【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 子時(shí)，則應(yīng)對(duì)整個(gè)生物安全柜進(jìn)行氣體消毒。 （ 4）可能受生物因子污染的 生物安全柜，在移動(dòng)到另一地方之前應(yīng)適當(dāng)?shù)厍宄廴尽? （ 5）在研究試劑溢漏或潑灑以后，受污染表面應(yīng)適當(dāng)?shù)厍宄廴尽? ● 使用中的要求與規(guī)定 為確保實(shí)驗(yàn)室的安全，所有進(jìn)入生物安全實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本，都應(yīng)該視為具有污染性的物質(zhì)對(duì)待。在作標(biāo)本處理、標(biāo)本接種、包裝物或容器處理等接觸具有傳染性或潛在傳染性的標(biāo)本或容器時(shí)，必須在生物安全柜中進(jìn)行。標(biāo)本接種一旦完成，將剩余部分標(biāo)本用帶帽密封的塑料管盛裝，外面套好小塑料袋，作好標(biāo)記，放入液氮罐內(nèi)，標(biāo)本在室溫停留的時(shí)間應(yīng)盡可能短。而生物安全柜的使用應(yīng)遵守以下要求。 （ 1） 生物安全柜的使用和 局限根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)通過本手冊(cè)向每個(gè)操作人員說明。每個(gè)操作人員都應(yīng)熟悉本操作和安全手冊(cè)。在此，特別應(yīng)指出的是，當(dāng)發(fā)生泄漏、破損或操作失誤時(shí)，生物安全柜是不能保護(hù)操作者的。 （ 2） 除非生物安全柜工作正常，否則不能使用。 （ 3） 生物安全柜在使用中，玻璃視窗高度超過安全高度報(bào)警器啟動(dòng)，提示此時(shí)安全柜對(duì)人是不安全的。 （ 4） 生物安全柜中的器材和設(shè)備應(yīng)減少至最少。后面的空氣流通是絕不能阻斷的。所有物品在放入生物安全柜前，其表面最好經(jīng)過消毒處理。 （ 5） 在生物安全柜 內(nèi) 不能用本生燈。原因是其產(chǎn)生的熱量會(huì)破壞氣流并損壞過濾裝置，造成高效過濾 器的濾紙破損，引起泄漏?？捎秒娮印盃t”，使用無菌的一次性接種環(huán)更好。 （ 6） 所有操作必須在工作區(qū)的中央或后部通過玻璃擋板可看見的地方進(jìn)行。 （ 7） 盡量減少在操作者背后的走動(dòng)。 （ 8） 操作者的手臂不可頻繁出入生物安全柜，否則會(huì)打亂氣流。 （ 9） 前面的氣流不能被移液管等其他東西阻斷，否則打亂氣流可能會(huì)引起污染或操作者感染。 （ 10） 工作結(jié)束后以及每天下班前，應(yīng)以適當(dāng)?shù)南緞┎潦蒙锇踩竦谋砻孢M(jìn)行擦拭、消毒。 Ⅱ級(jí) B2生物安全柜 11 （ 11） 開始工作前和結(jié)束工作后，生物安全柜的風(fēng)扇應(yīng)至少運(yùn)行 5min。 ●其他事項(xiàng) ⑴讓操作者的眼睛在實(shí)驗(yàn)工作中感到舒服的最好方法為：將眼睛定 期離開安全柜的工作區(qū)域，休息一下，望一望遠(yuǎn)處的物體，同時(shí)得經(jīng)常眨眼，保持眼睛的輕松并處于一個(gè)不緊張的狀態(tài)。經(jīng)常檢查眼睛，保持前窗和眼睛清潔。 ⑵調(diào)整光源讓前窗不刺眼，盡量調(diào)到眼睛最為適應(yīng)的位置。 ⑶合理安排本次實(shí)驗(yàn)中常用物品，盡量放在手邊，在拿取或移動(dòng)物品時(shí)用整個(gè)手臂，不要用手指夠物品或彎手腕。 ⑷實(shí)驗(yàn)中使用噴燈時(shí)其火焰會(huì)嚴(yán)重影響在運(yùn)行中的生物安全柜內(nèi)的層流，有可能會(huì)實(shí)質(zhì)性增加工作區(qū)域氣溶膠的擴(kuò)散。如果噴燈的火苗很大，過量的熱可能熔化HEPA 過濾器濾膜的黏結(jié)劑，甚至在濾膜上燒出洞而發(fā)生氣體的泄漏，產(chǎn)生不安全 因素。在Ⅱ級(jí)的 B2 型生物安全柜內(nèi)，泄漏的氣體可能達(dá)到爆炸極限。如用電熱套或可拋棄的加熱環(huán)替代，不要烤容器瓶口，這種方法較為安全。 ⑸生物安全柜的主要目的是保護(hù)操作人員、環(huán)境和樣品免受生物有害物質(zhì)的侵害。生物安全柜及其 HEPA 過濾器濾膜應(yīng)使用對(duì)在生物研究中常用化學(xué)品表現(xiàn)惰性的材料，但其仍可能會(huì)被排風(fēng)柜中常用的腐蝕性化學(xué)品破壞。 ⑹生物安全柜只在正確使用的情況下才能保護(hù)操作人員和樣品，因此，在生物安全柜里實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束后都得及時(shí)消毒、滅菌。 ⑺紫外燈只是個(gè)附件，用于減少安全柜不用時(shí)工作區(qū)域的污染。紫外線實(shí)質(zhì)上沒有 穿透力不會(huì)殺滅被灰塵或有機(jī)物保護(hù)的微生物。避免污染的最好方法是在每一段工作開始前和結(jié)束后對(duì)工作面定期清潔。不能簡(jiǎn)單認(rèn)為使用紫外燈，就不必清潔工作區(qū)域了。 ⑻生物安全柜工作區(qū)域放置大物體會(huì)妨礙氣流，降低生物安全柜的效率。比如離心機(jī)、攪拌機(jī)等電器通常有冷卻風(fēng)扇，這樣將會(huì)破壞生物安全柜內(nèi)的氣流。離心機(jī)內(nèi)最好使用密封的安全杯，可以在生物安全柜內(nèi)裝樣和下樣。 ⑼某些應(yīng)用，如研究生物毒素藥物的工作，為防止有害物質(zhì)逃逸。一般建議連續(xù)使用生物安全柜。而大多數(shù)應(yīng)用連續(xù)使用生物安全柜，會(huì)降低 HEPA 過濾器濾膜的壽命。 ⑽讓生物 安全柜連續(xù)工作，假設(shè)房間密閉，沒有通風(fēng)系統(tǒng)，沒有什么活動(dòng)，循環(huán)式的 A 類生物安全柜可能會(huì)把空氣凈度將至 100 等級(jí)。事實(shí)上是不可能的，一旦使用人員進(jìn)入房間進(jìn)行操作，室內(nèi)空氣將會(huì)被污染。同時(shí)這樣做只會(huì)降低 HEPA過濾器濾膜的壽命。 ⑾ HEPA 過濾器濾膜應(yīng)在壓力差過大時(shí)更換。決定濾膜壽命的兩大因素是房間內(nèi)空氣污染的程度以及安全柜工作的時(shí)間，按時(shí)間表更換濾膜而不考慮濾膜被污染的程度可能造成不必要的浪費(fèi)。 █ 生物安全柜的消毒 Ⅱ級(jí) B2生物安全柜 12 ●表面消毒 工作完成后，所有的容器和設(shè)備應(yīng)進(jìn)行表面消毒后取出安全柜。一天的工作結(jié)束后， 生物安全柜最后的表面消毒工作應(yīng)包括工作臺(tái)面的擦拭、生物安全柜內(nèi)兩側(cè)和后壁的擦拭、觀察窗玻璃內(nèi)側(cè)壁的擦拭。如有必要，應(yīng)對(duì)生物安全柜進(jìn)行放射性監(jiān)測(cè)和滅菌。 應(yīng)以避免沾染皮膚及產(chǎn)生氣溶膠的方式脫去手套和工作服。安全的微生物操作程序的最后步驟，是要求操作者洗手。 生物安全柜內(nèi)發(fā)生少量噴濺，應(yīng)立即用吸水紙巾清楚，放入生物危害滅菌袋。應(yīng)盡快對(duì)噴濺物沾染到的物品和安全柜內(nèi)表面用浸透消毒 液 的毛巾浸濕。消毒工作面后，更換手套，再將清潔的吸濕巾放入柜內(nèi)。無論脫手套或是換手套時(shí)都應(yīng)洗手。 大量的溢出可能導(dǎo)致溢出液流入前格柵和后格 柵，這時(shí)需要更廣泛的消毒，柜中所有的物品都應(yīng)進(jìn)行表面消毒后移出柜外，要向工作臺(tái)面上傾倒消毒液使其流入格柵到達(dá)排水托盤。 一般認(rèn)為與消毒劑接觸 2030ｍｉｎ就可以達(dá)到理想消毒效果，但這個(gè)時(shí)間依消毒劑和微生物種類而異，應(yīng)遵照生產(chǎn)商的指導(dǎo)操作。排水盤內(nèi)收集的液體應(yīng)裝入盛有消毒劑的收集瓶中。將一根軟管連接到排水閥門，管子要有足夠長(zhǎng)度以保證其另一端浸沒在收集瓶?jī)?nèi)消毒液液面之下，這樣做可減少氣溶膠的產(chǎn)生。然后用水沖洗排水盤，再卸下排水管。 如果溢出液含放射性物質(zhì)，也按類似程序處理。同時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步與輻射安全人員聯(lián)系尋求 專業(yè)指導(dǎo)。 ●空氣消毒 進(jìn)行 HEPA 過濾器更換或內(nèi)部維修之前，對(duì)進(jìn)行過傳染性材料操作的生物安全柜必須進(jìn)行消毒。生物安全柜重新安放之前，必須對(duì)柜內(nèi)操作的病原體進(jìn)行危險(xiǎn)評(píng)估，決定是否要消。盡管最近過氧化氫蒸汽已成功運(yùn)用于生物安全柜的消毒，但最常用的方法還是甲醛蒸氣滅菌。這種對(duì)環(huán)境無害的蒸氣可用于消毒 HEPA 過濾器、隔離間、離心機(jī)附件。（消毒方法見附錄） █ 生物安全柜的維護(hù) 生物安全柜的設(shè)計(jì)可以允許每天 24ｈ工作，連續(xù)工作有助于控制實(shí)驗(yàn)室中灰塵和顆粒的水平，但也會(huì)降低過濾器使用壽命。在開始工作以前以及完成工作以后 ，至少要使安全柜工作 5ｍｉｎ來“凈化”生物安全柜，亦即要留出將污染空氣從生物安全柜中排出的時(shí)間。 生物安全柜的所有維修工作應(yīng)該由有資質(zhì)的專業(yè)人員來進(jìn)行。在生物安全柜操作中出現(xiàn)的任何故障都應(yīng)該報(bào)告，并應(yīng)在再次使用生物安全柜之前先進(jìn)行修理。 ●紫外燈 生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應(yīng)該每周進(jìn)行清潔以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全柜重新認(rèn)證時(shí)，要檢查紫外線的強(qiáng) Ⅱ級(jí) B2生物安全柜 13 度以確保有適當(dāng)?shù)陌l(fā)光射量。房間中有人時(shí)一定要關(guān)閉紫外燈，以防止眼睛和皮膚不慎暴露而造成傷害。 ●明火 在生物安全柜內(nèi)形成的幾乎 沒有微生物的環(huán)境中，應(yīng)避免使用明火。明火會(huì)對(duì)氣流產(chǎn)生影響，并且在處理揮發(fā)性和易燃物品時(shí)，使用明火也危險(xiǎn)。在對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌時(shí)，可以使用微燃燒器或電子“爐”，而不應(yīng)使用明火。 ●溢灑 實(shí)驗(yàn)室中要張貼處理溢灑物的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程，每一位使用實(shí)驗(yàn)室的成員要閱讀并理解這些規(guī)程。一旦在生物安全柜中發(fā)生生物危害物品溢灑時(shí)，應(yīng)在生物安全柜處于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理。要使用有效的消毒劑，并在處理過程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢灑物品的材料都要進(jìn)行消毒和或高溫滅菌。 ●清潔和消毒 由于剩余的培養(yǎng)基可供微生物生長(zhǎng)，因 此在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，要將包括儀器設(shè)備在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品都進(jìn)行表面凈化，并移出安全柜。 在每次使用前后，要對(duì)生物安全柜的內(nèi)表面進(jìn)行凈化。工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死生物安全柜里可能發(fā)現(xiàn)的任何微生物。在每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，最終的表面凈化處理應(yīng)包括擦拭工作臺(tái)面、四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位。在對(duì)目標(biāo)生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或 70％酒精。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次進(jìn)行擦拭。 推薦將生物安全柜維持在運(yùn)行狀態(tài)。如果要