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細(xì)胞工程實驗-煙草葉片的組織培養(yǎng)(專業(yè)版)

2025-08-10 16:35上一頁面

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【正文】 (3)誘導(dǎo)生芽觀察結(jié)果:愈傷組織切塊培養(yǎng)基中逐漸長大并且出現(xiàn)明顯的芽,發(fā)育好的區(qū)域可以見到明顯的葉片。 實驗后將工作臺面清理干凈,各種儀器工具洗凈歸位。 接種室滅菌:打開紫外燈30min。微莖尖要剝成只含12片幼葉的莖尖大小等。①酒精 酒精是最常用的表面消毒劑,以70%~75%酒精殺菌效果最好,95%或無水酒精會使菌體表面蛋白質(zhì)快速脫水凝固,形成一層干燥膜,阻止了酒精的繼續(xù)滲入,殺菌效果大大降低。瓶口膜封蓋瓶口,并用橡皮筋捆扎。7H2O 556mgNa2EDTA包裝 目的是防止消毒滅菌后再次污染,故在消毒處理前經(jīng)過嚴(yán)格包裝。 分?jǐn)?shù)________ 教師___________ 時間__________實驗二 實驗前的準(zhǔn)備一、器皿的清洗與包裝l.一般玻璃器皿(如錐形瓶、培養(yǎng)皿等)可用毛刷及去污粉或洗衣粉洗去灰塵、油垢、無機(jī)鹽類等物質(zhì),然后用自來水沖洗干凈。成本低、設(shè)計靈活、可充分利用培養(yǎng)空間,以操作方便、最大限度利用培養(yǎng)空間為原則。 離心機(jī) 用于細(xì)胞、原生質(zhì)體等活細(xì)胞分離,亦用于培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞器、核酸以及蛋白質(zhì)的分離提取。短日照植物需要短日照條件,長日照植物需要長日照條件。紫外燈一般在3到4平方米內(nèi)安裝1到2只;在工作臺下安置紫外燈紫外燈可使滅菌徹底。細(xì)胞工程學(xué)實驗報告專業(yè):_ 09級生物技術(shù)一班__姓名:___ __學(xué)號:____ 09121007_ _實驗一 實驗室的設(shè)計及基本設(shè)備一、實驗室的設(shè)計實驗室設(shè)計的原因: 植物細(xì)胞工程實驗室的流程是:清洗玻璃器皿、配制培養(yǎng)基、高壓氣滅菌、無菌操作、培養(yǎng)室培養(yǎng)植物、植物材料的檢測。同時,工作臺上方安裝平板玻璃,以防操作時落灰?,F(xiàn)代組培實驗室大多設(shè)計為采用天然太陽光照作為主要能源,這樣不但可以節(jié)省能源,而且組培苗接受太陽光生長良好,馴化易成活。根據(jù)分離物質(zhì)不同配置不同類型的離心機(jī)。一般有45層,層間間隔4050cm,光照強(qiáng)度可根據(jù)培養(yǎng)植物特性來確定,一般每架上配備24盞日光燈。少數(shù)實驗要求高的器皿,可先在洗液中浸泡數(shù)10min,再用自來水沖洗。清洗后先晾干再包裝起來,才可消毒。2H2O 746mg溶解后定容至100ml肌醇 1g溶解定容至100ml維生素(100x)煙酸 100mg鹽酸吡哆醇(維生素B6) 100mg鹽酸硫胺素(維生素B1) 20mg逐一溶解后定容至100ml激素的配制2,4二氯苯氧乙酸(2,4D)、萘乙酸(NAA)、6—芐基嘌呤(6BA)等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì),并且分別配成母液()。最后在錐形瓶外壁貼上標(biāo)簽。 酒精具有較強(qiáng)的穿透力,使菌體蛋白質(zhì)變性,殺菌效果好。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械,防止交叉污染。 外植體的選取:取生長良好的煙草幼嫩葉片進(jìn)行誘導(dǎo)。四、實驗結(jié)果 由愈傷組織誘導(dǎo)生芽成功后的照片實驗結(jié)果:接種后沒有被細(xì)菌及霉菌污染生長狀況良好,發(fā)出新芽并有明顯的生長。(4)在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)若干天后觀察,幼苗底部有一點點白色須須,一段時間后觀察有少許不定根長出,并且已經(jīng)長到了24cm長左右。再過一段時間,愈傷組織就完全形成了。 將接種好的培養(yǎng)基置于培養(yǎng)室培養(yǎng),定期觀察記錄結(jié)果。三、實驗材料 煙草葉片四、實驗步驟 培養(yǎng)基的配制、消毒及各種器皿的消毒滅菌。;莖切成含有一個節(jié)的小段。因此在材料接種培養(yǎng)前必須要消毒處理,消毒一方面要求把材料表面上的各種微生物殺滅,同時又不能損傷或只輕微損傷組織材料而不影響其生長。培養(yǎng)基分裝完畢后,應(yīng)及時封蓋瓶口。鐵鹽(母液Ⅲ)FeSO4新用具因其有潤滑油及防銹油涂護(hù),用前要用含四氯化碳的布擦去油脂,再用濕布擦,烘干,消毒。 (三)塑料用具 各種風(fēng)口膜、蓋、塑料盤及其它實驗用具。 培養(yǎng)架 目前所有植物組織培養(yǎng)實驗室植株繁殖培養(yǎng)的通用設(shè)施。 酸度計 用于測定培養(yǎng)基及其它溶液的pH,一般要求可測定pH范圍114之間??刂乒庹諘r間可安裝定時開關(guān)鐘,一般需要每天光照1016h,也有的 需要連續(xù)照明。室內(nèi)的墻壁要求光滑平整;地面為光潔的水磨石,平坦無縫,避免灰塵積累,便于清掃。因此實驗室需要有清潔器皿和配制培養(yǎng)基的準(zhǔn)備室,無菌操作室或超凈工作臺,供培養(yǎng)材料用的培養(yǎng)室,檢查培養(yǎng)情況并做記錄的實驗室。 條件不好時,用無菌箱代替無菌室,箱內(nèi)用紫外燈滅菌。在陰雨天可用燈光作補(bǔ)充。 細(xì)胞、原生質(zhì)體等活細(xì)胞的分離用低速離心機(jī)
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