【文章內(nèi)容簡介】 胰腺細小病毒，93年對蝦暴發(fā)性流行病促使對蝦病毒學成為了一個引人注目的研究領域。目前在我國已有可靠報道的對蝦病毒約4—5種，在對蝦皮下及造血組織壞死桿狀病毒(或稱白斑綜合癥病毒，WSSV)及肝胰腺細小病毒(HPV)的研究方面處于國際先進水平。與國際上甲殼類病毒研究的特點類似，我國對蝦病毒也在組織病理學、分離純化、形態(tài)學研究、核酸和多肽特性、病毒的流行病學、感染特性及病癥、環(huán)境因子對發(fā)病的影響等方面的研究有較多的報道，有特色的研究在對蝦病毒的傳播途徑及病毒生態(tài)學方面，WSSV的基因組測序的進展也較為顯著，其診斷和檢測技術與國際上的發(fā)展一致。在蟹類病毒研究方面，中華絨螯蟹顫抖病病毒有初步的研究結果。國外在貝類病毒病方面發(fā)現(xiàn)了約4—5種病毒，我國目前至少報道了兩種病毒：三角帆蚌瘟病和皺紋盤鮑病毒病，研究的水平都不算深入。 （2）水產(chǎn)動物細菌病研究 國外在水產(chǎn)動物細菌性疾病研究主要集中在嗜水氣單胞菌、愛德華氏菌、魯氏耶爾森氏菌、鰻弧菌、副溶血弧菌、創(chuàng)傷弧菌等細菌病原的快速鑒定系統(tǒng)、選擇性培養(yǎng)基、血清學快速檢測技術、細菌性疾病的病理學、細菌的致病因子的致病機理及其基因結構和表達、亞單位細菌疫苗、細胞壁多糖的免疫活性等的研究，在細菌耐藥性方面從魚類病原菌各種耐藥性的發(fā)生、發(fā)展到其機理研究均已逐步深入，分離并深入分析了耐藥性的遺傳因子：抗性質(zhì)粒的基因結構、抗性譜等方面。此外，細菌的鑒定除快速鑒定系統(tǒng)外，還在16SrRNA、質(zhì)粒等方面發(fā)展了一系列分子生物學鑒定技術。我國對水產(chǎn)動物大多數(shù)細菌性疾病都有研究的報道，其中以主要淡水養(yǎng)殖魚類出血性敗血癥研究的最為系統(tǒng)和深入，其特色的研究是其分子毒素的結構和致病機理；也報道了細菌性疾病病原的快速檢測方法和防治方法，建立了魚類出血性敗血癥細菌疫苗的生產(chǎn)工藝流程，并進行了大規(guī)模的生產(chǎn)和推廣應用；也對魚類細菌的個別質(zhì)粒的提取、分子結構、抗性機理等進行了較為深入的研究。（3） 水產(chǎn)動物寄生蟲病研究近些年國外有學者在水產(chǎn)動物寄生蟲的離體培養(yǎng)和疫苗研制等方面做了一些工作，特別是利用重組DNA技術研究寄生蟲病的基因工程疫苗顯示出了較大的潛力。開始了對小瓜蟲膜蛋白的純化及特性研究，進一步探討這種抗原作為免疫原在免疫應答中的作用；建立了鮭虱腸道蛋白抗原的基因文庫并進行了表達，研究了該蛋白的免疫原性，在鮭虱腸道蛋白重組疫苗方面取得重大進展，通過抗體破壞虱腸道功能，達到控制鮭虱病的目的。國內(nèi)在水產(chǎn)動物寄生蟲病的研究主要集中在病原的形態(tài)描述、分類地位確定、生活史及微生態(tài)學、流行病學以及防治方法等方面；我國在魚類單吸蟲等抗原及基因組的分子生物學研究方面比較深入，確定了抗原蛋白及其定位，構建了部分基因文庫，研究了PCR和核酸探針檢測方法，為檢測和免疫防治提供了一定的理論基礎和實際應用技術。 （4）水產(chǎn)動物疾病診斷技術的研究 水產(chǎn)動物疾病診斷技術的發(fā)展與相應的病原研究的深入程度密切相關，近20年來，現(xiàn)代生物學技術檢測病毒、細菌性病害的發(fā)展非常迅速，主要有熒光抗體技術、免疫酶技術、單克隆抗體技術、核酸雜交技術、聚合酶鏈反應(PCR)技術等。由于上述檢測技術的靈敏度高、特異性強、實用性好等特點，在國外已成為多種水產(chǎn)動物病毒、細菌等病害的常規(guī)診斷方法。對鮭鱒魚、對蝦的主要病毒和細菌病原的相應免疫學或分子生物學病原檢測技術多數(shù)都開發(fā)成了商品化的試劑盒。我國對虹鱒傳染性胰臟壞死癥、傳染性造血器官壞死癥、草魚出血病病毒、對蝦白斑綜合癥病毒、肝胰腺細小病毒、嗜水氣單胞菌毒素等進行了單克隆抗體研制和相應的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)或乳膠凝集實驗等快速檢測技術。對魚蝦貝類的一些病原細菌也建立了ELISA、熒光抗體、SPA協(xié)同凝集等檢測技術。對蝦病毒W(wǎng)SSV的核酸探針檢測技術及PCR檢測技術已形成了商品化的檢測試劑盒。（5）水產(chǎn)動物免疫學研究在魚類免疫學研究領域，近些年來國外的研究十分活躍并取得了極大的進展，特別是在抗原分子結構(包括病毒抗原、細菌抗原和寄生蟲抗原等)、免疫應答機理、細胞免疫活性以及基因工程疫苗的研制方法和技術等方面取得了豐碩的研究成果。同時國外在魚蝦類免疫刺激劑及營養(yǎng)因素對特異性或非特異性免疫的影響方面也做了一些開創(chuàng)性的研究工作。在40年代，國外就開始應用殺鮭氣單胞菌菌苗預防魚病，1975年癤瘡病疫苗首次在美國獲準進入商品化生產(chǎn)，近年來國外魚類疫苗發(fā)展十分迅速，日本研制了虹彩病毒的特效疫苗，美國成功研制出傳染性造血器官壞死癥基因工程疫苗，弧菌疫苗、癤瘡病菌苗、腐皮病菌苗、香魚假單胞菌疫苗、多子小瓜蟲病疫苗等等均已商品化。到目前為止，國外已批準上市的魚類疫苗有近30種，在魚類病害的防治中發(fā)揮了極其重要的作用。國內(nèi)60年代便開展了免疫學技術在水產(chǎn)方面的研究。自1969年珠江所首次研制出滅活組織漿疫苗注射免疫草魚三大病(赤皮病、腸炎病、爛鰓病)獲得成功以來，我國魚類免疫防治在這近30年來有了一定的發(fā)展。陸續(xù)開展了草魚呼腸孤病毒、嗜水氣單胞菌、柱狀曲撓桿菌等病原體免疫學特性的研究，研制了淡水魚類細菌性敗血癥、草魚出血病、鱖魚爛鰓病、甲魚紅脖子病等的疫苗，并進行了生產(chǎn)性防病試驗，獲得了一定的成功。全菌苗、菌細胞苗、滅活疫苗、弱毒疫苗、亞單位苗、基因工程疫苗、DNA疫苗等多種類型得到不斷深入的研究。除疫苗開發(fā)外，免疫途徑、免疫復活劑、營養(yǎng)與免疫的關系、抗病毒干擾素的誘生和檢測等方面的研究也有報道。目前已進行草魚出血病病毒滅活細胞疫苗和減毒細胞疫苗的工廠化生產(chǎn)，免疫草魚成活率達85%以上，免疫力保持13個月以上，產(chǎn)生一定的經(jīng)濟效益。在無脊椎動物免疫學研究方面，蝦貝類的免疫學研究較為突出，目前公認蝦貝類無特異性免疫機制。國外報道的蝦貝類非特異性免疫能力包括血淋巴凝結、黑化、細胞粘附、抗菌作用、活性氧形成、細胞吞噬作用等，體液的免疫因子報道的有酚氧化酶、溶菌酶等多種酶活力及凝集素、抗菌肽等，細胞免疫方面包括不同類型的淋巴細胞的發(fā)生和作用等，同時在免疫器官方面，對蝦淋巴器官的作用已逐步揭示，最新的研究觀察到了淋巴器官在TSV慢性感染過程中對病毒的消除作用。利用免疫促進劑，如葡聚糖、肽聚糖等激活免疫系統(tǒng)的活性從而起到疾病預防的作用已在生產(chǎn)上得到越來越多的應用。國內(nèi)對蝦貝類生物抗病力研究開展得較晚，最早在1990年黃海所對對蝦弧菌進行了初步的疫苗研制和免疫研究，觀察到一定的免疫增強效果。近年來，我國研究者已初步明確了對蝦免疫的機制，掌握了血液中酚氧化酶、溶菌酶等的活力、血細胞吞噬活力等幾種非特異性免疫生理指標。還開展了多糖類免疫活性物質(zhì)的研究，觀察到了一定的免疫促進作用，其中幾種多糖類產(chǎn)品作為免疫增強劑已初步推向市場。此外，在對蝦健康生理與環(huán)境因子關系、干擾素或干擾素誘生劑與對蝦病毒感染關系等方面也開展了初步的探討。 （6）水產(chǎn)動物病害綜合防治研究水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的綜合防治對于疾病控制極為重要，北歐的鮭鱒魚養(yǎng)殖的發(fā)展歷史較早，其疾病的防治工作進行的較為徹底，不但從苗種、免疫等角度加強魚體的抗病力，從養(yǎng)殖環(huán)境的改良、水質(zhì)調(diào)控、優(yōu)質(zhì)餌料、病原監(jiān)控方面均開展了綜合的健康管理工作。泰國在對蝦的病害方面進行的綜合防治也頗具特色，形成了一套圍繞提高對蝦健康狀況、減少病原入侵機會、保證養(yǎng)殖環(huán)境清潔穩(wěn)定等開展工作的健康管理技術，使泰國的對蝦養(yǎng)殖未受到病毒病的干擾，產(chǎn)量躍居世界首位。當前，多種用于水質(zhì)、環(huán)境改良的微生物制劑已在國際市場上越來越流行，國外水產(chǎn)養(yǎng)殖在起到疾病綜合防治作用的池塘改造和養(yǎng)殖設施等方面的固定資產(chǎn)投入已成為擴大生產(chǎn)的首要部分之一。我國養(yǎng)殖魚類和對蝦病害的綜合防治工作也在不同程度地開展。經(jīng)過4—5年的攻關研究，在我國對蝦病毒病暴發(fā)依然猖獗的地區(qū)，采用水車式增氧機、高位水池蓄水式養(yǎng)殖在現(xiàn)階段對蝦養(yǎng)殖中取得了一定的預防疾病和實現(xiàn)產(chǎn)值的效果。病害綜合防治技術重點注重通過應用免疫技術、優(yōu)質(zhì)飼料、生態(tài)環(huán)境優(yōu)化和穩(wěn)定技術提高宿主的抗病能力，同時在苗種、病原、環(huán)境等方面加強病原控制以減少感染機會達到對病害的防治目的。 （7）水生生物病害研究的實驗模型病害研究的實驗模型對于學科和技術的發(fā)展極為重要，醫(yī)學和陸生動植物已建立了包括動物實驗、組織培養(yǎng)和病原保藏中心等在內(nèi)的數(shù)百種標準實驗模型，這有力地促進了醫(yī)學和陸生動植物病害研究的發(fā)展，而水生生物標準的實驗模型包括組織培養(yǎng)模型、實驗動物模型和病原庫相對來說為數(shù)極少。國外建立了60余株魚類細胞系，有近40種病毒采用細胞培養(yǎng)分離成功，多數(shù)水生生物的病原細菌也有標準培養(yǎng)物得到保存，已有近交超過50代的純系魚。而甲殼類等沒有傳代細胞系或標準實驗模式動物建立，對蝦的病毒病原在國外某些權威實驗室有較為全面的保存。我國長江水產(chǎn)研究所、珠江水產(chǎn)研究所等研究單位在草魚的組織培養(yǎng)方面已先后建立了ZC790CIK、CP8PSF等對草魚出血病病毒敏感的細胞株，魚類實驗模式動物的研究工作正在進行，珠江水產(chǎn)研究所已將劍尾魚純化培育到第18代，對蝦組織培養(yǎng)的研究也經(jīng)歷了近十年的努力，但其傳代細胞系仍未成功建立。 （8）漁用藥物的研究 國外一些國家在水產(chǎn)養(yǎng)殖中均使用抗菌素、消毒劑等類藥物，常見的有土霉素、氯霉素、呋喃類、甲醛、孔雀綠、口惡喹酸(Oxolinic Acid)、氟樂靈(trifluralin)、絡銅劑（CutrinePlus）、氧化鈣、次氯酸鈣、次氯酸鈉等。以上藥物雖被普遍使用，而在美國被食品和藥品管理局(FDA)及環(huán)境保護局(EPA)所正式批準的藥物僅限于絡銅劑、碳酸氫鈉、乙酸、氧化鈣、次氯酸鈣等，有可能批準的藥物有福爾馬林、土霉素、氟樂靈等。而孔雀綠、硝基呋喃和氯霉素等藥是被禁止使用的。盡管這幾種藥物的抗真菌或抗細菌能力很強，但它們對使用者和接受者均有較大的潛在性危害，因此必須研究它們的替代產(chǎn)品。國外已應用的漁藥在研制階段均經(jīng)過了大量的基礎研究，通過長時間的藥效學、藥代動力學以及安全性試驗，并且利用高新技術對藥物的生產(chǎn)、使用進行不斷改進，從而得到比較穩(wěn)定、有效的病害防治效果。 我國漁用藥物的應用和研究開始于50年代，在進行淡水魚類養(yǎng)殖的過程中，應用生石灰、硫酸銅和硫酸亞鐵合劑、孔雀綠、漂白粉等防治病害。漁藥的大量使用始于80年代水產(chǎn)養(yǎng)殖大規(guī)模興起以后，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)病害種類的增多和危害性的日趨嚴重，為了控制疾病的蔓延，減輕病害所造成的損失，養(yǎng)殖者從化學藥品及醫(yī)藥和獸藥中選擇了部分藥物用于生產(chǎn)，同時開始進行水產(chǎn)藥物的開發(fā)和研制。國內(nèi)目前漁用藥物的研究主要集中在藥物對某種病原菌的殺滅效果或?qū)δ撤N疾病的防治效果，缺乏藥理、毒理、臨床試驗等方面的綜合研究。以上問題已成為制約我國漁用藥物深入研究、開發(fā)的瓶頸。 目前我國生產(chǎn)上現(xiàn)使用藥物大部分由獸藥移植來的，缺乏適合水生動物特點的專用漁藥。存在主要問題是：漁藥總體研究水平較低，缺少高新技術的應用；藥物效果評價多靠經(jīng)驗，缺乏嚴格科學驗證，藥物篩選方法、手段落后，跟不上實際需要，缺少新的實驗方法和藥理模型；藥物制劑的研究成為限制藥效發(fā)揮的重要因素，處方單調(diào)、品種少，影響了藥物的大量使用；藥物的安全問題未受到普遍重視，藥物使用過程中漁農(nóng)為了挽回損失盲目用藥，對生態(tài)環(huán)境產(chǎn)生破壞作用，藥物殘留對食用者產(chǎn)生潛在危害（如重金屬鹽類、消毒劑對養(yǎng)殖生態(tài)中的有益生物產(chǎn)生的傷害作用，重金屬離子、殺蟲劑在水生生物體內(nèi)的富集作用等），對水產(chǎn)品的品質(zhì)造成了嚴重的后果；如果再不予以重視，從根本上解決水產(chǎn)養(yǎng)殖病害的危害，那么其惡果將會直接威脅著人類的安全。另外一些毒副作用明顯的藥物如孔雀綠、汞鹽等在生產(chǎn)中仍然使用，缺乏有效替代藥物；由于藥物使用不規(guī)范，生產(chǎn)上各地均存在濫用藥物現(xiàn)象，為了防病多種藥物大劑量重復使用，結果使細菌發(fā)生基因突變或轉(zhuǎn)移，使部分病原生物產(chǎn)生抗藥性。%。人工分離的大西洋鮭癤瘡病病原菌殺鮭氣單胞菌55％的菌株對土霉素有抗性，37％的菌株對口惡喹酸有抗藥性；藥物的臨床試驗不嚴格，藥物代謝動力學內(nèi)容研究幾乎是空白，嚴重影響了藥物的安全、合理、有效使用。 近年來歐盟、日本等對我國水產(chǎn)品中的藥物殘留問題相當重視，尤其是對己烯雌酚、類固醇類、氯霉素、磺胺類、抗生素、四環(huán)素族、口奎啉類和重金屬等含量十分敏感，控制很嚴。比如美國已宣布世界各地進入美國的水產(chǎn)品必須符合美國食品與藥物檢驗局（FDA）頒布的HACCP（Hazard Analysis and Critical Control Point）規(guī)定，否則不準進口。歐盟和日本多次在我國進口水產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)藥物殘留超過標準，也采取了一些制裁、索賠行動，嚴重影響了我國水產(chǎn)品的信譽。今后隨著國際貿(mào)易量的增加和對食品安全性要求的不斷提高，人工養(yǎng)殖過程中的藥物安全使用問題將日益受到有關方面的重視。 水產(chǎn)病害研究的發(fā)展趨勢目前水產(chǎn)動物疾病研究的發(fā)展趨勢主要集中在下列幾個方面：(1) 水產(chǎn)動物病原生物學研究病毒學研究將成為水產(chǎn)動物病原生物學的研究重點，在許多魚蝦貝藻的疾病中，更多的病毒種類將被發(fā)現(xiàn)和認識，除了對病毒的形態(tài)結構、病原性、傳播途徑、核酸組成以及體外培養(yǎng)等方面開展研究外，深入的研究工作如病毒的感染機理、病毒基因組的結構功能等將成為學科的前沿發(fā)展領域；此外在病原微生物學致病因子的分離、克隆與表達、致病機理、致病因子產(chǎn)生的外在與內(nèi)在條件研究等方面，在病原微生物耐藥質(zhì)粒的分離克隆、流行規(guī)律研究、質(zhì)粒消除劑或質(zhì)粒轉(zhuǎn)移抑制劑開發(fā)等也將成為研究的重點之一；分子生物學技術在病原生物的分類鑒定方面將得到更為廣泛的應用。(2) 疾病的檢疫與病原的快速檢測國際上正在著手建立水產(chǎn)病害檢疫網(wǎng)絡和規(guī)范，其相關的病原快速檢測技術將得到不斷完善并規(guī)范化?，F(xiàn)代免疫學、分子生物學和生物化學等高新生物技術，如核酸探針、PCR、熒光抗體檢測技術、酶聯(lián)免疫技術等在疾病診斷和病原生物檢測中將得到廣泛應用，技術的商品化程度將大大提高；對病原生物核酸序列的掌握為核酸探針和PCR引物的人工合成提供越來越多的便利，基因工程抗體庫在水生生物病原的免疫學技術方面的應用也將顯示出越來越明顯的優(yōu)勢；借助上述手段，檢測技術將能精細到對病原分類分型鑒定和致病因子的測定。(3) 綠色生物漁藥及免疫防治的研究基于改善養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境和宿主健康狀況的綠色生物漁藥或生物制劑在水產(chǎn)中的開發(fā)和應用將逐步取代目前藥物濫用的局面，為水生生物病害防治提供重要的關鍵技術及產(chǎn)品，這類新型漁藥