全自動(dòng)生化分析儀發(fā)展及應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-03-26 11:55 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ? 首先生物樣品與所用雙試劑中不與標(biāo)本發(fā)生反應(yīng)的試劑 1充分混合，在一定溫度下，一定反應(yīng)時(shí)間，特定波長(zhǎng)下，讀取吸光度值，然后追加啟動(dòng)反應(yīng)試劑，在反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)，第二次讀取吸光度值（或與所用單試劑充分混合后在最初時(shí)間讀取吸光度值，一定時(shí)間后讀取第二次吸光度值）。最后對(duì)兩次吸光度值由電腦系統(tǒng)處理并計(jì)算測(cè)定結(jié)果。 多點(diǎn)終點(diǎn)法 ? 在一個(gè)通道內(nèi)一次進(jìn)行多個(gè)反應(yīng)相關(guān)的終點(diǎn)法測(cè)定。 ? 如果是一點(diǎn)終點(diǎn)法，在上圖的 Main 區(qū)中，選擇 mn讀點(diǎn)范圍，如果 n=0,則系統(tǒng)自動(dòng)選擇 m， m+1， m+2三個(gè)點(diǎn)進(jìn)行中間值計(jì)算。 ? 如果是二點(diǎn)終點(diǎn)法，那么上圖的 Sub 點(diǎn)區(qū)中，選擇 Pr讀點(diǎn)范圍，如果 r=0，則系統(tǒng)自動(dòng)選擇 P， P+1， P+2三個(gè)點(diǎn)進(jìn)行中間值計(jì)算。 ? Abs=Abs1k*Abs2 K為液體體積修正系數(shù)； 單試劑時(shí)， Sub p和 r設(shè)置為 0， m點(diǎn)為必設(shè)點(diǎn)，其余點(diǎn)不設(shè)輸入 0。 ABS1：主讀點(diǎn)區(qū)的主波長(zhǎng)減去付波長(zhǎng)的吸光度值； ABS2：付讀點(diǎn)區(qū)的主波長(zhǎng)減去付波長(zhǎng)的吸光度值；所謂付讀點(diǎn)區(qū)其實(shí)就是樣本加試劑空白的區(qū)域，也就是 R2加入前的讀點(diǎn)區(qū)； 2 固定時(shí)間法 ? 指在時(shí)間 吸光度曲線上選 擇兩個(gè)測(cè)光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。有時(shí)也稱些法為兩點(diǎn)法。該種方法有助于解決某些反應(yīng)的特異性問(wèn)題。 3 連續(xù)監(jiān)測(cè)法 ? 目前，酶濃度測(cè)定有兩種方法，兩點(diǎn)速率法和多點(diǎn)速率法，它是測(cè)定酶所催化的反應(yīng)速度，間接計(jì)算出酶的含量。當(dāng)酶促反應(yīng)一開(kāi)始，底物處于過(guò)量狀態(tài)，酶與底物開(kāi)始結(jié)合，生成復(fù)合物，底物濃度開(kāi)始下降，此時(shí)產(chǎn)物尚未生成。當(dāng)復(fù)合物分解，生成產(chǎn)物，酶促反應(yīng)速度急驟上升，經(jīng)過(guò)很短作用時(shí)間后，產(chǎn)物的生成量或底物的減少量與時(shí)間成線性關(guān)系，反應(yīng)速度保持恒定不變，這一時(shí)期稱為零級(jí)反應(yīng)期。隨酶促反應(yīng)繼 續(xù)進(jìn)行， ? 底物不斷消耗，酶促反應(yīng)條件逐漸變化，酶促反應(yīng)速度逐漸減慢，產(chǎn)物生成或底物減少量的變化曲線遂趨平坦，這一時(shí)期稱為一級(jí)反應(yīng)期。此時(shí)反應(yīng)速率常常不能準(zhǔn)確反應(yīng)酶的含量。底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度有很大影響，只有當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^(guò)酶飽和度時(shí)，酶促反應(yīng)速度才能保持恒速，此時(shí)的酶促反應(yīng)速度和酶濃度才有線性關(guān)系。因些測(cè)定酶活性的基質(zhì)液中底物濃度應(yīng)當(dāng)是 Km值的 10~20倍，這樣才能保證酶活力的標(biāo)本被準(zhǔn)確測(cè)出。根據(jù)上述酶活力的測(cè)定要求，只有在零級(jí)反應(yīng)期，單位時(shí)間內(nèi)吸光度變化值才與酶濃度成正比。 ? 計(jì)算 m和 n點(diǎn)間的每分鐘吸光度變化 Abs1。如果m和 n小于 5個(gè)點(diǎn)，則自動(dòng)向 l的方向移動(dòng)， 讀取六個(gè)點(diǎn)計(jì)算每分鐘吸光度變化。 P和 r點(diǎn)為樣本和試劑空白的每分鐘吸光度變化Abs2。如果不使用，設(shè)置為 0,；如果使用， pr，即為雙速率法。 Abs=△ Abs1k*△ Abs2， K為液體體積修正系數(shù)； Check ，在 R2加入前或加入后一點(diǎn)進(jìn)行。不使用輸入 0 使用時(shí)輸入 R2加入前的點(diǎn)。 ? 而 2點(diǎn)速率法與其類似，不同的是兩個(gè)點(diǎn)的速率變化。 4 免疫比濁測(cè)定法 ? 抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)杯中具有一定的濁度，由分光光度進(jìn)行透射比濁測(cè)定 5 干化學(xué)分析法 ? 將液體樣品（血清，血漿，全血，尿液）直接加到已固化于特殊結(jié)構(gòu)的試劑載體即所謂干式化的試劑中，以樣品中的水為溶劑，將固化在載體（片或條式）上的試劑溶解后再與樣品中的待測(cè)成分進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，從而進(jìn)行分析測(cè)定的一種方法。 6 離子選擇電極法 ? 原理為將兩支電極浸入待測(cè)溶液中組成原電池，其中一支電極的電位與待測(cè)離子的活度有關(guān)，其關(guān)系服從能斯特 (Nernst)方程，此電極為指示電極；電池中的另一支電極是電位已知并且恒定的所謂參比電極，如飽和甘汞電極。將所構(gòu)成的原電池連接于測(cè)量電動(dòng)勢(shì)的裝置，在電流很小的條件下測(cè)量電池的電動(dòng)勢(shì)，求出指示電極的電位或電位變化，便可求得待測(cè)離子的活度（或濃度）。離子先擇電極基本上都是薄膜電極，它們是由對(duì)某一種離子具有不同程度的選擇性響應(yīng)的膜所構(gòu)成。 7 紫外可見(jiàn)光分光光度法 ? 吸收光譜曲線體現(xiàn)了物質(zhì)的特性，不同的物質(zhì)具有不同的特征吸收曲線，因此，吸收光譜可用作物質(zhì)的定性鑒定。 波長(zhǎng)的選擇 ? 波長(zhǎng)的正確選擇有利于提高測(cè)定的靈敏度和減少測(cè)定誤差。光度學(xué)方法有單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)之分。雙波長(zhǎng)分析就是選擇主波長(zhǎng)同時(shí)選擇副波長(zhǎng)，在計(jì)算時(shí)用主波長(zhǎng)
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