重組dna技術(shù)ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-06-08 04:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 主細(xì)胞具有易鑒別的表型。 ? 易從宿主細(xì)胞中回收。 較小的相對分子量和較高的拷貝數(shù)。 ? 有安全性。 載體 (vector)的種類 ? 細(xì)菌質(zhì)粒載體 ? λ噬菌體 ? 柯斯質(zhì)粒 (cosmid) ? 穿梭載體 ? 酵母人工染色體（ yeast artificial chromosome， YAC） ? Ti質(zhì)粒 細(xì)菌質(zhì)粒載體 ? ◆ 質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)獨立于細(xì)菌染色體而自然存在的、能自我復(fù)制、易分離和導(dǎo)入的環(huán)狀雙鏈 DNA分子。 ? ☆這些質(zhì)粒的適應(yīng)范圍廣，拷貝數(shù)多。進(jìn)入宿主細(xì)胞復(fù)制后，每個細(xì)胞的質(zhì)?？截悢?shù)可高達(dá) 1000個。 ? ◆早期用于基因工程的載體是經(jīng)遺傳改良的細(xì)菌質(zhì)粒，它們僅能用于克隆分子量小于 10kb( 1000bp =1kb)的外源 DNA片段。 ? ☆現(xiàn)在廣泛使用且商品化的質(zhì)粒，很多都具有重組表型檢測標(biāo)記，在 DNA克隆中根據(jù)宿主細(xì)胞的表型即可推知質(zhì)粒是否攜帶外源 DNA片段。 λ噬菌體 ◆ λ噬菌體基因組全長 49kb。 λ噬菌體 DNA中間約三分之二的序列為中間基因簇，位于兩端的為DNA左、右臂。 λ基因組的中間基因簇序列可被外源 DNA片段取代 , 而不影響噬菌體感染細(xì)菌及形成噬菌斑的能力。 ◆ λ噬菌體載體可接受 15 kb23 kb的外源 DNA片段，它既可作為克隆載體，也可作為表達(dá)載體，在基因庫篩選中， λ噬菌體作載體與細(xì)菌質(zhì)粒相比，具有易操作、陽性克隆數(shù)多等特點，現(xiàn)廣泛用于各類基因庫的構(gòu)建。 柯斯質(zhì)粒 (cosmid) ◆ 柯斯質(zhì)粒 (cosmid)是利用部分 λ噬菌體 DNA與部分細(xì)菌質(zhì)粒 DNA序列組建而成的?？滤官|(zhì)粒具有 λ噬菌體的 cos序列(12bp) 和細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制原點。 cos序列是噬菌體DNA包裝成噬菌體時所必需的，而質(zhì)粒的復(fù)制原點可使柯斯質(zhì)粒在細(xì)菌細(xì)胞中同普通細(xì)菌質(zhì)粒一樣自主復(fù)制?？山邮荛L達(dá) 50kb的外源 DNA片段。 ◆ 穿梭載體是指能在兩種不同的生物中復(fù)制的載體。例如既能在原核生物 (如大腸桿菌 )中復(fù)制，又能在真核細(xì)胞 (如酵母 )中復(fù)制的載體。因此，這類載體不僅具有細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制原點及選擇標(biāo)記基因，還有真核生物的自主復(fù)制序列以及選擇標(biāo)記性狀，具有多克隆位點。 穿梭載體 酵母人工染色體（ yeast artificial chromosome，YAC） ◆ 根瘤細(xì)胞的形成是因為土壤農(nóng)桿菌中存
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