細(xì)胞的研究方法ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-08 04:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 鏡圖像 電子槍發(fā)射出的電子束作為 “ 探針 ” ， 在樣品表面進(jìn)行掃描 ， 電子束激發(fā)樣品表面放出次級電子 ， 被電荷的探測器收集后 ， 在熒光屏上相應(yīng)位置顯示出明 、 暗差別 。 用來觀察標(biāo)本的 表面形態(tài)結(jié)構(gòu) 。 (scanning electron microscope, SEM) 4. 掃描電鏡技術(shù) 掃描式電子顯微鏡 耳聽毛的掃描電鏡圖像 一、 超速離心技術(shù) 第二節(jié) 細(xì)胞組分的分析方法 為了研究細(xì)胞的各種結(jié)構(gòu)和成分的化學(xué)性質(zhì)和生理功能 ， 需要把它們分離和抽提出來進(jìn)行研究 。離心是研究細(xì)胞器和生物大分子的必要手段 。 離心機(jī)結(jié)構(gòu)與原理示意圖 馬達(dá) 冷凍 真空 沉降物 轉(zhuǎn)子 裝甲室 離心分離技術(shù) ?差速離心 ?密度梯度離心 密度梯度離心與差速離心結(jié)合可達(dá)到更精細(xì)的分離 。 差速離心 ?在密度均一的介質(zhì)中由 低速到高速 逐級離心，用于分離不同大小的亞細(xì)胞組分和各種顆粒。 利用肝臟制備各種亞細(xì)胞組分的制備離心過程示意圖 勻漿物 肝臟 上清夜 完整 細(xì)胞 完整 細(xì)胞 1000g 20min 核 線粒體 溶酶體 過氧化物酶體 微粒體 內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 100000g 120min 105000g 20min 靜置 20min 10000g 20min 核糖體 密度梯度離心 （區(qū)帶離心法） ? 用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一 連續(xù) 或 不連續(xù) 的密度梯度，將細(xì)胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過不同顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí)，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。 密度梯度離心 ? 速度沉降 ：用于分離密度相近大小不一的細(xì)胞組分，常用介質(zhì)為蔗糖 ? 等密度沉降：用于分離不同密度的細(xì)胞組分，常用介質(zhì)為氯化銫 常用的介質(zhì)： 蔗糖、氯化銫等。 二、 細(xì)胞化學(xué)技術(shù) ?（一）組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)法 ?（二）免疫細(xì)胞化學(xué)法（特異蛋白抗原的定位與定性） （一）、組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)染色方法依據(jù)化學(xué)反應(yīng)原理 ， 對無色透明細(xì)胞的某些成分進(jìn)行定性和定位研究 。 Feulgen 反應(yīng) —— DNA 蘇丹染色 —— 脂肪和膽固醇 Millon反應(yīng) —— 蛋白質(zhì) 免疫細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)免疫學(xué)原理 ， 利用 抗體 同特定 抗原 結(jié)合 ， 對抗原進(jìn)行專一定位測定的技術(shù) 。 （二）、免疫細(xì)胞化學(xué) (immunocytochemistry) 抗體與抗原的結(jié)合方法可分為以下兩種： ?直接法 ?間接法 將帶有標(biāo)記的抗體與抗原反應(yīng) ， 顯示出抗原存在的部位 在抗體抗原初級反應(yīng)的基礎(chǔ)上 ，再用帶標(biāo)記的 次級抗體 與初級反應(yīng)物反應(yīng) ， 從而使 初級反應(yīng) 得到放大 ， 增強(qiáng)顯示效果 不同熒光染料 標(biāo)記 抗 體 特異性結(jié)合 免疫 熒光技術(shù) 抗原 (細(xì)胞的蛋白質(zhì)成分 ) 不同熒光染料 直接熒光染色 直接免疫熒光 抗 體 2 標(biāo)記 間接免疫熒光 不同熒光染料 三、細(xì)胞內(nèi)特異核酸序列的定位與定性 （一） DNA序列測定技術(shù)（主要利用的測序儀）
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