萘啶類熒光小分子在缺陷dna腔體內熒光行為的研究畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-25 16:40 本頁面
【文章內容簡介】 復雜]/[2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶]的測定終點，說明2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶形成了穩(wěn)定的1：1的復合物與M1/S1復雜的缺口位點。106M1，在本實驗滴定曲線測定下，得出2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶含有不共價結合的DNA。這種非標記分子信標采用“信號”的方法，重點考慮的是讓靈敏度達到最高。作為常識，宏塊的靈敏度可以通過增加熒光團的強度或提高猝滅劑的效率提高。一個小的熒光分子可以捆綁到一個未成對的基地，這就是側翼的結合位點的堿基與一個未成對堿的氫鍵和堆疊。因此2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶的熒光猝滅效率可能會受未成對的胞嘧啶在復雜的M1/S1的缺口位點的影響，即使在2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶和胞嘧啶堿基之間有互補的氫鍵，也無法避免。為了檢查側翼堿基上熒光猝滅的效果，我們研究了2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶序列在一個單一的胞嘧啶M1/S1復雜干部分的依賴性結合的缺口位點。如圖2所示，最強的淬滅是2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶綁定的M1/ S1復雜的具有GG堿基對在和側間隙站點（圖3），在401nm處的熒光強度猝滅高達95%，M1/S1分子結構復雜。對于其他的側鏈堿基（圖3，光譜be），觀察到的熒光猝滅是相對穩(wěn)定的，在那兒的順序是TT(74%)CC(76%)AA(83%)。200a:ATMND 180 ab:TCT/160熒光強度 d:/c:GCG/140e:CCC/120100 80 60 4020 0 波長 500480460440420400380圖3 側鏈堿基對探針識別性能影響的考察Fig. 3. Fluorescence spectra of ATMND () in the presence of M1/S1 plex with different ?anking bases.這些結果表明，雖然在2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶和胞嘧啶堿基之間互補的氫鍵發(fā)揮了很重要的作用，但是缺口位點依然對熒光猝滅效率產生了影響。所以在GSMs中我們選擇和的GS缺口位點。在紫外線范圍內的CD光譜可以用來監(jiān)測DNA的構象轉變。如果確定的構象發(fā)生變化，結合后的2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶在M1／S1復雜的莖部分的缺口位點，鎘的實驗進行了M1/S1復雜之前和之后的2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶結合。在沒有2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶和遺傳微粒時，M1/S1分子結構的復合物顯示在250nm處取得負峰值，在275nm處取得正峰值，這是在一個莖部分的螺旋特征的β構象。而添加2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶后，在M1/S1/2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶沒有觀察到明顯的復雜誘導CD（GSMBs）,表明2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶與胞嘧啶堿基的結合，莖的部分的缺口位點不誘導M1／S1復雜的的構象變化。因此，它不影響靶DNA的雜交動力學。我們推斷在250nm處的CD峰值的增加是由于GSMB環(huán)遺傳微粒的長螺旋線形成的。 使用非標記分子信標檢測目標DNA由于2氨基5,6,7三甲基1,8萘啶的熒光猝滅效率與濃度和M1/S1分子結構有關系，為了優(yōu)化條件，我們選擇2μM的濃度，實現了良好的靈敏度。在最佳條件下，在校準曲線的基礎上獲得三組平均測量值（圖4）。220200熒光強度1802μM160140 12050nM1008060 40 200 500480460440420400360
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