【文章內(nèi)容簡介】 。. 校準計劃外的校準：如在檢測及EQA，IQC活動中發(fā)現(xiàn)存在結(jié)果漂移或偏差及其它可疑情況時，通過分析對可疑設(shè)備及時實施校準。. 移液器的校準順序：按照單一流向規(guī)定，對移液器的校準首先校準試劑準備區(qū)，然后依次為樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)。每校準完一個區(qū)的移液器，將其放回原處后，再取下一個區(qū)的移液器進行校準。. 校準安排在不進行樣本檢測的日期完成。. 校準的有效標(biāo)識：經(jīng)校準的設(shè)備加貼綠色標(biāo)簽，標(biāo)簽上應(yīng)標(biāo)明本次校準的日期和結(jié)果及下次校準的計劃預(yù)定日期。. 實驗室負責(zé)人員每年應(yīng)制定書面的各儀器設(shè)備的校準計劃，經(jīng)實驗室負責(zé)人批準后由各儀器設(shè)備責(zé)任人按計劃實施。. 校準結(jié)果的審批及記錄保存：每次校準的結(jié)果須及時送交中心質(zhì)量負責(zé)人審閱簽字。校準記錄須妥善保存于PCR實驗室三區(qū)直至設(shè)備報廢。實驗室檢測結(jié)果報告程序題目：實驗室檢測結(jié)果報告程序起草： 日期：審核：日期：編號：JSLJSMP0011000批準：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部1. 目的：檢測報告是過程的最終輸出，為使報告的生成、發(fā)放、管理受控，特制訂本程序。2. 適用范圍：本程序適用于本基因擴增檢驗實驗室所有臨床檢測項目的結(jié)果報告，只有經(jīng)PCR培訓(xùn)并獲得上崗證的工作人員才有權(quán)審核和簽發(fā)報告單。3. 程序. 檢測結(jié)果的報告應(yīng)準確、清晰、明確、客觀和及時，杜絕虛假報告。. 實時熒光PCR測定時，其檢測數(shù)據(jù)要經(jīng)過分析，避免因非特異性熒光而造成假陽性結(jié)果。根據(jù)質(zhì)控品判斷PCR擴增的有效性，只有當(dāng)質(zhì)控品的實驗數(shù)據(jù)在控時，才可發(fā)出報告，否則應(yīng)重新測定。. 定量結(jié)果報告以每毫升拷貝數(shù)（拷貝數(shù)/ml）報告，如結(jié)果高于測定方法線性范圍上限，則對樣本稀釋后再測，結(jié)果乘上稀釋倍數(shù)；如結(jié)果低于方法的線性范圍下限，則報告小于檢測下限。. 病人檔案及測定結(jié)果及病人檔案一并登記到實驗結(jié)果記錄表中，由室負責(zé)人管理所有病人資料。每份報告均應(yīng)由我實驗室出具；報告內(nèi)容至少應(yīng)包括：病人姓名、性別、年齡、樣本號、標(biāo)本特性、標(biāo)本狀態(tài)、標(biāo)本接收日期及測定項目、測定方法、結(jié)果、參考范圍以及操作者和審核者的簽名和檢測日期等內(nèi)容。否則視為無效或虛假報告單。以上記錄實行完整保存，至少保存2年以上。. 報告單應(yīng)及時發(fā)出。由送化驗單人員負責(zé)送往各送檢醫(yī)院。. 打印當(dāng)日檢測報告匯總表，存檔，妥善保存2年以上. 當(dāng)臨床科室醫(yī)生要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)先確認對方身份，核對其所查詢的病人姓名、病區(qū)床號等情況，方可報告，并明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準。. 當(dāng)患者要求電話報告結(jié)果時，應(yīng)讓患者提供病人基本信息后由送檢醫(yī)院科室負責(zé)人出面告知對方其檢測結(jié)果，并需明確告知對方，實驗的最終結(jié)果以檢測報告單為準。檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序題目：檢驗過程中發(fā)生故障時的應(yīng)急處理程序起草： 日期：審核：日期：編號：JSLJSMP0012000批準：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部1. 目的：為避免因儀器設(shè)備發(fā)生故障和試劑盒發(fā)生質(zhì)量問題而影響到臨床檢測報告的及時性和準確性，特制定本程序。2. 適用范圍：本程序適用于可能影響到檢測報告發(fā)出的儀器設(shè)備和試劑等，對于潛在著一定的可能影響檢測質(zhì)量的不確定因素，一旦發(fā)生，作為對應(yīng)措施，實驗室應(yīng)有一套相應(yīng)的應(yīng)急處理程序，室負責(zé)人有責(zé)任組織并直接監(jiān)督本程序的實施。3. 程序. 實驗室負責(zé)人接到儀器設(shè)備故障的報警后，立即現(xiàn)場確認異常情況的性質(zhì)和故障程度。. 儀器設(shè)備故障本室不能解決的，應(yīng)及時通知有關(guān)設(shè)備維修人員或供應(yīng)商，具體程序見儀器設(shè)備管理程序。對于發(fā)生故障的儀器設(shè)備，及時維修的同時，采取以下處理辦法。. 有滿足使用要求的替用設(shè)備的，啟用替用設(shè)備。. 可借用其他部門儀器設(shè)備時，核實該設(shè)備的使用狀態(tài)良好后可借用。. 替用、借用或備用設(shè)備的使用在滿足質(zhì)量要求的同時，必須同時滿足實驗室管理措施（特別是防污染）的要求。. 試劑盒質(zhì)量發(fā)生問題，經(jīng)核實后，及時通知供貨商更換另一批次試劑，使用前需先作質(zhì)量檢測，合格后方可使用。. 當(dāng)有樣本或反應(yīng)管破裂，并泄露于離心機內(nèi)或擴增儀時，應(yīng)停止工作，立即用浸有75%的乙醇消毒液的棉簽檫拭離心機或擴增儀，然后紫外燈照射30 min；將該破管的原始標(biāo)本按要求保存好與下一批標(biāo)本一起檢測。. 當(dāng)有樣本破裂,并泄露于工作臺面時,應(yīng)用棉簽吸干血清,并用浸有2g/L有效氯消毒液的毛巾覆蓋30 min后，清水擦干再用紫外線燈照射30 min。. 若質(zhì)控品出現(xiàn)問題，應(yīng)更換其他批次的質(zhì)控品。. 如果試劑配制與標(biāo)本處理過程中遇到停電狀況，把試劑、標(biāo)本先保存在冰箱里，等待電源來時再繼續(xù)操作。如果在擴增過程中遇到停電，實驗室內(nèi)部UPS將利用電池組供電，使PCR實驗操作完成。. 儀器設(shè)備故障或試劑質(zhì)量問題不能得到解決，預(yù)期將會影響到檢測報告的及時發(fā)出，可將標(biāo)本送至其它實驗室檢查（該實驗室同樣應(yīng)為獲同類認準的PCR檢測實驗室）；如已影響到報告的及時發(fā)出，應(yīng)向相關(guān)醫(yī)院公告，取得病人和醫(yī)生的諒解。. 影響到檢測報告發(fā)出的情況，應(yīng)在“應(yīng)急處理登記表”作記錄。實驗室清潔消毒程序題目：實驗室清潔消毒程序起草： 日期：審核：日期：編號：JSLJSMP0013000批準：日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部1. 目的：保證實驗室環(huán)境的整潔，防止污染。2. 適用范圍：適于實驗室工作環(huán)境、實驗臺面、工作服、移液器等的清潔消毒工作。所有實驗室工作人員應(yīng)熟知并遵守本程序，清潔工作可由實驗室指定人員進行。3. 操作程序. 消毒液配制. 配制2g/L有效氯消毒液：參照消毒劑說明書配制終濃度為2g/L有效氯消毒液。. 各實驗區(qū)的清潔消毒工具均專用，不可混用。所配制的消毒液只限在當(dāng)天內(nèi)使用，隔夜如使用時應(yīng)根據(jù)本SOP重新配制。. 紫外消毒. 紫外消毒須根據(jù)需要設(shè)定時間，通常為30 min，根據(jù)需要適當(dāng)延長時間。. 消毒結(jié)束后，關(guān)閉電源開關(guān)。. 實驗室消毒清潔程序. 每次實驗前一天和實驗結(jié)束后對各區(qū)進行全面消毒。包括實驗臺面、傳遞窗、地板。. 實驗過程中如發(fā)生標(biāo)本或試劑外濺，應(yīng)立即用含2g/L有效氯消毒液濕布覆蓋污染處30 min，再進行擦拭，隨后用清水擦洗，并作記錄。. 實驗結(jié)束后用含2g/L有效氯消毒液對臺面進行清潔，紫外燈照射30 min。. 實驗結(jié)束后，用移動紫外消毒車對工作臺面進行紫外照射30 min，并將傳遞窗紫外燈打開照射30 min。. 實驗結(jié)束后，開啟室內(nèi)紫外燈對實驗室進行紫外照射消毒至少30 min。. 實驗結(jié)束后，用含2g/L有效氯消毒液對各區(qū)所有儀器設(shè)備進行擦拭清潔。. 每次對使用過的移液器、鑷子用75%酒精棉球進行擦拭。. 每周將待清潔工作服高壓滅菌后洗滌消毒，不同實驗區(qū)的工作服隔天洗滌。題目：文件修改程序起草： 日期：審核： 日期：編號： JSLJSMP0014000批準： 日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部文件修改程序 ：保證文件完整性和有效性。 ：本實驗室管理體系的所有文件。：. 使用文件的操作人員在實驗過程中發(fā)現(xiàn)某個文件不適合實際工作，應(yīng)書面向室負責(zé)人提出申請。，文件即可修改。. 文件首次發(fā)行為第一版，當(dāng)文件有修改后，修改狀態(tài)用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，按4順序遞增，標(biāo)示在版號后。. 修改的文件經(jīng)中心負責(zé)人審核批準、所有要求的授權(quán)簽字均已履行后，文件即為正式發(fā)布，并同時生效執(zhí)行，原文件同時作廢。. 文件修改內(nèi)容的相關(guān)記錄由實驗室負責(zé)人保存。題目：石蠟包埋組織DNA提取標(biāo)準操作規(guī)程起草： 日期：審核： 日期：編號： JSLJSOP0001001批準： 日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部石蠟包埋組織DNA提取標(biāo)準操作規(guī)程1. 目的：采用細胞裂解和血紅素/蛋白沉淀技術(shù)，結(jié)合DNA 制備膜選擇性地吸附DNA ，以從石蠟包埋組織中提取高質(zhì)量的基因組DNA。2. 適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的DNA提取。3. 方法原理：利用細胞裂解液裂解細胞核釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附基因組DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及多糖等雜質(zhì)后，用純化液洗脫獲得基因組DNA。4. 實驗準備: . 儀器和試劑：水浴鍋，小型常溫高速離心機，細胞/組織基因組DNA（離心柱）提取試劑盒（百泰克）， ml離心管，20200181。l移液器及槍頭，1001000181。l移液器及槍頭。. 預(yù)備：實驗前10 min打開水浴鍋，調(diào)至56℃；另一水浴鍋調(diào)制90℃；本實驗操作過程在抽提專用實驗臺進行，穿實驗服，戴乳膠手套及口罩。漂洗液WB使用前確認加入無水乙醇，用記號筆在瓶上標(biāo)記。其余溶液TL或CB如果有結(jié)晶或者沉淀，請于37℃水浴重新溶解，并混勻。. 樣本確認：根據(jù)樣本登記表的信息對樣本進行確認，并確認樣本抽提類型、樣本質(zhì)量及是否足量等。5. 實驗步驟:. 組織脫蠟：開啟通風(fēng)櫥； ml離心管管蓋，用移液槍加入1 ml二甲苯，用刀片將58片10 μm厚的石蠟生物組織切片（蠟塊組織處理：在石蠟包埋組織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取510um厚的薄片，并保證剩余樣本表面平整，嚴禁使用摳取，粉碎，切除等操作破壞組織樣本；若是蠟卷，則直接用干凈的槍頭挑取適量樣本） ml離心管，密蓋，振蕩器振蕩30s；于離心機內(nèi)12000 rpm離心2 min，棄上清至專用廢液缸。注意不要棄掉沉淀。再加入1 ml無水乙醇，密蓋，再用振蕩器充分振蕩混勻；于離心機內(nèi)12000 rpm離心2 min，棄上清專用廢液缸。打開管蓋，于室溫或37℃干燥1015 min，至酒精完全揮發(fā)，備用。過程使用槍頭為一次性耗用物，不得反復(fù)使用。. 消化：加入200 181。l 裂解液TL，重懸沉淀，加入30 181。l蛋白酶K，混勻。置于64℃水浴鍋水浴1h（或直至樣品完全溶解），90℃水浴鍋水浴30min，短暫離心，試管壁上的溶液收集到管底。. 加入200 181。l 結(jié)合液CB，渦旋混勻，再加入100181。l異丙醇，漩渦震蕩充分混勻。短暫離心，試管壁上的溶液收集到管底。. 轉(zhuǎn)移溶液：將所有的溶液（不要沉淀）都轉(zhuǎn)移到一個吸附柱中，12000 rpm離心30s，倒去收集管中廢液。重新將吸附柱放回收集管中。. 洗滌：向吸附柱內(nèi)加入500 181。l 抑制物去除劑IR，棄槍頭，12000 rpm離心30s，倒掉收集管中廢液。 181。l 漂洗液WB，12000 rpm，離心30s，倒掉收集管中廢液，加500181。l 漂洗液WB，12000 rpm，離心30s，倒掉收集管中廢液。. 晾干吸附柱：空轉(zhuǎn)12000 rpm 2 min， ml離心管中，打開吸附柱蓋子，室溫放置2 min或以上以徹底晾干吸附材料中殘余的酒精。. 洗脫：向吸附膜中間加入65181。l的洗脫緩沖液EB（65℃預(yù)熱），室溫放置23 min，12000 rpm 離心1min，離心管中的液體即為抽提的基因組DNA。. 濃度測量：用分光光度計測量DNA濃度。：DNA濃度高于20ng/181。l，OD260/，可直接用于PCR等后續(xù)實驗,否則需重新抽提。若抽提好的DNA暫時不用，可置于20℃保存?zhèn)溆谩?. 關(guān)機及實驗臺整理：實驗完成后，關(guān)閉水浴鍋，所有用過的移液器調(diào)至最大量程，擺放整齊，所有用過的東西歸回原位。最后用75%酒精噴灑實驗臺面，2 min后擦拭干凈。8. 注意事項：試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標(biāo)簽說明在漂洗液WB中加入無水乙醇，并做好標(biāo)記；溶液使用后，應(yīng)避免長期暴露于空氣中，用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。剩余石蠟標(biāo)本在下次接收樣本時返還客服部，并由客服簽字確認。9. 參考文獻： 細胞、組織基因組DNA提取試劑盒說明書。（百泰克）題目：石蠟包埋組織樣本RNA提取標(biāo)準操作規(guī)程起草： 日期：審核： 日期：編號： JSLJSOP0002000批準： 日期：頒發(fā)部門：技術(shù)部生效日期：分發(fā)部門：技術(shù)部石蠟包埋組織樣本RNA提取標(biāo)準操作規(guī)程1. 目的：柱提法從石蠟包埋組織樣本中提取高質(zhì)量的RNA。2. 適用范圍：本程序適用于所有石蠟包埋組織樣品的RNA提取。3. 方法原理：改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA，然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗離心的步驟，漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的RNase free water將純凈RNA從硅基膜上洗脫。4. 實驗準備：. 儀器和試劑：通風(fēng)櫥，小型高速冷凍離心機；固定組織基因組RNA（離心柱）提取試劑盒(百泰克)溶液PTL，蛋白酶K，裂解液MRL，去蛋白液RE，漂洗液RW，RNasefree H2O,70%乙醇，RNasefree吸附柱，氯仿，收集管，移液器及槍頭。注意：所有接觸樣品的試劑、耗材均需保證無RNA酶，無菌，若發(fā)現(xiàn)可能存在污染，要立即更換。. 實驗前預(yù)備： 實驗前10 min打開冷凍離心機制冷，開啟水浴鍋；穿實驗服，戴一次性乳膠手套及口罩。 . 樣本確認：根據(jù)樣本登記表的信息對樣本進行確認，并確認樣本抽提類型、樣本質(zhì)量及是否足量等。5. 實驗步驟：. 組織脫蠟：打開通風(fēng)廚，用鑷子取出離心管，用移液槍加入1 ml二甲苯，并用刀片將510片10 μm厚的石蠟生物組織切片（蠟塊組織處理：在石蠟包埋組織樣品表面輕輕刮去不含組織的石蠟表層，再刮取510um厚的薄片，并保證剩余樣本表面平整，嚴禁使用扣取，粉碎，切除等操作破壞組織樣本；若是蠟卷，則直接用干凈的槍頭挑取適量樣本） ml離心管，棄切片至一次性垃圾桶。用振蕩器振蕩30sec；離心12000 rpm，2min，4℃。棄上清至專用液體垃圾桶。加入1 ml無水乙醇，棄槍頭；用振蕩器充分振蕩混勻，離心12000 rpm，2min，4℃。棄上清至專用液體