freepeople性欧美熟妇, 色戒完整版无删减158分钟hd, 无码精品国产vα在线观看DVD, 丰满少妇伦精品无码专区在线观看,艾栗栗与纹身男宾馆3p50分钟,国产AV片在线观看,黑人与美女高潮,18岁女RAPPERDISSSUBS,国产手机在机看影片

正文內(nèi)容

農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的概述(編輯修改稿)

2024-07-24 08:27 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 上剪切下來,稱T鏈。切開TDNA后,VirD2蛋白與T一鏈的5’端共價結(jié)合,避免核酸外切酶降解T一鏈.新的TDNA底鏈以此鏈為模板,從右端產(chǎn)生的DNA缺口處以5’3’方向進(jìn)行合成。被取代的舊鏈游離出來,與許多VirE2蛋白分子結(jié)合組成TDNA復(fù)合體。此外,VirD2作為一個導(dǎo)向蛋白,可以指導(dǎo)整個TDNA復(fù)合體從農(nóng)桿菌進(jìn)入到植物細(xì)胞核。TDNA整合進(jìn)入植物基因組并表達(dá)產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng).TDNA整合進(jìn)宿主細(xì)胞基因組,是轉(zhuǎn)化過程中最重要也最關(guān)鍵的步驟。TDNA在寄主細(xì)胞染色體上的整合是隨機(jī)的,但對轉(zhuǎn)錄活化區(qū)域有所偏好。TDNA通過與事先斷裂的寄主DNA雙鏈(DSB)發(fā)生重組來完成整合,進(jìn)而進(jìn)行表達(dá)。3轉(zhuǎn)化方法 目前農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化單子葉植物最常用的方法是共培養(yǎng)法。利用農(nóng)桿菌與植物離體組織共培養(yǎng)進(jìn)行轉(zhuǎn)化,一般需要經(jīng)過嚴(yán)格的組織培養(yǎng)過程以再生植株,因而轉(zhuǎn)化周期比較長。共培養(yǎng)前農(nóng)桿菌感染愈傷組織的方式有:①將整塊愈傷組織浸泡于菌液中靜置培養(yǎng)。②將整塊愈傷組織浸泡于菌液中搖動培養(yǎng)。③將菌液加至愈傷組織上。通常使用的是第一種方式?,F(xiàn)將農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物遺傳轉(zhuǎn)化常采用的方法[9],簡要介紹如下:葉盤法 選取健康的無菌苗,用打孔器打出葉圓盤,將帶有新鮮傷口的葉圓盤與載有目的基因的農(nóng)桿菌液進(jìn)行短期共培養(yǎng),農(nóng)桿菌通過傷口使攜帶外源目的基因的Ti或Ri質(zhì)粒進(jìn)入植物細(xì)胞,使外源目的基因整合到植物基因組中。它是雙子葉植物較為常用也較為簡單有效的方法。 該法轉(zhuǎn)化的健壯植株倒置浸于裝有攜帶外源目的基因的農(nóng)桿菌滲入培養(yǎng)基的容器中,經(jīng)真空處理,造傷,使農(nóng)桿菌通過傷口感染植株,在農(nóng)桿菌的介導(dǎo)下,發(fā)生遺傳轉(zhuǎn)化。它是一種簡便、快速、可靠而且不需要經(jīng)過組織培養(yǎng)階段即可獲得大量轉(zhuǎn)化植株的基因轉(zhuǎn)移方法,具有良好的研究與應(yīng)用前景。原生質(zhì)體法 在原生質(zhì)培養(yǎng)的早期,將攜帶外源目的基因的農(nóng)桿菌與原生質(zhì)體共同培養(yǎng),農(nóng)桿菌的Ti或Ri就會隨著外源信號分子的誘導(dǎo)而導(dǎo)入原生質(zhì)體的核內(nèi),TDNA就可能整合在受體基因組上。此外,作為載體法,新的轉(zhuǎn)基因方法有:基于Ac/Ds轉(zhuǎn)座系統(tǒng)建立的轉(zhuǎn)化載體;利用噬菌體P1Crelox位點的特異性重組系統(tǒng);利用酵母線粒體IScel核酸內(nèi)切酶特異性誘導(dǎo)植物DNA雙鏈斷開引起的同源重組系統(tǒng);利用雙鏈細(xì)菌人造染色體載體系統(tǒng)等,能夠提高轉(zhuǎn)化率或轉(zhuǎn)基因位點質(zhì)量。4研究現(xiàn)狀關(guān)于禾谷類單子葉植物農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,早期的研究多采用其幼胚來評估不同條件下被農(nóng)桿菌侵染的可能性。結(jié)果顯示,TDNA向禾本科植物中的轉(zhuǎn)化沒有明顯障礙,但人們對整合過程的了解十分有限,同時存在相當(dāng)大的爭議。在此基礎(chǔ)上,人們利用大量實驗去測試不同谷類植物的不同外植體對農(nóng)桿菌侵染的反應(yīng)能力,以期獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化細(xì)胞或植株。Grimsley等(1987)首先將玉米條紋病毒(maizestreakvirus)的cDNA通過根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)入玉米,轉(zhuǎn)入植株表現(xiàn)出感染癥狀;Gould等(1991)用根癌農(nóng)桿菌感染玉米芽尖,得到少量轉(zhuǎn)基因植株;Shen等(1993)觀察到農(nóng)桿菌介導(dǎo)的gus基因轉(zhuǎn)入玉米芽后β葡糖苷酸酶的表達(dá);Mooney等(1991)采用根癌農(nóng)桿菌感染小麥胚得到轉(zhuǎn)化細(xì)胞;Rainer等(1990)和Chan等(1992)通過根癌農(nóng)桿
點擊復(fù)制文檔內(nèi)容
教學(xué)課件相關(guān)推薦
文庫吧 www.dybbs8.com
備案圖片鄂ICP備17016276號-1