基因定位常用的方法(編輯修改稿)
2025-05-26 05:53 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 克隆嵌板 雜種克隆 保留的人染色體 1 2 3 4 5 6 7 8 A + + + + B + + + + C + + + + 13 1）原位雜交（ in situ hybridization）：是最直接的基因定位方法之一，是分子生物學(xué)技術(shù)在基因定位中的應(yīng)用，胰島素基因用此方法定位于11p15。 2）原理：堿基的互補(bǔ)配對(duì)，同源的 DNADNA雙鏈或 DNARNA雙鏈在一定條件下能結(jié)合成雙鏈。用放射性或非放射性物質(zhì)標(biāo)記的 DNA、 RNA或與 mRNA互補(bǔ)的 cDNA作探針，可檢測(cè)細(xì)胞基因組中的同源部分。 14 3）原位雜交的特點(diǎn)： 雜交在載玻片上的中期染色體上進(jìn)行，而不是在溶液和膜上進(jìn)行。所謂原位是指在標(biāo)本上 DNA原位變性，再與放射性或非放射性物質(zhì)（通常用 3H）標(biāo)記的已知核酸探針雜交，通過(guò)放射自顯影來(lái)檢測(cè)染色體上特異 DNA或 RNA順序，用放射性顆粒在某條染色體的區(qū)帶出現(xiàn)的最高頻率或熒光的強(qiáng)度來(lái)確定探針的位置，從而準(zhǔn)確地進(jìn)行基因定位。 15 4）原位雜交的步驟 制備中期染色體 DNA原位變性 變性 放射性或非放射性標(biāo)記探針 雜交（在載玻片上） 洗膜 放射性標(biāo)記：放射自顯影 檢測(cè) 非放射性標(biāo)記：熒光染料與抗體或蛋白結(jié)合 記錄雜交信號(hào) 結(jié)合染色體形態(tài)進(jìn)行基因定位
數(shù)學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1