【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 enum對(duì)果實(shí)采后真菌病害抑制機(jī)理研究第三章 海洋酵母R. paludigenum對(duì)果實(shí)采后真菌病害抑制機(jī)理研究 前言利……。 主要儀器TH3560全自動(dòng)滅菌鍋 造鑫(TSAO HSIN)企業(yè)有限公司 SWCJ1F超凈工作臺(tái) 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司SIGMA 3K15離心機(jī) 德國(guó)希格瑪（SIGMA）公司QYC211全溫空氣搖床 上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司Sartrious電子天平 北京賽多利斯天平有限公司200 ml、1000 ml、5ml移液器 德國(guó)Eppendorf公司 血球計(jì)數(shù)板（2516） 上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠光學(xué)顯微鏡 日本奧林巴斯有限公司LRH250生化培養(yǎng)箱 上海一恒科技有限公司酶標(biāo)儀 美國(guó)分子儀器公司（MDA）。 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備。 果實(shí)選擇與預(yù)處理。 幾丁質(zhì)對(duì)R. paludigenum生防機(jī)理的影響 幾丁質(zhì)對(duì)R. paludigenum在果實(shí)傷口處生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的影響用……。. paludigenum對(duì)果實(shí)誘導(dǎo)抗性的影響參照de Capdeville等（2002）、Droby等（2002）和El Ghaouth等（2003）的方法進(jìn)行蘋果果實(shí)傷口系統(tǒng)抗性的誘導(dǎo)試驗(yàn)。果……。. paludigenum發(fā)酵上清液的抑菌效果用……。. paludigenum對(duì)果實(shí)POD酶活性的影響每個(gè)處理選取6個(gè)果實(shí)，置于塑料筐中，共3個(gè)重復(fù)?！?。稱取3 g果實(shí)組織加入5 mL冷(4℃)的50 mmol mmol l1 EDTA和1% PVPP PBS緩沖液(PH )?！?。（peroxidase, POD）活性測(cè)定POD活性采用愈創(chuàng)木酚方法測(cè)定（Lurie et al., 1997），……。 數(shù)據(jù)處理分析與作圖采用SPSS軟件(Statistical Product and Service Solutions)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，數(shù)據(jù)采用ANOVA進(jìn)行鄧肯氏差異分析方法（取p）。 結(jié)果. paludigenum在果實(shí)傷口處生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的影響當(dāng)接種菌懸液濃度為1106 cells/mL時(shí)，在0~24 h內(nèi)，兩處理組的生長(zhǎng)速率及菌體總量均無顯著性差異，但24 h后，幾丁質(zhì)處理組在生長(zhǎng)速率及菌體總量方面顯著提高（圖31）。……。圖31 幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后1106 cells/mL R. paludigenum在蘋果果實(shí)傷口處的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)Fig. 31 Population dynamics of R. paludigenum in wounds of apples incubated at 25℃. Wounds were treated with 50ml of 1106cells/mL washed cell suspension of R. paludigenum alone. Bars represent standard errors of three replications. * Symbols indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range test.圖32 幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后1107 cells/mL R. paludigenum在蘋果果實(shí)傷口處的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)Fig. 32 Population dynamics of R. paludigenum in wounds of apples incubated at 25℃. Wounds were treated with 50ml of 1107 cells/mL washed cell suspension of R. paludigenum alone. Bars represent standard errors of three replications. * Symbols indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range test.. paludigenum對(duì)果實(shí)誘導(dǎo)抗性的影響試驗(yàn)表明（圖33和34），經(jīng)NYDB和NYCB培養(yǎng)的R. paludigenum 均可以誘導(dǎo)蘋果果實(shí)對(duì)病原菌的抗性，而且經(jīng)過NYCB培養(yǎng)的酵母，其對(duì)果實(shí)抗性的誘導(dǎo)作用增強(qiáng)。圖33幾丁質(zhì)培養(yǎng)后R. paludigenum對(duì)蘋果誘導(dǎo)抗性的增強(qiáng)效應(yīng)（發(fā)病率）Fig. 33 Incidence of blue mold decay caused by Penicillium expansum on apples inoculated with R. paludigenum cultivation in NYDB or NYDB amended with chitin powder at % on induction of resistance to blue mold rots in apple fruit. Bars represent standard errors. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range test.圖34幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后R. paludigenum對(duì)蘋果抗性的增強(qiáng)效應(yīng)（病斑直徑）Fig. 34 Severity of blue mold decay caused by Penicillium expansum on apples inoculated with R. paludigenum cultivation in NYDB or NYDB amended with chitin powder at % on induction of resistance to blue mold rots in apple fruit. Bars represent standard errors. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range test.. paludigenum發(fā)酵上清液的抑菌效果 如圖35所示，R. paludigenum 在NYDB中培養(yǎng)后的上清液沒有抑菌效力，反而有促進(jìn)效果?！?。圖 35 幾丁質(zhì)培養(yǎng)R. paludigenum 后的發(fā)酵上清液對(duì)蘋果青霉病的抑制Fig. 35 Effect of culture filtrate of R. paludigenum after cultivation in NYDB or NYDB amended with chitin powder at % on reduction of lesion diameter of Penicillium expansum in apple fruit wounds. Bars represent standard errors. Different letter indicates significant differences (P ) according to the Duncan39。s multiple range tests. 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后R. paludigenum對(duì)果實(shí)POD酶活性的影響試驗(yàn)結(jié)果（見圖36）顯示，……。圖36 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后的酵母R. paludigenum對(duì)蘋果POD活性的影響Fig. 36 Effects of R. paludigenum cultivation in NYDB or NYDB amended with chitin powder at % on the peroxidase activity in apple fruit. Bars represent standard errors of three replications. 討論為進(jìn)一步明確幾丁質(zhì)提高酵母拮抗效力的機(jī)理，本試驗(yàn)對(duì)幾丁質(zhì)培養(yǎng)后R. paludigenum的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)、發(fā)酵上清液的抑菌性,果實(shí)抗性的誘導(dǎo)和果實(shí)POD酶的激活活等進(jìn)行了研究?！?。哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 第四章 本論文的主要結(jié)果及展望第四章 結(jié)果與展望 本論文的主要研究結(jié)果（1）試驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后，R. paludigenum的果實(shí)采后青霉病害生物防治效果得到顯著提高。其機(jī)理可能與幾丁質(zhì)誘導(dǎo)培養(yǎng)后能促進(jìn)R. paludigenum 在果實(shí)傷口處的生長(zhǎng)、分泌抑菌物質(zhì)和誘導(dǎo)果實(shí)抗性的能力有關(guān)。（2）幾丁質(zhì)對(duì)R. %（w/v），最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間為36~48 h。此外，試驗(yàn)結(jié)果表明，幾丁質(zhì)誘導(dǎo)培養(yǎng)與NaCl誘導(dǎo)培養(yǎng)之間并不存在協(xié)同增效作用。（3）R. paludigenum 在NYDB中培養(yǎng)后的上清液沒有抑菌效力，反而有促進(jìn)效果。而在添加幾丁質(zhì)的培養(yǎng)基培養(yǎng)后，R. paludigenum的發(fā)酵上清液顯示了出對(duì)擴(kuò)展青霉在蘋果果實(shí)傷口處侵染一定的抑制作用。這一結(jié)果暗示幾丁質(zhì)可能刺激R. paludigenum分泌了抑菌相關(guān)物質(zhì)，其確切機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。（4）果實(shí)誘導(dǎo)抗性試驗(yàn)結(jié)果表明，R. paludigenum能激發(fā)蘋果果實(shí)對(duì)青霉病的抗性，而經(jīng)NYCB培養(yǎng)基培養(yǎng)的酵母能進(jìn)一步顯著增強(qiáng)這種對(duì)果實(shí)抗性的誘導(dǎo)作用。其機(jī)理可能與激發(fā)蘋果果實(shí)傷口處組織的POD酶活性有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)的后續(xù)研究及展望本論文僅對(duì)幾丁質(zhì)誘導(dǎo)后，R. paludigenum 酵母的生防活性、最佳誘導(dǎo)條件誘導(dǎo)機(jī)理，包括促進(jìn)酵母菌生長(zhǎng)、分泌抗菌物質(zhì)和誘導(dǎo)抗性等進(jìn)行了初步研究。酵母及果實(shí)內(nèi)部具體分子作用機(jī)理，例如,基因組功能及表達(dá)、信號(hào)通路作用關(guān)系、蛋白激活等作用機(jī)制并不清楚。所以具體作用機(jī)制有待后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行揭示分析，以增強(qiáng)生物防治的效果。鑒于生防酵母的拮抗效力可能不是由一個(gè)或幾個(gè)蛋白、基因或其它因子所決定，而更可能是由多種、甚至數(shù)十種或更多的蛋白綜合作用的結(jié)果（Massart和Jijakli，2006），因此利用基因組學(xué)和蛋白組學(xué)技術(shù)對(duì)拮抗酵母全基因組或蛋白組的動(dòng)態(tài)變化開展全面的分析和比較研究是十分有必要的，以期進(jìn)一步揭示酵母的拮抗機(jī)理，并全面篩選和鑒定與酵母拮抗機(jī)理密切相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)。Massart和Jijakli（2006）利用比較基因組學(xué)技術(shù)（cDNAAFLP）獲得了用病原菌細(xì)胞壁提取物培養(yǎng)采后拮抗酵母（P. anomala）后的一些差異基因，包括細(xì)胞壁代謝相關(guān)的基因，本實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備采用蛋白組學(xué)和基因組學(xué)相關(guān)技術(shù)，系統(tǒng)全面地篩選并鑒定與拮抗酵母生防效力相關(guān)的蛋白和基因，通過研究拮抗酵母內(nèi)在的生理和分子機(jī)制及其與生防效力的關(guān)系，更好地闡明拮抗酵母的作用機(jī)制，為明確其作用模式提供新的認(rèn)識(shí)，為探索提高其生防效力的途徑提供新的思路，并為今后利用生物工程技術(shù)手段對(duì)拮抗酵母進(jìn)行定向改造進(jìn)一步提高其生防效力提供理論基礎(chǔ)。哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文 致 謝小四宋體小二黑體居中致 謝歲月匆匆，時(shí)光荏苒，轉(zhuǎn)瞬間四年的大學(xué)生活即將結(jié)束。在臨近畢業(yè)之際，我在此對(duì)四年中教導(dǎo)過、激勵(lì)過、幫助過我的人再次說一聲感謝：是你們傳授給我知識(shí)與教授于我文化；是你們?cè)谖依щy時(shí)，為我排憂解難，在我快樂時(shí)，與我一同分享；是你們教會(huì)了我怎樣在人生的道路上繼續(xù)奔跑。首先，我要感謝在本科學(xué)習(xí)、實(shí)驗(yàn)和生活期間給予我精心指導(dǎo)、悉心指教和溫暖關(guān)懷的闞光鋒副教授。他淵博的專業(yè)知識(shí)，嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，精益求精的工作作風(fēng)，誨人不倦的高尚師德，嚴(yán)以律己、寬以待人的崇高風(fēng)范，樸實(shí)無華、平易近人的人格魅力對(duì)我影響深遠(yuǎn)；其次，感謝在平時(shí)的工作和學(xué)習(xí)中給予我耐心指導(dǎo)和許多幫助的曹競(jìng)老師，作為位良師益友，他們?yōu)槲椰F(xiàn)在和以后的道路打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。感謝浙江大學(xué)鄭曉冬教授在我畢業(yè)實(shí)習(xí)期間，在學(xué)業(yè)、實(shí)驗(yàn)和生活上給予的悉心指導(dǎo)和無私幫助；感謝余挺副教授從論文選題到文章定稿過程中給與的悉心細(xì)致的教誨和無私的幫助，整個(gè)實(shí)驗(yàn)的每一步都是在他的指導(dǎo)下完成的，傾注了余挺老師大量的時(shí)間和精力；同時(shí)感謝盧黃娉師姐在我實(shí)驗(yàn)實(shí)際操作及論文編寫過程中給與的極大幫助。感謝06級(jí)食品科學(xué)與工程專業(yè)的所有授課老師，是你們傳授我了知識(shí)，教會(huì)了我去學(xué)習(xí)。在你們的課程或?qū)嶒?yàn)上我獲得了很多；感謝王凱老師、趙婷老師在保研時(shí)給予的指導(dǎo)和幫助。在此，謹(jǐn)向以上各位老師表示崇高的敬意和衷心的感謝！感謝陪我走過四年大學(xué)生活的0607501班全體同學(xué)，謝謝你們?cè)?jīng)予我的信任和鼓勵(lì)，幫助和關(guān)懷，不管未來有多遙遠(yuǎn)，成長(zhǎng)的路上有你有我。不管相逢在什么時(shí)候，我們是永遠(yuǎn)的朋友；感謝在實(shí)習(xí)期間，浙江大學(xué)食品506實(shí)驗(yàn)室的王一非、殷赟、劉燕、任雪艷師姐，李漢林、陸蕾、王鵬、倪庚、唐飛師兄在實(shí)驗(yàn)和生活上給予的指導(dǎo)和幫助；感謝617寢室的兄弟們，感謝你們共享著我的快樂，分擔(dān)著我的悲傷；感謝我親愛的父母多年來對(duì)我的養(yǎng)育之恩和諄諄教誨，你們辛苦了。最后，再次感謝所有關(guān)心，幫助和支持我的老師、朋友和家人！謝謝大家！謝謝大家一路上陪我、幫助我?。　　　　　? 　路來風(fēng)哈爾濱工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文