基因的克隆方法大全(編輯修改稿)
2025-06-08 23:26 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 CCTTTTTTTT CGTTTTTTTT GATTTTTTTT GCTTTTTTTT GGTTTTTTTT 17 18 具體操作： ?提取 mRNA； ?特定引物（ 12分之一）反轉(zhuǎn)錄； ?特定引物和 RP結(jié)合 RTPCR； ?把不同處理的樣品擴增產(chǎn)物按引物組合分別進行電泳比較 DNA帶，從而找出差別DNA。 19 缺點： ?假陽性條帶多，對低豐度的基因表達不容易檢測。 ?工作量大。 ?無法定量研究。 ?擴出的條帶往往是 3`端比較短的 UTR區(qū)的一段序列，提供的信息較少。 20 優(yōu)點： ?簡便、靈敏、高效、省時，能快速顯示mRNA的組成。 ?所需的 mRNA量少。 ?各樣本 mRNA的差異可同時進行比較。 ?擴出的 cDNA可直接用于測序、文庫篩選等。 21 二、基于基因加標(biāo)簽的基因克隆方法 原理：主要是在生物基因組中 插入外源的一段 DNA，使生物體產(chǎn)生某種突變表型，然后反過來利用這段外源已知的 DNA片段來克隆基因的方法。 22 外源 DNA 基因組染色體 DNA 基因 A 產(chǎn)生突變型 ? 分類： TDNA標(biāo)簽法 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法。 23 ? TDNA標(biāo)簽法克隆基因技術(shù)路線： ?農(nóng)桿菌侵染植物得到轉(zhuǎn)化苗，篩選出表現(xiàn)某種突變性狀的個體。 ?建立突變體基因組文庫及野生型基因組文庫 . ?用 TDNA片段做 probe篩選突變體文庫，獲得陽性克隆。 ?用獲得的陽性克隆篩選野生型基因組文庫，獲得野生型的陽性克隆。 ?把陽性克隆轉(zhuǎn)化突變體進行功能互補及進行測序分析。 24 野生株 轉(zhuǎn)基因株 目的基因 染色體 TDNA 染色體 TDNA探針 篩選轉(zhuǎn)基因文庫 構(gòu)建基因組文庫基因苗 構(gòu)建基因組文庫基因苗 陽性克隆 目的基因 獲得陽性克隆 基因序列分析，確定為基因 25 ?轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽法 轉(zhuǎn)座子又稱 轉(zhuǎn)座因子或者跳躍因子 ，實際上也是 DNA片段 ，它可以
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1