枸杞甜菜堿含量測(cè)定方法的比較研究(編輯修改稿)
2025-07-19 04:31 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 5]等用分光光度法測(cè)定了糖蜜中的甜菜堿含量；朱桂花[26]等用此法在525nm處測(cè)定了枸杞半成品飲料中的甜菜堿含量，并應(yīng)用活性炭脫色法進(jìn)行了測(cè)定前處理，有效地去除了樣品中的干擾成分，提高了測(cè)定結(jié)果的精確度。高效液相色譜法作為一種現(xiàn)代分離分析技術(shù)，已逐漸應(yīng)用于中藥化學(xué)成分的分離分析和含量測(cè)定，在植物甜菜堿含量測(cè)定方面的應(yīng)用也日益廣泛[27－29]，但由于甜菜堿結(jié)構(gòu)中無(wú)共軛體系，僅能用折射儀檢測(cè)或在低紫外吸收波長(zhǎng)(190～220nm)測(cè)定，條件要求較高，且靈敏度或選擇性均不夠理想。因此，一般采用的高效液相色譜法都是對(duì)甜菜堿提取物進(jìn)行柱前衍生后測(cè)定的，此法破壞了甜菜堿提取物的原始成分[30]。Young等[31]報(bào)道采用NH2柱未經(jīng)衍生可直接測(cè)定北方枸杞甜菜堿的含量，方法快速、簡(jiǎn)便。本文擬利用甲醇加熱回流提取枸杞甜菜堿，通過(guò)比較分光光度法和NH2柱未經(jīng)衍生高效液相色譜法測(cè)定不同產(chǎn)地枸杞子中甜菜堿含量，驗(yàn)證NH2柱未經(jīng)衍生高效液相色譜法在枸杞甜菜堿含量測(cè)定上的可行性，為快速簡(jiǎn)便地測(cè)定枸杞甜菜堿含量提供方法依據(jù)。1．材料與器材（宋體，四號(hào)，一、二級(jí)標(biāo)題加粗）選擇寧夏枸杞“寧杞Ⅰ號(hào)”2005年夏季盛果期果實(shí)為材料，為盡可能減小田間管理水平對(duì)枸杞品質(zhì)的影響，在采樣時(shí)盡量選擇枸杞樹(shù)齡、植株密度、水肥條件、枝條修剪水平和成熟度一致的樣品。測(cè)定前樣品均在50℃恒溫條件下烘干至恒重。（宋體，小四，）乙腈為色譜純；甲醇、丙酮、鹽酸、雷氏鹽均為分析純；活性炭為化學(xué)純；甜菜堿對(duì)照品購(gòu)自Sigma公司。CBM20A高效液相色譜儀（日本島津公司）、SPD20A檢測(cè)器、二元梯度泵、江蘇漢邦LichrospherNH2250mm（5μm）色譜柱、LCSolution色譜工作站、MilliQ A10型純水儀(MILLIPORE)，PB303E電子天平（METTLERTOLEDO儀器公司）、北京長(zhǎng)源水浴控溫儀（北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）、R201D11旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）、SHBⅢ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）、T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）、回流裝置、G4垂熔漏斗、抽濾瓶、布氏漏斗、容量瓶。2．實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)原理[23,26]甜菜堿學(xué)名三甲基胺乙丙酯, 水解后與硫氰化鉻銨(雷氏鹽)生成紫紅色沉淀： C6H11O 2NH++[Cr(NH3)2(SCN)4]→C6H11O2NH[Cr(NH3)2(SCN)4]↓將甜菜堿與雷氏鹽在酸性條件下反應(yīng)制成雷氏鹽沉淀，并用70%丙酮溶解，呈粉紅色。在525nm處以70%丙酮作空白對(duì)照測(cè)定吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定被檢物中甜菜堿含量。 參考《中華人民共和國(guó)藥典》中枸杞甜菜堿的提取方法[22]，具體操作過(guò)程如下：，加80％甲醇50ml（料液比1：25），70～75℃回流提取1h，放冷濾過(guò)。用80％甲醇30ml分次洗滌殘?jiān)蜑V器，合并濾液和洗液，濃縮至10ml。用鹽酸調(diào)pH值至1，加熱煮沸，放冷，濾過(guò)。用水15ml分次洗滌，合并洗液與濾液，%雷氏鹽溶液20ml，攪勻，10℃以下放置3h。用G4垂熔漏斗濾過(guò)，沉淀用少量冰水洗滌，抽干，殘?jiān)?0％丙酮溶解，并轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，加70％丙酮至刻度，搖勻，即為枸杞甜菜堿供試品溶液。，蒸餾水溶解并定容于10mL容量瓶中， 。，，，冷水浴放置10min。％雷氏鹽溶液，然后用蒸餾水補(bǔ)充至刻度。冷水浴放置3h，G4垂熔漏斗過(guò)濾，用少量冰水洗沉淀，抽干，70％丙酮溶解沉淀，并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，用70％丙酮定容。以70％丙酮作空白對(duì)照，在525nm測(cè)定吸光度值。以其吸光度值（A）為橫坐標(biāo)，濃度(C)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得線性方程C =+，相關(guān)系數(shù)r=，～ml1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1所示。圖1 甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)曲線以70%丙酮為空白溶液，將供試品溶液于525nm處測(cè)定吸光度值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算枸杞甜菜堿百分含量。樣品甜菜堿含量計(jì)算公式：樣品甜菜堿含量(%)=C樣V樣/W樣100。其中：C樣————標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到的樣品濃度V樣————樣品溶液的體積W樣————樣品質(zhì)量參考Young等[31]利用高效液相色譜測(cè)定北方枸杞甜菜堿含量和聶國(guó)朝[32]利用高效液相色譜分析枸杞甜菜堿指紋圖譜的方法，對(duì)枸杞甜菜堿的色譜分析條件進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化，具體過(guò)程如下： 色譜分析條件通過(guò)對(duì)波長(zhǎng)、流動(dòng)相、流速、洗脫方式的優(yōu)化確定了枸杞甜菜堿提取物色譜分析條件為：乙腈：水（85：15）為流動(dòng)相；等度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)195nm；min－1；柱溫30℃；進(jìn)樣量5μL。 枸杞甜菜堿供試品溶液的制備，加入50ml純甲醇（料液比1：25），73℃～75℃加熱回流提取1h，放冷過(guò)濾， 30ml純甲醇分次洗滌殘?jiān)蜑V器，合并濾液和洗液，40℃減壓濃縮至干。超純水定容至10mL容量
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