【文章內容簡介】 (1+Ka [L]) N實際上表示被一個抗體分子結合的抗原分子平均數(shù)。（a）證明上面的方程可重排為N /[L]=KanKa N此方程式稱Scatchard方程，方程表明，N/[L]對N作圖將是一條直線。（b）根據(jù)Scatchard方程，利用下列數(shù)據(jù)作圖求出抗體抗原反應的n和Ka值。[L] mol/LN105105105104104[（a）第一個方程兩邊各乘（1+Ka [L]），然后兩邊各除以[L]，并重排第2個方程；（b）根據(jù)第二方程，N/[L]對N作圖的斜率是Ka，N/[L]=0時的截距給出n。利用數(shù)據(jù)作圖得Ka =104 mol/L，n=。因為結合部位數(shù)目只可能是整數(shù)，所以n=2]。（a） 估算在松弛和收縮時粗絲和細絲的重疊情況。（b） 一次循環(huán)中肌球蛋白沿細絲滑行“一步”，問一次收縮中每個肌動蛋白纖維需要進行多少個步？[（a），（b）約67步]解：（a）根據(jù)P281圖635A所示，當松弛是重疊總長度為：（1+1）（）= 當收縮時重疊總長度為：（1+1）（）= （b）（32）247。2103247?！?7步第七章 蛋白質的分離、純化和表征習題%鐵，計算最低相對分子質量。%%，問其最低相對分子質量是多少？[13110；15870]解：（1）蛋白質MV=247。%=13100 （2）亮氨酸和異亮氨酸的分子質量都是131Da，根據(jù)兩種氨基酸的含量來看，異亮氨酸：亮氨酸=%：%=3：2，所以在此蛋白質中的亮氨酸至少有兩個，異亮氨酸至少有三個，那么：%=2（13118）247。蛋白質MV 蛋白質MV=14581Da。，（1）計算角速度ω，以rad/s表示；（2）；（3）此離心加速度相當于重力加速度“g”的多少倍？[（1）ω=（2）a=108cm/s2；（3）a=233061g]解：（1）ω=580002π/60= （2）a=（）2=108cm/s2 （3）108/=23316326,當溫度校正為20℃，溶劑校正為水時擴散系數(shù)（）107cm2/（）。20℃,根據(jù)斯維德貝格公式計算該蛋白質的相對分子質量。[13000]解：Mr=(RTs)/[D(1υρ)]=（273+20）[107（）]=13000（Vs）為流動相體積（Vm）的1/5。假設某化合物的分配系數(shù)，（a）Kd=1；（b）Kd=50。計算該化合物的有效分配系數(shù)（Keff），也稱容量因子（capacity）。[（a）Keff=；(b)Keff=10]。分離蛋白質的范圍是5000到400000；肌紅蛋白、過氧化氫酶、細胞色素C、肌球蛋白、胰凝乳蛋白酶原和血清清蛋白（它們的Mr見表74）。[肌球蛋白、過氧化氫酶、血清清蛋白、胰凝乳蛋白酶原、肌紅蛋白、細胞色素C]，從分子排阻層析柱上洗脫細胞色素C、β乳球蛋白和血清紅蛋白時，其洗脫體積分別為11537和24ml，問未知蛋白的Mr是多少？假定所有蛋白質都是球形的，并且都處于柱的分級分離范圍。[52000]，下述蛋白質在電場中相哪個方向移動，即向正極、負極還是不動？（根據(jù)表72的數(shù)據(jù)判斷。）（1）血清蛋白，；（2）β乳球蛋白，；（3）胰凝乳蛋白酶原，、。[（1）正極；（2）負極、正極；（3）負極、不動、正極]解：（1）卵清蛋白pI=，pH= 帶負電，向正極移動； （2）β乳球蛋白pI=，pH= 帶正電，向負極移動； pH= 帶負電，向正極移動； （3）胰凝乳蛋白酶原pI=，pH= 帶正電，向負極移動；pH==pI 凈電荷為零，不移動；pH=11 帶負電，向正極移動；8.（1）當Ala、Ser、Phe、Leu、Arg、哪些氨基酸移向正極？哪些氨基酸移向負極？（2）紙電泳時，帶有相同電荷的氨基酸常有少許分開，例如Gly可與Leu分開，試說明為什么？（3）設Ala、Val、Glu、試指出紙電泳后氨基酸的分離情況。PI值：Ala： Ser： Phe： Leu： Arg： Asp： His：[（1）Ala、Ser、Phe和Leu以及Arg和His向負極，Asp移向正極；（2）電泳時，具有相同電荷的較大分子比較小分子移動得慢，因為電荷/質量之比較小，因而引起每單位質量遷移的驅動力也較小。（3）Glu移向正極，Lys移向負極,Val、Ala和Thr則留在原點。]？為什么？（BSA）稀釋液。對適當?shù)目瞻诇y定595nm波長處的光吸收（A595）。結果如下表所示：BSA濃度（mgL1）A595BSA濃度對A595作圖得標準曲線。（）。[]解：標準曲線略。由標準曲線可知。第八章 酶通論習題？答：酶是細胞所產(chǎn)生的，受多種因素調節(jié)控制的具有催化能力的生物催化劑，與一般非生物催化劑相比較有以下幾個特點：酶易失活；具有很高的催化效率；具有高度專一性；酶活性受到調節(jié)和控制。？酶的專一性有哪些？如何解釋酶作用的專一性？研究酶的專一性有何意義？答：酶的專一性是指酶對催化的反應和反映物有嚴格的選擇性。酶的專一性分為兩種類型：結構專一性，包括絕對專一性、相對專一性（族專一性或基團專一性、鍵專一性）；立體異構專一性，包括旋光異構專一性、幾何異構專一性。通過對酶結構與功能的研究，確信酶與底物作用的專一性是由于酶與底物分子的結構互補，誘導契合，通過分子的相互識別而產(chǎn)生的。對酶的專一性研究具有重要的生物學意義。它有利于闡明生物體內有序的代謝過程，酶的作用機制等。，試說明之。答：酶的調節(jié)和控制有多種方式，主要有：（1） 調節(jié)酶的濃度：主要有2種方式：誘導或抑制酶的合成；調節(jié)酶的降解；（2） 通過激素調節(jié)酶活性、激素通過與細胞膜或細胞內受體相結合而引起一系列生物學效應，以此來調節(jié)酶活性；（3） 反饋抑制調節(jié)酶活性：許多小分子物質的合成是由一連串的反應組成的，催化此物質合成的第一步的酶，往往被他們終端產(chǎn)物抑制；（4） 抑制劑和激活劑對酶活性的調節(jié)：酶受大分子抑制劑或小分子物質抑制，從而影響酶活性；（5） 其他調節(jié)方式：通過別構酶、酶原的激活、酶的可逆共價修飾和同工酶來調節(jié)酶活性。？在酶催化反應種起什么作用？答：輔酶通常指與脫輔酶結合比較松弛的小分子有機物質。通過透析方法可以除去，如輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ等。輔基是以共價鍵和脫輔酶結合，不能通過透析除去，需要經(jīng)過一定的化學處理才能與蛋白分開，如細胞色素氧化酶中的鐵卟啉，丙酮氧化酶中的黃素腺嘌呤二核苷酸（FAD）都屬于輔基。它們的區(qū)別只在于它們與脫輔酶結合的牢固程度不同。輔酶、輔基在酶催化反應中通常是起著電子、原子或某些化學基團的傳遞作用。？舉例說明酶的國際系統(tǒng)命名法及酶的編號。答：國際酶學委員會根據(jù)酶所催化反應的類型，把酶分為６大類：即氧化還原酶類、轉移酶類、水解酶類、裂合酶類、異構酶類和連接酶類。分別利用6來表示。例如：，作用于CHOH基團，受體是分子氧。根據(jù)底物中別所用的基團或鍵的特點將每一大類分為若干亞類，每一個亞類又按順序變成3……等數(shù)字；每一個亞基可再分亞亞類，仍用3……編號，每一個每的分類編號由4個數(shù)字組成，數(shù)字間由由“”隔開。第一個數(shù)字指明該酶屬于哪一個亞類；第三個數(shù)字指出該酶屬于一個亞亞類；第四個數(shù)字則表明該酶在亞亞類中的排號。編號之間冠以EC（Enzyme Commision）。？測定酶活力應注意什么？為什么測定酶活力時以測定初速率為宜，并且底物濃度遠遠大于酶濃度？答：酶活力指酶催化某一化學反應的能力，其大小可用在一定條件下所催化的某一化學反應的反應速率來表示；酶的比活力代表酶的純度，根據(jù)國際酶學委員會的規(guī)定比活力用每mg蛋白質所含的酶活力單位數(shù)表示。酶的催化作用受測定環(huán)境的影響，因此測定酶活力要在最適條件下進行，即最適溫度、最適pH、最適底物濃度和最適緩沖離子強度等。只有在最適條件下測定才能真實反映酶活力的大小。隨時間的延長，酶促反應中底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加，加速逆反應的進行，產(chǎn)物對酶抑制或激活作用以及隨時間的延長引起酶本身部分分子失活等，酶促反應速率降低，因此測定活力，應測定酶促反應的初速率，從而避免上述種種復雜因素對反應速率的影響。底物濃度太低時，5%以下的底物濃度變化實驗上不易測準，所以在測定酶的活力時，往往使第五濃度足夠大，這樣整個酶反應對底物來說是零級反應，而對酶來說卻是以及反應，這樣測得的速率就比較可靠地反映酶的含量。？它們的發(fā)現(xiàn)有什么重要意義？答：具有催化功能的RNA叫核酶。它的發(fā)現(xiàn)，表明RNA是一種既能攜帶遺傳信息又有生物催化功能的生物分子。因此很可能RNA早于蛋白質和DNA，是生命起源中首先出現(xiàn)的生物大分子，而一些有酶活性的內含子可能是生物進化過程中殘存的分子“化石”。酶RNA的發(fā)現(xiàn)，提出了生物大分子和生命起源的新概念，無疑促進對生物進化和生命起源的研究?？贵w酶是20實際80年代后期才出現(xiàn)的一種具有催化能力的蛋白質，其本質上是免疫球蛋白，但是在易變區(qū)被賦予了酶的屬性，所以又稱“催化性抗體”，抗體酶的發(fā)現(xiàn)，不僅為酶的過渡態(tài)理論提供了有力的實驗證據(jù)，而且抗體酶將會得到廣泛的應用。：（1） 生物酶工程：酶學和以DNA重組技術為主的現(xiàn)代分子生物學技術相結合的產(chǎn)物。（2） 固定化酶：將水溶性酶用物理或化學方法處理，使之成為不溶于水的、但仍具有酶活性的狀態(tài)。（3） 活化能：在一定溫度下1mol底物全部進入活化狀態(tài)所需要的自由能（kj/mol）（4） 酶的轉化數(shù)：在一定條件下每秒鐘每個酶分子轉換底物的分子數(shù)。（5） 寡聚酶：由兩個以上亞基組成的酶。（6） Kat單位：在最適條件下，酶秒鐘催化1mol底物轉化為產(chǎn)物所需的酶量，為Kat單位。（7） 酶偶聯(lián)分析法：由于分光光度法有其獨特的優(yōu)點，因此把一些遠類沒有光吸收變化的酶反應，可以通過與一些能引起光吸收變化的酶反映偶聯(lián)使第一個酶反映的產(chǎn)物轉變成第二個酶的具有光吸收變化的產(chǎn)物來進行測量。（8） 誘導契合說：1958年Koshland提出，當酶分子與底物分子接近時，酶蛋白受底物分子誘導，其構想發(fā)生有利于底物結合的變化，酶與底物在此基礎上互補契合進行反應。（9） 反饋抑制：許多小分子物質的合成是由一聯(lián)串的反應組成的，催化此物質生成的第一步的酶，往往被它們終端產(chǎn)物抑制。這種抑制叫反饋抑制。（10） 多酶復合體：由幾種酶靠非共價鍵彼此嵌合而成。， AgNO3，求該酶的最低相對分子質量。（Mr:92103）在最適條件下，試計算：（1）酶的比活力。[500U/mg]（2）轉換數(shù)。[]解：（1）比活力= （2）轉換數(shù)=1247。（1106/92103106）=，其轉換數(shù)為6104min1，試計算該酶在細胞內 濃度（假設新鮮組織含水80%，并且全部在細胞內）。[107 mol/L]解：1/610440247。（180%103）=[107 mol/L，其相對分子質量為120103，由6個相同亞基組成。純酶的Vmax為2800U/mg酶。它的一個活力單位規(guī)定為：在標準測定條件下，37℃、15min內水解10μmol焦磷酸所需要的酶量。問：（1）酶mg酶在每秒鐘內水解多少mol 底物？[105mol]。（2）每mg酶中有多少mol的活性部位（假設每個亞基上有一個活性部位）？[5108mol活性中心]。（3）酶的轉換數(shù)是多少？[622s1或622mol焦磷酸/（smol）酶活性中心]解：（1）280010/151/（60106）1=105 mol （2）1103/1201036=5108 mol （3）105247。1103/1201031/6=622，以酪蛋白為底物，用Folin酚比色法測定酶活力，得知每小時產(chǎn)生1500μg酪氨酸。另取2ml酶液，若以每分鐘產(chǎn)生1μg 酪氨酸的酶量為1個活力單位計算，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出：（1）1ml酶液中所含蛋白質量及活力單位。[，250U]（2）比活力。[400U/mg蛋白質]（3）1g酶制劑的總蛋白含量及總活力。[，105U]解：（1）247。（225/25）= 1500/60247。（25/25）=250U （2）250247。=400U/mg （3）247。（125/25）1103= 103mg= 1500/60247。（25/25）247。（125/25）103=105U，用水溶解成1000ml，從中取出1ml測定淀粉酶活力。計算每g酶制劑所含淀粉酶活力單位數(shù)？[3000U]（淀粉酶活力單位定義：在最適條件下每小時分解1g淀粉的酶量稱為1個活力單位）解：60247。（1/10001）=3000U，竟測定得到下列數(shù)據(jù)：試計算比活力、百分產(chǎn)量及純化倍數(shù)。[比活力：180U/mg蛋白質，百分產(chǎn)量：17%，純化倍數(shù)：9倍]體積/ml活力單位/（U/ml）蛋白質/（mg/ml）初提取液（NH4）2SO4鹽析1205200810104解：（1）810/=180U/mg （2）8105247。（200120）100%=17% （3）180247。（200/10）=9第九章 酶促反應動力學習題