db333994-20xx無(wú)公害南美白對(duì)蝦第4部分：苗種(編輯修改稿)
2025-07-26 07:47 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 機(jī)取樣三次，每次抽檢數(shù)量為100尾～200尾，用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）方法檢測(cè)（參見(jiàn)附錄A和附錄B）?！?氯霉素測(cè)定按FDA/ORA/DFS LIB＃4303的規(guī)定執(zhí)行?！?呋喃西林代謝物和呋喃唑酮代謝物的測(cè)定按DB33/T 5992006的規(guī)定執(zhí)行?！?判定規(guī)則 苗種質(zhì)量檢驗(yàn)結(jié)果全部達(dá)到第五章規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)要求，則判本批次苗種合格?！?檢驗(yàn)結(jié)果中有一項(xiàng)指標(biāo)要求不合格，允許加倍抽樣復(fù)檢此項(xiàng)指標(biāo)一次，復(fù)檢仍不合格的，則判本批次苗種不合格。檢驗(yàn)結(jié)果中有兩項(xiàng)及兩項(xiàng)以上指標(biāo)不合格，則判本批次苗種不合格。1附 錄 A（資料性附錄）對(duì)蝦白斑桿狀病毒（WSBV）PCR檢測(cè)方法 試劑和儀器 試劑對(duì)蝦白斑桿狀病毒（WSBV）PCR檢測(cè)試劑盒（國(guó)家海洋局第三研究所開(kāi)發(fā)）。其中，要求4℃冷藏保存的有：DNA提取裂解液1瓶，吸附液1支，洗滌液1瓶，電泳緩沖液1瓶，滅菌牙簽1包，瓊脂糖粉（含EB）1支；20℃冷凍保存的有：含PCR混合液反應(yīng)管12支，WSBVPCR穩(wěn)定液1支，陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照各1支，蒸餾水1支。注：瓊脂糖粉因含核酸染色劑溴化乙啶，有毒！制膠時(shí)帶手套操作，避免接觸皮膚。 儀器及耗材 PCR擴(kuò)增儀?！?臺(tái)式高速離心機(jī)?！?微型混合器?！?加樣槍?！?電泳儀。 電泳槽?！?紫外檢測(cè)燈?！?。 200微升加樣槍頭?！?不銹鋼鑷子?！?一次性手套。 檢測(cè)步驟 樣品的選取取10毫克對(duì)蝦或其它蝦池生物組織。仔蝦或幼蝦可取整只，成蝦可用鑷了取其心臟、真皮、鰓、腸或消化腺等組織?！?樣品的處理a) ，滴入10滴DNA提取裂解液，用滅菌牙簽搗絞1分鐘～2分鐘。b) 將內(nèi)置搗碎后蝦組織的小管放入臺(tái)式高速離心機(jī)，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，將上清液轉(zhuǎn)移至新管內(nèi)，加入20微升吸附液（內(nèi)含白色物質(zhì)，用前充分搖勻），混勻。室溫放置5分鐘，其間搖勻3次。c) 將混勻后的新管以10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒，棄去上清液，再離心5秒，用加樣槍吸干殘余液體，滴入10滴洗滌液于沉淀中，用加樣槍頭輕輕攪動(dòng)使沉淀充分懸浮起來(lái)。d) 再以10000轉(zhuǎn)/分鐘離心30秒，棄去上清液，再離心5秒，用加樣槍吸干殘余液體，將沉淀置于PCR儀上60℃加熱3分鐘（打開(kāi)離心管蓋）。e) 加20微升蒸餾水，充分懸浮沉淀。再以1000
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