xì)胞外水分結(jié)冰形成冰晶，使得未結(jié)冰的溶液中電解質(zhì)濃度升高而引起的細(xì)胞損傷。 非玻璃化凍存 一、非玻璃化凍存 （一）非玻璃化凍存原理 ?非玻璃化低溫凍存和復(fù)蘇細(xì)胞的原則： ?緩慢降溫，快速?gòu)?fù)蘇 ?在凍存液中加入冷凍保存劑 ? 緩慢冷凍過(guò)程中： 細(xì)胞外水分先結(jié)冰－胞外電解質(zhì)濃度升高－細(xì)胞內(nèi)水分滲出－ 在細(xì)胞外形成冰晶－減少胞內(nèi)冰晶的形成，減少胞內(nèi)冰晶損傷 ? 快速?gòu)?fù)蘇過(guò)程中： 避免原有冰晶融化后，又以新的晶核為中心形成更大結(jié)晶即水 的重結(jié)晶現(xiàn)象，減少冰晶損傷，提高凍存細(xì)胞的復(fù)蘇率 ?慢凍快融以及冷凍保護(hù)劑的作用 ? 冷凍保護(hù)劑的應(yīng)用： 是指可以保護(hù)細(xì)胞免受冷凍損傷的物質(zhì)。首先要求對(duì)細(xì)胞沒(méi)有 明顯毒性。 ? 主要包括有甘油、 DMSO、乙二醇、乙酰胺、甲醇等； ? 分子質(zhì)量一般較小，易溶于水，易結(jié)合水分子，易穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部； ? 可降低細(xì)胞的冰點(diǎn)，延緩凍結(jié)過(guò)程?？商岣呒?xì)胞膜對(duì)水的通透性，凍存時(shí)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)水分滲出細(xì)胞外，減少胞內(nèi)冰晶損傷?？上♂尲?xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，減少溶質(zhì)損傷。 滲透性保護(hù)劑 ? 主要包括有聚乙烯吡咯烷酮（ PVP）、蔗糖、聚
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