血清成分的生化分析(編輯修改稿)
2025-06-22 18:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 巴比妥 巴比妥鈉緩沖液 （ ， 離子強度 ） ：1000mL： 巴比妥 ， 巴比妥鈉 ， 加水至 1000mL。 染色液： 300mL 含氨基黑 10B ， 甲醇 50mL， 冰醋酸 10mL，水 40mL〈 可重復(fù)使用 〉 。 漂洗液： 2022mL 含甲醇或乙醇 45mL， 冰醋酸 5mL， 水 50mL。 透明液： 300mL：含無水乙醇 7份 ， 冰醋酸 3份 。 血清： 新鮮 ， 無溶血現(xiàn)象 五 、 操作 總體步驟： 膜處理 —— 30′ 裝置 —— 電泳槽 電極緩沖液：兩槽等高 搭橋 點樣 → 電泳 → 染色 → 漂洗 → 透明 需做三條膜：全血清 、 γ球蛋白 、 清蛋白 膜處理 —— 膜的浸泡 用無齒鑷子取醋酸纖維薄膜一張 （ 識別出光澤面與無光澤面 ， 并在角上做好記號 ）放在緩沖液中浸泡 20min。 電泳槽的準備 根據(jù)薄膜寬度剪裁合適的濾紙條 。 在兩個電極槽中各倒入等體積電極緩沖液 ， 在電泳槽兩個膜支架上各放兩層濾紙條 ， 濾紙的一端與支架前沿對齊 ，另一端浸入電極緩沖液內(nèi) 。 當濾紙條全部潤濕后 ，用玻棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅(qū)逐氣泡 ， 使該端濾紙緊貼于膜支架上 。 濾紙條是兩個電極槽聯(lián)系醋酸纖維素薄膜的橋梁 ， 故稱為濾紙橋 。 點樣 把膜條從緩沖液中取出 ， 夾在兩層粗濾紙中吸干多余的液體 ， 然后平鋪在玻璃板上（ 無光澤面朝上 ） 。 將點樣器先于放置在白磁反應(yīng)板上的血清中沾一下 ， 再在膜條一端 2～3cm處輕輕地水平地落下并隨即提起 ， 這樣即在膜條上點上了細條狀的血清樣品 。 + 點樣說明： 點樣位點不可直接在薄膜上劃線 ， 以免破壞薄膜 。 可制備 點樣模板 ：取等大小濾紙條 ， 在距紙邊～ 2cm處用鉛筆劃一平行線 ， 此線為點樣標志區(qū) 。 點樣后要在薄膜上形成具一定寬度 、 粗細均勻的直線 。 此步驟是實驗關(guān)鍵 ， 是獲得具有清晰區(qū)帶電泳圖譜的重要環(huán)節(jié) 。 點樣前應(yīng)在濾紙上反復(fù)練習 ，掌握點樣技術(shù)后再正式點樣 。 電泳 將膜條上點樣的一端靠近負極 （ 點樣面朝下 ，要求膜緊貼濾紙并繃直 ， 中間不能下垂 。 若電泳槽中同時安放幾張薄膜 ， 則薄膜間應(yīng)相隔幾mm） 。 蓋嚴電泳室 ， 平衡 10min。 通電 。 調(diào)節(jié)電壓到 160V， 電流強度 ～ （ 毫安 /厘米 ） 膜寬 ， 電泳時間約為 45～ 60min。
試題試卷相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1