【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 (1+Ka [L]) N實(shí)際上表示被一個(gè)抗體分子結(jié)合的抗原分子平均數(shù)。（a）證明上面的方程可重排為N /[L]=KanKa N此方程式稱Scatchard方程，方程表明，N/[L]對(duì)N作圖將是一條直線。（b）根據(jù)Scatchard方程，利用下列數(shù)據(jù)作圖求出抗體抗原反應(yīng)的n和Ka值。[L] mol/LN105105105104104[（a）第一個(gè)方程兩邊各乘（1+Ka [L]），然后兩邊各除以[L]，并重排第2個(gè)方程；（b）根據(jù)第二方程，N/[L]對(duì)N作圖的斜率是Ka，N/[L]=0時(shí)的截距給出n。利用數(shù)據(jù)作圖得Ka =104 mol/L，n=。因?yàn)榻Y(jié)合部位數(shù)目只可能是整數(shù)，所以n=2]。（a） 估算在松弛和收縮時(shí)粗絲和細(xì)絲的重疊情況。（b） 一次循環(huán)中肌球蛋白沿細(xì)絲滑行“一步”，問一次收縮中每個(gè)肌動(dòng)蛋白纖維需要進(jìn)行多少個(gè)步？[（a），（b）約67步]解：（a）根據(jù)P281圖635A所示，當(dāng)松弛是重疊總長(zhǎng)度為：（1+1）（）= 當(dāng)收縮時(shí)重疊總長(zhǎng)度為：（1+1）（）= （b）（32）247。2103247?！?7步第七章 蛋白質(zhì)的分離、純化和表征習(xí)題%鐵，計(jì)算最低相對(duì)分子質(zhì)量。%%，問其最低相對(duì)分子質(zhì)量是多少？[13110；15870]解：（1）蛋白質(zhì)MV=247。%=13100 （2）亮氨酸和異亮氨酸的分子質(zhì)量都是131Da，根據(jù)兩種氨基酸的含量來看，異亮氨酸：亮氨酸=%：%=3：2，所以在此蛋白質(zhì)中的亮氨酸至少有兩個(gè)，異亮氨酸至少有三個(gè)，那么：%=2（13118）247。蛋白質(zhì)MV 蛋白質(zhì)MV=14581Da。，（1）計(jì)算角速度ω，以rad/s表示；（2）；（3）此離心加速度相當(dāng)于重力加速度“g”的多少倍？[（1）ω=（2）a=108cm/s2；（3）a=233061g]解：（1）ω=580002π/60= （2）a=（）2=108cm/s2 （3）108/=23316326,當(dāng)溫度校正為20℃，溶劑校正為水時(shí)擴(kuò)散系數(shù)（）107cm2/（）。20℃,根據(jù)斯維德貝格公式計(jì)算該蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。[13000]解：Mr=(RTs)/[D(1υρ)]=（273+20）[107（）]=13000（Vs）為流動(dòng)相體積（Vm）的1/5。假設(shè)某化合物的分配系數(shù)，（a）Kd=1；（b）Kd=50。計(jì)算該化合物的有效分配系數(shù)（Keff），也稱容量因子（capacity）。[（a）Keff=；(b)Keff=10]。分離蛋白質(zhì)的范圍是5000到400000；肌紅蛋白、過氧化氫酶、細(xì)胞色素C、肌球蛋白、胰凝乳蛋白酶原和血清清蛋白（它們的Mr見表74）。[肌球蛋白、過氧化氫酶、血清清蛋白、胰凝乳蛋白酶原、肌紅蛋白、細(xì)胞色素C]，從分子排阻層析柱上洗脫細(xì)胞色素C、β乳球蛋白和血清紅蛋白時(shí)，其洗脫體積分別為11537和24ml，問未知蛋白的Mr是多少？假定所有蛋白質(zhì)都是球形的，并且都處于柱的分級(jí)分離范圍。[52000]，下述蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中相哪個(gè)方向移動(dòng)，即向正極、負(fù)極還是不動(dòng)？（根據(jù)表72的數(shù)據(jù)判斷。）（1）血清蛋白，；（2）β乳球蛋白，；（3）胰凝乳蛋白酶原，、。[（1）正極；（2）負(fù)極、正極；（3）負(fù)極、不動(dòng)、正極]解：（1）卵清蛋白pI=，pH= 帶負(fù)電，向正極移動(dòng)； （2）β乳球蛋白pI=，pH= 帶正電，向負(fù)極移動(dòng)； pH= 帶負(fù)電，向正極移動(dòng)； （3）胰凝乳蛋白酶原pI=，pH= 帶正電，向負(fù)極移動(dòng)；pH==pI 凈電荷為零，不移動(dòng)；pH=11 帶負(fù)電，向正極移動(dòng)；8.（1）當(dāng)Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、哪些氨基酸移向正極？哪些氨基酸移向負(fù)極？（2）紙電泳時(shí)，帶有相同電荷的氨基酸常有少許分開，例如Gly可與Leu分開，試說明為什么？（3）設(shè)Ala、Val、Glu、試指出紙電泳后氨基酸的分離情況。PI值：Ala： Ser： Phe： Leu： Arg： Asp： His：[（1）Ala、Ser、Phe和Leu以及Arg和His向負(fù)極，Asp移向正極；（2）電泳時(shí)，具有相同電荷的較大分子比較小分子移動(dòng)得慢，因?yàn)殡姾?質(zhì)量之比較小，因而引起每單位質(zhì)量遷移的驅(qū)動(dòng)力也較小。（3）Glu移向正極，Lys移向負(fù)極,Val、Ala和Thr則留在原點(diǎn)。]？為什么？（BSA）稀釋液。對(duì)適當(dāng)?shù)目瞻诇y(cè)定595nm波長(zhǎng)處的光吸收（A595）。結(jié)果如下表所示：BSA濃度（mgL1）A595BSA濃度對(duì)A595作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。（）。[]解：標(biāo)準(zhǔn)曲線略。由標(biāo)準(zhǔn)曲線可知。第八章 酶通論習(xí)題？答：酶是細(xì)胞所產(chǎn)生的，受多種因素調(diào)節(jié)控制的具有催化能力的生物催化劑，與一般非生物催化劑相比較有以下幾個(gè)特點(diǎn)：酶易失活；具有很高的催化效率；具有高度專一性；酶活性受到調(diào)節(jié)和控制。？酶的專一性有哪些？如何解釋酶作用的專一性？研究酶的專一性有何意義？答：酶的專一性是指酶對(duì)催化的反應(yīng)和反映物有嚴(yán)格的選擇性。酶的專一性分為兩種類型：結(jié)構(gòu)專一性，包括絕對(duì)專一性、相對(duì)專一性（族專一性或基團(tuán)專一性、鍵專一性）；立體異構(gòu)專一性，包括旋光異構(gòu)專一性、幾何異構(gòu)專一性。通過對(duì)酶結(jié)構(gòu)與功能的研究，確信酶與底物作用的專一性是由于酶與底物分子的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)，誘導(dǎo)契合，通過分子的相互識(shí)別而產(chǎn)生的。對(duì)酶的專一性研究具有重要的生物學(xué)意義。它有利于闡明生物體內(nèi)有序的代謝過程，酶的作用機(jī)制等。，試說明之。答：酶的調(diào)節(jié)和控制有多種方式，主要有：（1） 調(diào)節(jié)酶的濃度：主要有2種方式：誘導(dǎo)或抑制酶的合成；調(diào)節(jié)酶的降解；（2） 通過激素調(diào)節(jié)酶活性、激素通過與細(xì)胞膜或細(xì)胞內(nèi)受體相結(jié)合而引起一系列生物學(xué)效應(yīng)，以此來調(diào)節(jié)酶活性；（3） 反饋抑制調(diào)節(jié)酶活性：許多小分子物質(zhì)的合成是由一連串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)合成的第一步的酶，往往被他們終端產(chǎn)物抑制；（4） 抑制劑和激活劑對(duì)酶活性的調(diào)節(jié)：酶受大分子抑制劑或小分子物質(zhì)抑制，從而影響酶活性；（5） 其他調(diào)節(jié)方式：通過別構(gòu)酶、酶原的激活、酶的可逆共價(jià)修飾和同工酶來調(diào)節(jié)酶活性。？在酶催化反應(yīng)種起什么作用？答：輔酶通常指與脫輔酶結(jié)合比較松弛的小分子有機(jī)物質(zhì)。通過透析方法可以除去，如輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ等。輔基是以共價(jià)鍵和脫輔酶結(jié)合，不能通過透析除去，需要經(jīng)過一定的化學(xué)處理才能與蛋白分開，如細(xì)胞色素氧化酶中的鐵卟啉，丙酮氧化酶中的黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）都屬于輔基。它們的區(qū)別只在于它們與脫輔酶結(jié)合的牢固程度不同。輔酶、輔基在酶催化反應(yīng)中通常是起著電子、原子或某些化學(xué)基團(tuán)的傳遞作用。？舉例說明酶的國際系統(tǒng)命名法及酶的編號(hào)。答：國際酶學(xué)委員會(huì)根據(jù)酶所催化反應(yīng)的類型，把酶分為６大類：即氧化還原酶類、轉(zhuǎn)移酶類、水解酶類、裂合酶類、異構(gòu)酶類和連接酶類。分別利用6來表示。例如：，作用于CHOH基團(tuán)，受體是分子氧。根據(jù)底物中別所用的基團(tuán)或鍵的特點(diǎn)將每一大類分為若干亞類，每一個(gè)亞類又按順序變成3……等數(shù)字；每一個(gè)亞基可再分亞亞類，仍用3……編號(hào)，每一個(gè)每的分類編號(hào)由4個(gè)數(shù)字組成，數(shù)字間由由“”隔開。第一個(gè)數(shù)字指明該酶屬于哪一個(gè)亞類；第三個(gè)數(shù)字指出該酶屬于一個(gè)亞亞類；第四個(gè)數(shù)字則表明該酶在亞亞類中的排號(hào)。編號(hào)之間冠以EC（Enzyme Commision）。？測(cè)定酶活力應(yīng)注意什么？為什么測(cè)定酶活力時(shí)以測(cè)定初速率為宜，并且底物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于酶濃度？答：酶活力指酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力，其大小可用在一定條件下所催化的某一化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)速率來表示；酶的比活力代表酶的純度，根據(jù)國際酶學(xué)委員會(huì)的規(guī)定比活力用每mg蛋白質(zhì)所含的酶活力單位數(shù)表示。酶的催化作用受測(cè)定環(huán)境的影響，因此測(cè)定酶活力要在最適條件下進(jìn)行，即最適溫度、最適pH、最適底物濃度和最適緩沖離子強(qiáng)度等。只有在最適條件下測(cè)定才能真實(shí)反映酶活力的大小。隨時(shí)間的延長(zhǎng)，酶促反應(yīng)中底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加，加速逆反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物對(duì)酶抑制或激活作用以及隨時(shí)間的延長(zhǎng)引起酶本身部分分子失活等，酶促反應(yīng)速率降低，因此測(cè)定活力，應(yīng)測(cè)定酶促反應(yīng)的初速率，從而避免上述種種復(fù)雜因素對(duì)反應(yīng)速率的影響。底物濃度太低時(shí)，5%以下的底物濃度變化實(shí)驗(yàn)上不易測(cè)準(zhǔn)，所以在測(cè)定酶的活力時(shí)，往往使第五濃度足夠大，這樣整個(gè)酶反應(yīng)對(duì)底物來說是零級(jí)反應(yīng)，而對(duì)酶來說卻是以及反應(yīng)，這樣測(cè)得的速率就比較可靠地反映酶的含量。？它們的發(fā)現(xiàn)有什么重要意義？答：具有催化功能的RNA叫核酶。它的發(fā)現(xiàn)，表明RNA是一種既能攜帶遺傳信息又有生物催化功能的生物分子。因此很可能RNA早于蛋白質(zhì)和DNA，是生命起源中首先出現(xiàn)的生物大分子，而一些有酶活性的內(nèi)含子可能是生物進(jìn)化過程中殘存的分子“化石”。酶RNA的發(fā)現(xiàn)，提出了生物大分子和生命起源的新概念，無疑促進(jìn)對(duì)生物進(jìn)化和生命起源的研究?？贵w酶是20實(shí)際80年代后期才出現(xiàn)的一種具有催化能力的蛋白質(zhì)，其本質(zhì)上是免疫球蛋白，但是在易變區(qū)被賦予了酶的屬性，所以又稱“催化性抗體”，抗體酶的發(fā)現(xiàn)，不僅為酶的過渡態(tài)理論提供了有力的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，而且抗體酶將會(huì)得到廣泛的應(yīng)用。：（1） 生物酶工程：酶學(xué)和以DNA重組技術(shù)為主的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。（2） 固定化酶：將水溶性酶用物理或化學(xué)方法處理，使之成為不溶于水的、但仍具有酶活性的狀態(tài)。（3） 活化能：在一定溫度下1mol底物全部進(jìn)入活化狀態(tài)所需要的自由能（kj/mol）（4） 酶的轉(zhuǎn)化數(shù)：在一定條件下每秒鐘每個(gè)酶分子轉(zhuǎn)換底物的分子數(shù)。（5） 寡聚酶：由兩個(gè)以上亞基組成的酶。（6） Kat單位：在最適條件下，酶秒鐘催化1mol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量，為Kat單位。（7） 酶偶聯(lián)分析法：由于分光光度法有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，因此把一些遠(yuǎn)類沒有光吸收變化的酶反應(yīng)，可以通過與一些能引起光吸收變化的酶反映偶聯(lián)使第一個(gè)酶反映的產(chǎn)物轉(zhuǎn)變成第二個(gè)酶的具有光吸收變化的產(chǎn)物來進(jìn)行測(cè)量。（8） 誘導(dǎo)契合說：1958年Koshland提出，當(dāng)酶分子與底物分子接近時(shí)，酶蛋白受底物分子誘導(dǎo)，其構(gòu)想發(fā)生有利于底物結(jié)合的變化，酶與底物在此基礎(chǔ)上互補(bǔ)契合進(jìn)行反應(yīng)。（9） 反饋抑制：許多小分子物質(zhì)的合成是由一聯(lián)串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)生成的第一步的酶，往往被它們終端產(chǎn)物抑制。這種抑制叫反饋抑制。（10） 多酶復(fù)合體：由幾種酶靠非共價(jià)鍵彼此嵌合而成。， AgNO3，求該酶的最低相對(duì)分子質(zhì)量。（Mr:92103）在最適條件下，試計(jì)算：（1）酶的比活力。[500U/mg]（2）轉(zhuǎn)換數(shù)。[]解：（1）比活力= （2）轉(zhuǎn)換數(shù)=1247。（1106/92103106）=，其轉(zhuǎn)換數(shù)為6104min1，試計(jì)算該酶在細(xì)胞內(nèi) 濃度（假設(shè)新鮮組織含水80%，并且全部在細(xì)胞內(nèi)）。[107 mol/L]解：1/610440247。（180%103）=[107 mol/L，其相對(duì)分子質(zhì)量為120103，由6個(gè)相同亞基組成。純酶的Vmax為2800U/mg酶。它的一個(gè)活力單位規(guī)定為：在標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定條件下，37℃、15min內(nèi)水解10μmol焦磷酸所需要的酶量。問：（1）酶mg酶在每秒鐘內(nèi)水解多少mol 底物？[105mol]。（2）每mg酶中有多少mol的活性部位（假設(shè)每個(gè)亞基上有一個(gè)活性部位）？[5108mol活性中心]。（3）酶的轉(zhuǎn)換數(shù)是多少？[622s1或622mol焦磷酸/（smol）酶活性中心]解：（1）280010/151/（60106）1=105 mol （2）1103/1201036=5108 mol （3）105247。1103/1201031/6=622，以酪蛋白為底物，用Folin酚比色法測(cè)定酶活力，得知每小時(shí)產(chǎn)生1500μg酪氨酸。另取2ml酶液，若以每分鐘產(chǎn)生1μg 酪氨酸的酶量為1個(gè)活力單位計(jì)算，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出：（1）1ml酶液中所含蛋白質(zhì)量及活力單位。[，250U]（2）比活力。[400U/mg蛋白質(zhì)]（3）1g酶制劑的總蛋白含量及總活力。[，105U]解：（1）247。（225/25）= 1500/60247。（25/25）=250U （2）250247。=400U/mg （3）247。（125/25）1103= 103mg= 1500/60247。（25/25）247。（125/25）103=105U，用水溶解成1000ml，從中取出1ml測(cè)定淀粉酶活力。計(jì)算每g酶制劑所含淀粉酶活力單位數(shù)？[3000U]（淀粉酶活力單位定義：在最適條件下每小時(shí)分解1g淀粉的酶量稱為1個(gè)活力單位）解：60247。（1/10001）=3000U，竟測(cè)定得到下列數(shù)據(jù)：試計(jì)算比活力、百分產(chǎn)量及純化倍數(shù)。[比活力：180U/mg蛋白質(zhì)，百分產(chǎn)量：17%，純化倍數(shù)：9倍]體積/ml活力單位/（U/ml）蛋白質(zhì)/（mg/ml）初提取液（NH4）2SO4鹽析1205200810104解：（1）810/=180U/mg （2）8105247。（200120）100%=17% （3）180247。（200/10）=9第九章 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)習(xí)題