血清成分的生化分析-文庫吧資料
2025-06-01 18:25本頁面
【正文】 ～ 60min。 蓋嚴電泳室 ， 平衡 10min。 電泳 將膜條上點樣的一端靠近負極 （ 點樣面朝下 ，要求膜緊貼濾紙并繃直 ， 中間不能下垂 。 此步驟是實驗關鍵 ， 是獲得具有清晰區(qū)帶電泳圖譜的重要環(huán)節(jié) 。 可制備 點樣模板 ：取等大小濾紙條 ， 在距紙邊～ 2cm處用鉛筆劃一平行線 ， 此線為點樣標志區(qū) 。 將點樣器先于放置在白磁反應板上的血清中沾一下 ， 再在膜條一端 2～3cm處輕輕地水平地落下并隨即提起 ， 這樣即在膜條上點上了細條狀的血清樣品 。 濾紙條是兩個電極槽聯(lián)系醋酸纖維素薄膜的橋梁 ， 故稱為濾紙橋 。 在兩個電極槽中各倒入等體積電極緩沖液 ， 在電泳槽兩個膜支架上各放兩層濾紙條 ， 濾紙的一端與支架前沿對齊 ，另一端浸入電極緩沖液內 。 血清： 新鮮 ， 無溶血現象 五 、 操作 總體步驟： 膜處理 —— 30′ 裝置 —— 電泳槽 電極緩沖液：兩槽等高 搭橋 點樣 → 電泳 → 染色 → 漂洗 → 透明 需做三條膜：全血清 、 γ球蛋白 、 清蛋白 膜處理 —— 膜的浸泡 用無齒鑷子取醋酸纖維薄膜一張 （ 識別出光澤面與無光澤面 ， 并在角上做好記號 ）放在緩沖液中浸泡 20min。 漂洗液： 2022mL 含甲醇或乙醇 45mL， 冰醋酸 5mL， 水 50mL。 三 、 實驗器材 醋酸纖維薄膜 （ 2 8cm） 常壓電泳儀 、 電泳槽 點樣器 （ 市售或自制 ） 培養(yǎng)皿 （ 染色及漂洗用 ） 粗濾紙 、 直尺 、 單面刀片 、 電吹風 玻璃板 竹鑷子 白磁反應板等 四 、 實驗試劑 巴比妥 巴比妥鈉緩沖液 （ ， 離子強度 ） ：1000mL： 巴比妥 ， 巴比妥鈉 ， 加水至 1000mL。 蛋白質 是兩性電解質 ， 在 pH不等于其等電點的溶液中 ， 可帶有電荷 ， 在電場中會向著與其所帶電荷相反的電極移動 。 醋酸纖維薄膜由二乙酸纖維素制成 ， 它具有均一的泡沫樣的結構 ， 厚度僅 120μm微米 ， 有強滲透性 ， 對分子移動無阻力 ， 作為區(qū)帶電泳的支持物進行蛋白電泳有簡便 ， 快速 ， 樣品用量少 ， 應用范圍廣 ， 分離清晰 ， 沒有吸附現象等優(yōu)點 。 四 、 實驗步驟 鹽析 、 透析與濃縮 離心管 2mL 血清 2mL PBS 2mL （ NH4） 2SO4 搖勻 靜置 30′ 3000rps 離心 20′ 上清液（主要含清蛋白） 沉淀（主要含
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