a細(xì)胞工程第4節(jié)—植物花粉和花藥培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-06-21 22:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 需震蕩，以利通氣。 ? 雙層培養(yǎng) 花粉置固體 液體雙層培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 培養(yǎng)基制作方法：先鋪一層瓊脂固體培養(yǎng)基，凝固后，在表面加入少量液體培養(yǎng)基。 ? 看護(hù)培養(yǎng) ? 利用花藥或花藥愈傷組織釋放出的活性物質(zhì)促進(jìn)花粉小孢子發(fā)育。 用一塊活躍生長的愈傷組織來看護(hù)單個細(xì)胞，并使 ? 其生長和增殖。這個愈傷組織塊稱為 看護(hù)愈傷組織 1）在一個培養(yǎng)瓶中加入一定量厚的固體培養(yǎng)基，滅菌后備用。 2）在無菌條件下，將一小塊（ 1cm3）活躍生長的愈傷組織接種到培養(yǎng)基上，再在愈傷組織塊上放一片（ 1cm178。）已滅菌的濾紙，放置過夜。 3）將分離的 花粉 接種到已經(jīng)充分吸收愈傷組織滲透液的濾紙上。 4）單細(xì)胞分裂形成肉眼可見的小細(xì)胞團(tuán)后，即轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，恒溫培養(yǎng)，得到單細(xì)胞無性系。 具體方法 2. 看護(hù)培養(yǎng)圖解 ? 微室培養(yǎng) 利用小的蓋玻片和凹穴載玻片形成微室進(jìn)行花粉培養(yǎng)。 ? 條件培養(yǎng)基培養(yǎng) 利用培養(yǎng)過花藥的液體培養(yǎng)基或含失活花藥提取物的培養(yǎng)基上培養(yǎng)?；ㄋ帡l件培養(yǎng)基、子房條件培養(yǎng)等 。 微室培養(yǎng)圖示： 1滴含單細(xì)胞培養(yǎng)液 周圍加石蠟油 旁邊各加石蠟油 蓋蓋玻片 蓋蓋玻片 平視圖 凹穴載玻片 置培養(yǎng)皿中 26~28 ℃ 恒溫培養(yǎng) 花粉培養(yǎng)過程 取花蕾（鏡檢） 預(yù)培養(yǎng)數(shù)天 取花藥 消毒 分離花粉 第一節(jié) 花藥和花粉培養(yǎng)技術(shù) 接種 培養(yǎng) 愈傷組織發(fā)生 三、白化苗現(xiàn)象 （一）白化苗產(chǎn)生的影響因素及機(jī)理 內(nèi)因 供體植株基因型（如秈稻比粳稻白苗率高）、花粉發(fā)育時期。 外因 預(yù)處理、培養(yǎng)基成分、激素水平與種類、培養(yǎng)條件和方法、愈傷組織轉(zhuǎn)分化時間等。 機(jī)理 核基因起關(guān)鍵作用，導(dǎo)致質(zhì)體 DNA缺失，產(chǎn)生白苗。另外地、無性系變異也可能是原因之一。 （二）白化苗的控制 ? 通過對花粉發(fā)育時期、預(yù)處理、培養(yǎng)基成分等因素進(jìn)行調(diào)控。 四、影響雄核發(fā)育和花粉花藥培養(yǎng)的因素 ? （一）基因型 植物基因型是影響雄核發(fā)育的最重要的因素之一。同一物種中的不同基因型對小孢子離體誘導(dǎo)反應(yīng)差異較大。 如在水稻中，秈稻花粉培養(yǎng)力遠(yuǎn)低于糯稻。 小孢子發(fā)育時期 對誘導(dǎo)雄核發(fā)育非常重要。 （三）花粉發(fā)育時期 適宜時期 ：單核期 ,尤其是單核中、晚期(單核靠邊期 ) 蕓苔屬植物 Brassica napus不同基因型的小孢子產(chǎn)胚率比較 Topas 10,000200,000 120 Westar 100010,000 Delta 10010,000 Bounty 10100 基因型 胚狀體數(shù)量 /106小孢子 成苗率（ %） 植株生長條件 光溫等因素均能影響花藥培養(yǎng)力。一般 處于適宜生長條件（如溫室中）較好。但物種間存在差異。 植株生長時期 一般是開花始期優(yōu)于開花末期。 P花粉的頻率 不同溫度、日照時數(shù)、氮饑餓及生長物質(zhì)處理提高 P花粉的數(shù)量 （二）供體植株生長條件和生理狀態(tài) ? 隨著細(xì)胞體積迅速增大，細(xì)胞核由中央位置推向一邊，即單核靠邊期。 雄配子體的發(fā)育 營養(yǎng)細(xì)胞 生殖細(xì)胞 精子 四分體 : 醋酸洋紅染色 四分體 : Alexander’s 染色 單核期 雙核期 成熟花粉粒 處于不同發(fā)育時期的煙草小孢子 單核晚期 ?液泡 第一次有絲分裂后期 雙核早期 雙核中期 ?生殖核 ?生殖核 營養(yǎng)核 ? 一般而言，單核期（第一次有絲分裂前）對誘導(dǎo)反應(yīng)最敏感，為最佳培養(yǎng)期。 形成雙核后，在合適的條件，主要由營養(yǎng)細(xì)胞分裂產(chǎn)生胚狀體。 ? 不同物種誘導(dǎo)胚胎發(fā)生的最佳小孢
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