westernblot相關(guān)試劑與步驟(編輯修改稿)
2025-06-11 23:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 SDS（sodium dodecyl sulfate） 1M TrisCL（） 溶解后加入10mL甘油及少量溴酚藍定容至20mL（二）步驟電泳上樣體系總25uL（即每孔加25uL） ：（下表的列表示凝膠孔一個孔所加的試劑） Marker管（泳道）蛋白樣品管（泳道）空白管（泳道）蛋白 無？無5loading buffer 5uL5uL5uLMarker7uL無無生理鹽水13uL補齊至25uL20uL體系總體積25uL25uL25uLMarker條帶依次是170、1972（red）、5432110（green）KD大小的梯度。蛋白樣品管的上樣量的計算：40ug（這個值不一定的，可以根據(jù)算出的體積來改變。比如超過20uL則需要減少上樣量。而且如果內(nèi)參不齊時也需要調(diào)整）除以依據(jù)分光光度計的讀數(shù)算出的蛋白濃度ug/mL（根據(jù)說明書蛋白以1：20被稀釋），再轉(zhuǎn)換成uL的單位?？瞻坠艿脑O(shè)置是因為，當(dāng)?shù)鞍讟悠飞儆?個樣品時，空出的孔需要加入物質(zhì)，以免蛋白跑偏。根據(jù)上表加好各試劑后，于270攝氏度水浴5分鐘，離心，再上樣，倒入電泳液上層膠80V跑，下層膠120V跑（一般至少1個半小時）六、轉(zhuǎn)膜（一）器材和試劑準備：電轉(zhuǎn)儀、電轉(zhuǎn)液、冰塊（二）步驟準備夾板、濾紙、NC膜（浸泡于電轉(zhuǎn)液）取出凝膠切下蛋白和marker所在的凝膠，制成由下到上依次是：濾紙、凝膠、NC膜、濾紙的夾板。放置各層時注意要加電轉(zhuǎn)液濕潤并排出氣泡，以免干擾電轉(zhuǎn)效果。，加入冰塊和電轉(zhuǎn)液，300mA恒流電轉(zhuǎn)1小時。 封閉（一）器材和試劑準備：麗春紅染料、脫脂牛奶、TBST、塑料盒、鑷子、剪刀、搖床（二）步驟取出夾板
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