【文章內(nèi)容簡介】 胰腺細(xì)小病毒，93年對蝦暴發(fā)性流行病促使對蝦病毒學(xué)成為了一個引人注目的研究領(lǐng)域。目前在我國已有可靠報道的對蝦病毒約4—5種，在對蝦皮下及造血組織壞死桿狀病毒(或稱白斑綜合癥病毒，WSSV)及肝胰腺細(xì)小病毒(HPV)的研究方面處于國際先進(jìn)水平。與國際上甲殼類病毒研究的特點(diǎn)類似，我國對蝦病毒也在組織病理學(xué)、分離純化、形態(tài)學(xué)研究、核酸和多肽特性、病毒的流行病學(xué)、感染特性及病癥、環(huán)境因子對發(fā)病的影響等方面的研究有較多的報道，有特色的研究在對蝦病毒的傳播途徑及病毒生態(tài)學(xué)方面，WSSV的基因組測序的進(jìn)展也較為顯著，其診斷和檢測技術(shù)與國際上的發(fā)展一致。在蟹類病毒研究方面，中華絨螯蟹顫抖病病毒有初步的研究結(jié)果。國外在貝類病毒病方面發(fā)現(xiàn)了約4—5種病毒，我國目前至少報道了兩種病毒：三角帆蚌瘟病和皺紋盤鮑病毒病，研究的水平都不算深入。 （2）水產(chǎn)動物細(xì)菌病研究 國外在水產(chǎn)動物細(xì)菌性疾病研究主要集中在嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌、魯氏耶爾森氏菌、鰻弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌等細(xì)菌病原的快速鑒定系統(tǒng)、選擇性培養(yǎng)基、血清學(xué)快速檢測技術(shù)、細(xì)菌性疾病的病理學(xué)、細(xì)菌的致病因子的致病機(jī)理及其基因結(jié)構(gòu)和表達(dá)、亞單位細(xì)菌疫苗、細(xì)胞壁多糖的免疫活性等的研究，在細(xì)菌耐藥性方面從魚類病原菌各種耐藥性的發(fā)生、發(fā)展到其機(jī)理研究均已逐步深入，分離并深入分析了耐藥性的遺傳因子：抗性質(zhì)粒的基因結(jié)構(gòu)、抗性譜等方面。此外，細(xì)菌的鑒定除快速鑒定系統(tǒng)外，還在16SrRNA、質(zhì)粒等方面發(fā)展了一系列分子生物學(xué)鑒定技術(shù)。我國對水產(chǎn)動物大多數(shù)細(xì)菌性疾病都有研究的報道，其中以主要淡水養(yǎng)殖魚類出血性敗血癥研究的最為系統(tǒng)和深入，其特色的研究是其分子毒素的結(jié)構(gòu)和致病機(jī)理；也報道了細(xì)菌性疾病病原的快速檢測方法和防治方法，建立了魚類出血性敗血癥細(xì)菌疫苗的生產(chǎn)工藝流程，并進(jìn)行了大規(guī)模的生產(chǎn)和推廣應(yīng)用；也對魚類細(xì)菌的個別質(zhì)粒的提取、分子結(jié)構(gòu)、抗性機(jī)理等進(jìn)行了較為深入的研究。（3） 水產(chǎn)動物寄生蟲病研究近些年國外有學(xué)者在水產(chǎn)動物寄生蟲的離體培養(yǎng)和疫苗研制等方面做了一些工作，特別是利用重組DNA技術(shù)研究寄生蟲病的基因工程疫苗顯示出了較大的潛力。開始了對小瓜蟲膜蛋白的純化及特性研究，進(jìn)一步探討這種抗原作為免疫原在免疫應(yīng)答中的作用；建立了鮭虱腸道蛋白抗原的基因文庫并進(jìn)行了表達(dá)，研究了該蛋白的免疫原性，在鮭虱腸道蛋白重組疫苗方面取得重大進(jìn)展，通過抗體破壞虱腸道功能，達(dá)到控制鮭虱病的目的。國內(nèi)在水產(chǎn)動物寄生蟲病的研究主要集中在病原的形態(tài)描述、分類地位確定、生活史及微生態(tài)學(xué)、流行病學(xué)以及防治方法等方面；我國在魚類單吸蟲等抗原及基因組的分子生物學(xué)研究方面比較深入，確定了抗原蛋白及其定位，構(gòu)建了部分基因文庫，研究了PCR和核酸探針檢測方法，為檢測和免疫防治提供了一定的理論基礎(chǔ)和實際應(yīng)用技術(shù)。 （4）水產(chǎn)動物疾病診斷技術(shù)的研究 水產(chǎn)動物疾病診斷技術(shù)的發(fā)展與相應(yīng)的病原研究的深入程度密切相關(guān)，近20年來，現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)檢測病毒、細(xì)菌性病害的發(fā)展非常迅速，主要有熒光抗體技術(shù)、免疫酶技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)等。由于上述檢測技術(shù)的靈敏度高、特異性強(qiáng)、實用性好等特點(diǎn)，在國外已成為多種水產(chǎn)動物病毒、細(xì)菌等病害的常規(guī)診斷方法。對鮭鱒魚、對蝦的主要病毒和細(xì)菌病原的相應(yīng)免疫學(xué)或分子生物學(xué)病原檢測技術(shù)多數(shù)都開發(fā)成了商品化的試劑盒。我國對虹鱒傳染性胰臟壞死癥、傳染性造血器官壞死癥、草魚出血病病毒、對蝦白斑綜合癥病毒、肝胰腺細(xì)小病毒、嗜水氣單胞菌毒素等進(jìn)行了單克隆抗體研制和相應(yīng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)或乳膠凝集實驗等快速檢測技術(shù)。對魚蝦貝類的一些病原細(xì)菌也建立了ELISA、熒光抗體、SPA協(xié)同凝集等檢測技術(shù)。對蝦病毒W(wǎng)SSV的核酸探針檢測技術(shù)及PCR檢測技術(shù)已形成了商品化的檢測試劑盒。（5）水產(chǎn)動物免疫學(xué)研究在魚類免疫學(xué)研究領(lǐng)域，近些年來國外的研究十分活躍并取得了極大的進(jìn)展，特別是在抗原分子結(jié)構(gòu)(包括病毒抗原、細(xì)菌抗原和寄生蟲抗原等)、免疫應(yīng)答機(jī)理、細(xì)胞免疫活性以及基因工程疫苗的研制方法和技術(shù)等方面取得了豐碩的研究成果。同時國外在魚蝦類免疫刺激劑及營養(yǎng)因素對特異性或非特異性免疫的影響方面也做了一些開創(chuàng)性的研究工作。在40年代，國外就開始應(yīng)用殺鮭氣單胞菌菌苗預(yù)防魚病，1975年癤瘡病疫苗首次在美國獲準(zhǔn)進(jìn)入商品化生產(chǎn)，近年來國外魚類疫苗發(fā)展十分迅速，日本研制了虹彩病毒的特效疫苗，美國成功研制出傳染性造血器官壞死癥基因工程疫苗，弧菌疫苗、癤瘡病菌苗、腐皮病菌苗、香魚假單胞菌疫苗、多子小瓜蟲病疫苗等等均已商品化。到目前為止，國外已批準(zhǔn)上市的魚類疫苗有近30種，在魚類病害的防治中發(fā)揮了極其重要的作用。國內(nèi)60年代便開展了免疫學(xué)技術(shù)在水產(chǎn)方面的研究。自1969年珠江所首次研制出滅活組織漿疫苗注射免疫草魚三大病(赤皮病、腸炎病、爛鰓病)獲得成功以來，我國魚類免疫防治在這近30年來有了一定的發(fā)展。陸續(xù)開展了草魚呼腸孤病毒、嗜水氣單胞菌、柱狀曲撓桿菌等病原體免疫學(xué)特性的研究，研制了淡水魚類細(xì)菌性敗血癥、草魚出血病、鱖魚爛鰓病、甲魚紅脖子病等的疫苗，并進(jìn)行了生產(chǎn)性防病試驗，獲得了一定的成功。全菌苗、菌細(xì)胞苗、滅活疫苗、弱毒疫苗、亞單位苗、基因工程疫苗、DNA疫苗等多種類型得到不斷深入的研究。除疫苗開發(fā)外，免疫途徑、免疫復(fù)活劑、營養(yǎng)與免疫的關(guān)系、抗病毒干擾素的誘生和檢測等方面的研究也有報道。目前已進(jìn)行草魚出血病病毒滅活細(xì)胞疫苗和減毒細(xì)胞疫苗的工廠化生產(chǎn)，免疫草魚成活率達(dá)85%以上，免疫力保持13個月以上，產(chǎn)生一定的經(jīng)濟(jì)效益。在無脊椎動物免疫學(xué)研究方面，蝦貝類的免疫學(xué)研究較為突出，目前公認(rèn)蝦貝類無特異性免疫機(jī)制。國外報道的蝦貝類非特異性免疫能力包括血淋巴凝結(jié)、黑化、細(xì)胞粘附、抗菌作用、活性氧形成、細(xì)胞吞噬作用等，體液的免疫因子報道的有酚氧化酶、溶菌酶等多種酶活力及凝集素、抗菌肽等，細(xì)胞免疫方面包括不同類型的淋巴細(xì)胞的發(fā)生和作用等，同時在免疫器官方面，對蝦淋巴器官的作用已逐步揭示，最新的研究觀察到了淋巴器官在TSV慢性感染過程中對病毒的消除作用。利用免疫促進(jìn)劑，如葡聚糖、肽聚糖等激活免疫系統(tǒng)的活性從而起到疾病預(yù)防的作用已在生產(chǎn)上得到越來越多的應(yīng)用。國內(nèi)對蝦貝類生物抗病力研究開展得較晚，最早在1990年黃海所對對蝦弧菌進(jìn)行了初步的疫苗研制和免疫研究，觀察到一定的免疫增強(qiáng)效果。近年來，我國研究者已初步明確了對蝦免疫的機(jī)制，掌握了血液中酚氧化酶、溶菌酶等的活力、血細(xì)胞吞噬活力等幾種非特異性免疫生理指標(biāo)。還開展了多糖類免疫活性物質(zhì)的研究，觀察到了一定的免疫促進(jìn)作用，其中幾種多糖類產(chǎn)品作為免疫增強(qiáng)劑已初步推向市場。此外，在對蝦健康生理與環(huán)境因子關(guān)系、干擾素或干擾素誘生劑與對蝦病毒感染關(guān)系等方面也開展了初步的探討。 （6）水產(chǎn)動物病害綜合防治研究水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的綜合防治對于疾病控制極為重要，北歐的鮭鱒魚養(yǎng)殖的發(fā)展歷史較早，其疾病的防治工作進(jìn)行的較為徹底，不但從苗種、免疫等角度加強(qiáng)魚體的抗病力，從養(yǎng)殖環(huán)境的改良、水質(zhì)調(diào)控、優(yōu)質(zhì)餌料、病原監(jiān)控方面均開展了綜合的健康管理工作。泰國在對蝦的病害方面進(jìn)行的綜合防治也頗具特色，形成了一套圍繞提高對蝦健康狀況、減少病原入侵機(jī)會、保證養(yǎng)殖環(huán)境清潔穩(wěn)定等開展工作的健康管理技術(shù)，使泰國的對蝦養(yǎng)殖未受到病毒病的干擾，產(chǎn)量躍居世界首位。當(dāng)前，多種用于水質(zhì)、環(huán)境改良的微生物制劑已在國際市場上越來越流行，國外水產(chǎn)養(yǎng)殖在起到疾病綜合防治作用的池塘改造和養(yǎng)殖設(shè)施等方面的固定資產(chǎn)投入已成為擴(kuò)大生產(chǎn)的首要部分之一。我國養(yǎng)殖魚類和對蝦病害的綜合防治工作也在不同程度地開展。經(jīng)過4—5年的攻關(guān)研究，在我國對蝦病毒病暴發(fā)依然猖獗的地區(qū)，采用水車式增氧機(jī)、高位水池蓄水式養(yǎng)殖在現(xiàn)階段對蝦養(yǎng)殖中取得了一定的預(yù)防疾病和實現(xiàn)產(chǎn)值的效果。病害綜合防治技術(shù)重點(diǎn)注重通過應(yīng)用免疫技術(shù)、優(yōu)質(zhì)飼料、生態(tài)環(huán)境優(yōu)化和穩(wěn)定技術(shù)提高宿主的抗病能力，同時在苗種、病原、環(huán)境等方面加強(qiáng)病原控制以減少感染機(jī)會達(dá)到對病害的防治目的。 （7）水生生物病害研究的實驗?zāi)Ｐ筒『ρ芯康膶嶒災(zāi)Ｐ蛯τ趯W(xué)科和技術(shù)的發(fā)展極為重要，醫(yī)學(xué)和陸生動植物已建立了包括動物實驗、組織培養(yǎng)和病原保藏中心等在內(nèi)的數(shù)百種標(biāo)準(zhǔn)實驗?zāi)Ｐ停@有力地促進(jìn)了醫(yī)學(xué)和陸生動植物病害研究的發(fā)展，而水生生物標(biāo)準(zhǔn)的實驗?zāi)Ｐ桶ńM織培養(yǎng)模型、實驗動物模型和病原庫相對來說為數(shù)極少。國外建立了60余株魚類細(xì)胞系，有近40種病毒采用細(xì)胞培養(yǎng)分離成功，多數(shù)水生生物的病原細(xì)菌也有標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物得到保存，已有近交超過50代的純系魚。而甲殼類等沒有傳代細(xì)胞系或標(biāo)準(zhǔn)實驗?zāi)Ｊ絼游锝?，對蝦的病毒病原在國外某些權(quán)威實驗室有較為全面的保存。我國長江水產(chǎn)研究所、珠江水產(chǎn)研究所等研究單位在草魚的組織培養(yǎng)方面已先后建立了ZC790CIK、CP8PSF等對草魚出血病病毒敏感的細(xì)胞株，魚類實驗?zāi)Ｊ絼游锏难芯抗ぷ髡谶M(jìn)行，珠江水產(chǎn)研究所已將劍尾魚純化培育到第18代，對蝦組織培養(yǎng)的研究也經(jīng)歷了近十年的努力，但其傳代細(xì)胞系仍未成功建立。 （8）漁用藥物的研究 國外一些國家在水產(chǎn)養(yǎng)殖中均使用抗菌素、消毒劑等類藥物，常見的有土霉素、氯霉素、呋喃類、甲醛、孔雀綠、口惡喹酸(Oxolinic Acid)、氟樂靈(trifluralin)、絡(luò)銅劑（CutrinePlus）、氧化鈣、次氯酸鈣、次氯酸鈉等。以上藥物雖被普遍使用，而在美國被食品和藥品管理局(FDA)及環(huán)境保護(hù)局(EPA)所正式批準(zhǔn)的藥物僅限于絡(luò)銅劑、碳酸氫鈉、乙酸、氧化鈣、次氯酸鈣等，有可能批準(zhǔn)的藥物有福爾馬林、土霉素、氟樂靈等。而孔雀綠、硝基呋喃和氯霉素等藥是被禁止使用的。盡管這幾種藥物的抗真菌或抗細(xì)菌能力很強(qiáng)，但它們對使用者和接受者均有較大的潛在性危害，因此必須研究它們的替代產(chǎn)品。國外已應(yīng)用的漁藥在研制階段均經(jīng)過了大量的基礎(chǔ)研究，通過長時間的藥效學(xué)、藥代動力學(xué)以及安全性試驗，并且利用高新技術(shù)對藥物的生產(chǎn)、使用進(jìn)行不斷改進(jìn)，從而得到比較穩(wěn)定、有效的病害防治效果。 我國漁用藥物的應(yīng)用和研究開始于50年代，在進(jìn)行淡水魚類養(yǎng)殖的過程中，應(yīng)用生石灰、硫酸銅和硫酸亞鐵合劑、孔雀綠、漂白粉等防治病害。漁藥的大量使用始于80年代水產(chǎn)養(yǎng)殖大規(guī)模興起以后，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)病害種類的增多和危害性的日趨嚴(yán)重，為了控制疾病的蔓延，減輕病害所造成的損失，養(yǎng)殖者從化學(xué)藥品及醫(yī)藥和獸藥中選擇了部分藥物用于生產(chǎn)，同時開始進(jìn)行水產(chǎn)藥物的開發(fā)和研制。國內(nèi)目前漁用藥物的研究主要集中在藥物對某種病原菌的殺滅效果或?qū)δ撤N疾病的防治效果，缺乏藥理、毒理、臨床試驗等方面的綜合研究。以上問題已成為制約我國漁用藥物深入研究、開發(fā)的瓶頸。 目前我國生產(chǎn)上現(xiàn)使用藥物大部分由獸藥移植來的，缺乏適合水生動物特點(diǎn)的專用漁藥。存在主要問題是：漁藥總體研究水平較低，缺少高新技術(shù)的應(yīng)用；藥物效果評價多靠經(jīng)驗，缺乏嚴(yán)格科學(xué)驗證，藥物篩選方法、手段落后，跟不上實際需要，缺少新的實驗方法和藥理模型；藥物制劑的研究成為限制藥效發(fā)揮的重要因素，處方單調(diào)、品種少，影響了藥物的大量使用；藥物的安全問題未受到普遍重視，藥物使用過程中漁農(nóng)為了挽回?fù)p失盲目用藥，對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生破壞作用，藥物殘留對食用者產(chǎn)生潛在危害（如重金屬鹽類、消毒劑對養(yǎng)殖生態(tài)中的有益生物產(chǎn)生的傷害作用，重金屬離子、殺蟲劑在水生生物體內(nèi)的富集作用等），對水產(chǎn)品的品質(zhì)造成了嚴(yán)重的后果；如果再不予以重視，從根本上解決水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的危害，那么其惡果將會直接威脅著人類的安全。另外一些毒副作用明顯的藥物如孔雀綠、汞鹽等在生產(chǎn)中仍然使用，缺乏有效替代藥物；由于藥物使用不規(guī)范，生產(chǎn)上各地均存在濫用藥物現(xiàn)象，為了防病多種藥物大劑量重復(fù)使用，結(jié)果使細(xì)菌發(fā)生基因突變或轉(zhuǎn)移，使部分病原生物產(chǎn)生抗藥性。%。人工分離的大西洋鮭癤瘡病病原菌殺鮭氣單胞菌55％的菌株對土霉素有抗性，37％的菌株對口惡喹酸有抗藥性；藥物的臨床試驗不嚴(yán)格，藥物代謝動力學(xué)內(nèi)容研究幾乎是空白，嚴(yán)重影響了藥物的安全、合理、有效使用。 近年來歐盟、日本等對我國水產(chǎn)品中的藥物殘留問題相當(dāng)重視，尤其是對己烯雌酚、類固醇類、氯霉素、磺胺類、抗生素、四環(huán)素族、口奎啉類和重金屬等含量十分敏感，控制很嚴(yán)。比如美國已宣布世界各地進(jìn)入美國的水產(chǎn)品必須符合美國食品與藥物檢驗局（FDA）頒布的HACCP（Hazard Analysis and Critical Control Point）規(guī)定，否則不準(zhǔn)進(jìn)口。歐盟和日本多次在我國進(jìn)口水產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)藥物殘留超過標(biāo)準(zhǔn)，也采取了一些制裁、索賠行動，嚴(yán)重影響了我國水產(chǎn)品的信譽(yù)。今后隨著國際貿(mào)易量的增加和對食品安全性要求的不斷提高，人工養(yǎng)殖過程中的藥物安全使用問題將日益受到有關(guān)方面的重視。 水產(chǎn)病害研究的發(fā)展趨勢目前水產(chǎn)動物疾病研究的發(fā)展趨勢主要集中在下列幾個方面：(1) 水產(chǎn)動物病原生物學(xué)研究病毒學(xué)研究將成為水產(chǎn)動物病原生物學(xué)的研究重點(diǎn)，在許多魚蝦貝藻的疾病中，更多的病毒種類將被發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識，除了對病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)、病原性、傳播途徑、核酸組成以及體外培養(yǎng)等方面開展研究外，深入的研究工作如病毒的感染機(jī)理、病毒基因組的結(jié)構(gòu)功能等將成為學(xué)科的前沿發(fā)展領(lǐng)域；此外在病原微生物學(xué)致病因子的分離、克隆與表達(dá)、致病機(jī)理、致病因子產(chǎn)生的外在與內(nèi)在條件研究等方面，在病原微生物耐藥質(zhì)粒的分離克隆、流行規(guī)律研究、質(zhì)粒消除劑或質(zhì)粒轉(zhuǎn)移抑制劑開發(fā)等也將成為研究的重點(diǎn)之一；分子生物學(xué)技術(shù)在病原生物的分類鑒定方面將得到更為廣泛的應(yīng)用。(2) 疾病的檢疫與病原的快速檢測國際上正在著手建立水產(chǎn)病害檢疫網(wǎng)絡(luò)和規(guī)范，其相關(guān)的病原快速檢測技術(shù)將得到不斷完善并規(guī)范化?，F(xiàn)代免疫學(xué)、分子生物學(xué)和生物化學(xué)等高新生物技術(shù)，如核酸探針、PCR、熒光抗體檢測技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)等在疾病診斷和病原生物檢測中將得到廣泛應(yīng)用，技術(shù)的商品化程度將大大提高；對病原生物核酸序列的掌握為核酸探針和PCR引物的人工合成提供越來越多的便利，基因工程抗體庫在水生生物病原的免疫學(xué)技術(shù)方面的應(yīng)用也將顯示出越來越明顯的優(yōu)勢；借助上述手段，檢測技術(shù)將能精細(xì)到對病原分類分型鑒定和致病因子的測定。(3) 綠色生物漁藥及免疫防治的研究基于改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境和宿主健康狀況的綠色生物漁藥或生物制劑在水產(chǎn)中的開發(fā)和應(yīng)用將逐步取代目前藥物濫用的局面，為水生生物病害防治提供重要的關(guān)鍵技術(shù)及產(chǎn)品，這類新型漁藥