血清成分的生化分析-在線瀏覽
2025-07-13 18:25本頁(yè)面
【正文】 PBS （ NH4） 2SO4溶液 蔗糖 雙縮脲試劑 酪蛋白 BaCl2溶液 離心機(jī) 燒杯 移液管 透析袋 三 、 原理 中性鹽類能破壞溶液中蛋白分子表面的雙電層和水膜 ， 從而使蛋白質(zhì)從溶液中凝聚沉淀析出 。 沉淀不同蛋白質(zhì)所需鹽類濃度不同 。 因此 ， 可根據(jù)所要分離的蛋白質(zhì) ， 選擇不同飽和度的硫酸銨溶液進(jìn)行鹽析 。 由于 NH4+ 和 SO42 可以通過半透膜 ， 而血清清蛋白不能 ， 因此 ， 可以利用透析的方法使清蛋白溶液脫鹽 。 將盛有待濃縮的大分子溶液的透析袋放入高濃度的吸水性強(qiáng)的蔗糖固體顆粒中 ， 袋內(nèi)溶液中的水被袋外的多聚物所吸收而有效地濃縮 。 二 、 原理 醋酸纖維薄膜 電泳 是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法 。 目前已廣泛用于血清蛋白 ， 脂蛋白 ， 血紅蛋白 ， 糖蛋白和同工酶的分離及用在免疫電泳中 。 血清中含有白蛋白 、 α球蛋白 、 β球蛋白 、 γ球蛋白等蛋白質(zhì) ， 各種蛋白質(zhì)由于氨基酸組分 、 立體構(gòu)象 、 相對(duì)分子質(zhì)量 、 形狀及等電點(diǎn)不同 ， 在電場(chǎng)中遷移速度就不同 ， 故通過電泳法可將其分離 。 染色液： 300mL 含氨基黑 10B ， 甲醇 50mL， 冰醋酸 10mL，水 40mL〈 可重復(fù)使用 〉 。 透明液： 300mL：含無水乙醇 7份 ， 冰醋酸 3份 。 電泳槽的準(zhǔn)備 根據(jù)薄膜寬度剪裁合適的濾紙條 。 當(dāng)濾紙條全部潤(rùn)濕后 ，用玻棒輕輕擠壓在膜支架上的濾紙以驅(qū)逐氣泡 ， 使該端濾紙緊貼于膜支架上 。 點(diǎn)樣 把膜條從緩沖液中取出 ， 夾在兩層粗濾紙中吸干多余的液體 ， 然后平鋪在玻璃板上（ 無光澤面朝上 ） 。 + 點(diǎn)樣說明： 點(diǎn)樣位點(diǎn)不可直接在薄膜上劃線 ， 以免破壞薄膜 。 點(diǎn)樣后要在薄膜上形成具一定寬度 、 粗細(xì)均勻的直線 。 點(diǎn)樣前應(yīng)在濾紙上反復(fù)練習(xí) ，掌握點(diǎn)樣技術(shù)后再正式點(diǎn)樣 。 若電泳槽中同時(shí)安放幾張薄膜 ， 則薄膜間應(yīng)相隔幾mm） 。 通電 。 染色 電泳完畢后 ， 將膜條取下并放在染色液中浸泡 5～
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