【文章內(nèi)容簡介】 FL2 MFII F N g1101 0 01 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII L 1 01101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII l 41101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII L 51101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII l 21101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFIBD Biosciences Immune Function 操作步驟 ?檢測物與捕獲微球共 孵育 。 ?洗滌 。 ?標記 熒光探測試劑（ FITC或 PE標記）。 ?洗滌 。 ?流式細胞儀上機 檢測 。 ?CBA分析軟件批量數(shù)據(jù)分析 。 BD Biosciences Immune Function 與傳統(tǒng)的 ELISAs檢測相比 ? 能夠同時對單一樣本進行多種目的蛋白檢測 ? 較傳統(tǒng)檢測節(jié)省樣本量（ 50μl） ? 與 ELISAs相比靈敏度高（ ）、重復性好 ? 檢測的線性范圍寬（ 05000pg/ml） ? 所有分析只需一組標準曲線 ? 避免酶聯(lián)反應所致人工假象 ? 強大的 CBA分析軟件 ? 節(jié)省操作時間、檢測時間和分析時間 ? 。 ? 。 BD Biosciences Immune Function ? 使用 Prostatespecific antigen（ PSA3）及其突變體 PSA3A對前列腺癌患者 T細胞免疫，通過Human Th1/Th2 Cytokine CBA Kit檢測免疫 T細胞的細胞因子分泌水平 ? A， B， C為稀釋標準， D為無處理對照組， E為 PSA3A處理組， F為 PSA3處理組 ? 摘自 Terasawa H, et al. Clinical Cancer ,4153, January 2022 ? 上述研究發(fā)現(xiàn) PSA3A比 PSA3能更有效的殺傷前列腺腫瘤，與 PSA3A能刺激 T細胞分泌更高水平的 IL IL IL5和 IFNγ有關，為后續(xù)藥物開發(fā)打下基礎 BD Biosciences Immune Function BD CBA新 產(chǎn)品系列 BD CBA Flex SetNew ? 基本原理與 CBA Kit相似 ? 檢測原理不同： Flex Set微球種熒光，分別在流式細胞儀的 FL3（近紅外熒光）和 FL4（紅色熒光）通道檢測，通帶有近紅外和紅色兩過這個二維矩陣（對應于微球上的特定序號）識別捕獲微球，從而定性目的蛋白， PE標記的檢測抗體在 FL2通道來對目的蛋白定量。 BD Biosciences Immune Function CBA Kit與 CBA Flex Set CBA Kit ? 同時檢測 5或者 6個 ? 全部試劑 ? CBA Analysis Software ? 檢測指標組合固定 CBA Flex Set ? 最多達 75個 ? 需另購 Buffer kit ? FCAP Array Software ? 檢測指標可自由組合 BD Biosciences Immune Function CBA/CBA Flex set的應用領域 ? 血清、血漿或培養(yǎng)液上清等各種液相中細胞因子的濃度檢測 ? 細胞凋亡等信號傳導研究，磷酸化蛋白定量分析 ? 免疫細胞功能性研究 ? 免疫疾病的監(jiān)控 ? 疫苗研發(fā)，藥效評價，總體免疫功能分析 ? 傳染性疾病 ? 腫瘤研究 調節(jié)性 T細胞研究進展 BD Biosciences Immune Function 免疫耐受機制 ? 以往研究認為：（“被動”方式） ?胸腺細胞及前 B（ preB）細胞在中樞免疫器官中的克隆清除 ?進入外周的成熟淋巴細胞表達針對自身抗原的識別受體被誘導進入免疫無能狀態(tài)而不表現(xiàn)任何自身反應性 ?部分淋巴細胞對自身抗原的免疫忽視 BD Biosciences Immune Function 免疫耐受機制 ? 近年研究表明 ： （“主動”方式） ?調節(jié)性 T（ Tr）細胞以“主動”的方式維持自身免疫耐受 這一發(fā)現(xiàn)將改變我們對自身免疫耐受及免疫調節(jié)機制的認識，并將對免疫學基本理論的發(fā)展產(chǎn)生重大影響。 BD Biosciences Immune Function 調節(jié)性 T細胞的特異性標志 ? FOXP3（ Forkhead box protein P3）是一個 50kD的轉錄因子，也稱為 Scurfin、 JM IPEX。它是一個主要調節(jié)基因 。 ? CD4+/CD25細胞上 FOXP3的轉錄表達可以誘導 GITR、CD103和 CTLA4的表達，并且促使調節(jié)性 T細胞表型形成。 ? FOXP3在 X連鎖自身免疫－過敏失調綜合征（ XLAAD或IPEX）患者中發(fā)生突變。 ? FOXP3過度表達會引起機體的免疫應答下降，表明它是一個調節(jié) T細胞活性的主要轉錄因子。 ? FOXP3表達于細胞內(nèi) BD Biosciences Immune Function 調節(jié)性 T細胞分類 ? 根據(jù)來源、特異性及效應機制可分為天然調節(jié)性 T細胞和獲得性調節(jié)性 T細胞 ? 天然性調節(jié)性 T細胞：在正常人和小鼠的外周血及脾臟組織的 CD4+T細胞中約有 5～ 10％的細胞持續(xù)高表達 CD25分子，該群細胞從胸腺中發(fā)育，組成性表達 foxp3，在體內(nèi)外發(fā)揮免疫調節(jié)功能 ? 獲得性調節(jié)性 T細胞：是由外周 T細胞在特定的條件下分化出來，通過分泌高水平的 IL10和 TGFβ而發(fā)揮其抑制功能 . BD Biosciences Immune Function Regulatory T Cells Background: its Development Thymus Periphery T cell precursor Tr1 Th3 FoxP3 ?? iDC and/or in the Presence of IL10 And/or TGFb Conventional T cell Na239。ve T cell Naturally occurring Treg cell Adaptive Treg cell CD25 GITR CTLA4 FoxP3+ CD4 CD127 CD25 GITR CTLA4 FoxP3+ CD4 CD127 FoxP3 BD Biosciences Immune Function 人 Tr細胞表達特征： CD127+ ? CD127是非二聚體 IL7受體 ? CD127表達于胸腺細胞， T、 B祖細胞，成熟 T細胞，單核細胞及其它淋巴細胞和骨髓細胞 ? T細胞活化后 CD127表達下調 ? CD127表達下調發(fā)生在 Tr細胞 ? CD127下調同時 CD25高表達、 FoxP3+為 Tr細胞 ? CD127優(yōu)于傳統(tǒng)的 FoxP3+－－保證了細胞的活性 BD Biosciences Immune Function 從 Human PBMC’s中分離 Tr細胞 BD Biosciences Immune Function FoxP3染色確認 Tr細胞 BD Biosciences Immune Function FoxP3染色確認 Tr細胞 BD Biosciences Immune Function 小結 ? CD127弱表達 ? FoxP3+CD127loCD25hiint ? CD127和 FoxP3聯(lián)合應用于 Tr細胞的功能性研究（體內(nèi)體外） 樹突狀細胞 （ dendritic cell， DC） BD Biosciences Immune Function DC的生物學特點 ? DC因其具有膜樣或樹突樣突起而得名 ? DC包括郎罕氏細胞、間隙 DC、濾泡 DC（ FDC）、并指 DC（ IDC）等等。其在體內(nèi)含量甚微，僅占外周血單個核細胞（ PBMC）的 1％以下， 但分布非常廣泛， 在血液、肝、脾、淋巴結及非免疫器官組織中都有存在。 BD Biosciences Immune Function DC的分化和成熟 ? DC可分為 前體 DC， 未成熟 DC， 成熟 DC ? DC起源于骨髓 CD34+多能細胞， 在 GMCSF作用下，進一步分化為DC前體細胞，包括髓系前體和淋巴系前體，并離開骨髓進入外周血 。 ? 在 外周血中至少有兩種 DC前體被鑒定出來： Plasmacytoid DC——PDC——漿細胞樣的樹突細胞 Myeloid DC——MDC——髓樣的樹突細胞 ? 血液中的前體 DC隨血液遷移到 皮膚、胃腸道、心、肝、肺等非淋巴器官發(fā)育為未成熟 DC ? 未成熟 DC攝取外來抗原后，可自發(fā)成熟，由外周向次級淋巴器官歸巢 ? 在成熟過程中， DC攝取和加工處理外來抗原的能力逐漸減弱，而遞呈抗原的功能逐漸增強 BD Biosciences Immune Function A review of Jacques Banchereau BD Biosciences Immune Function 樹突狀細胞的可塑性 ? DC在不同細胞因子和生長因子的作用下可以向著不同的方向分化 ? DC分化過程中的不同刺激引導它們向多種組織和器官移動，在這些組織中擔當起對抗入侵感染因素的哨兵 BD Biosciences Immune Function DC的生物學功能 ? DC是一類抗原呈遞細胞（ APC），在捕獲和處理抗原后，將抗原遞呈給特殊的初始 T淋巴細胞，引發(fā)初次免疫反應，在誘導免疫耐受和調控免疫活性方面扮演著重要角色， DC是機體內(nèi)惟一能激活初始 T細胞的 APC。 ? DC還可以通過激活巨噬細胞， NK細胞， NK樣 T細胞和嗜酸性粒細胞引發(fā)機體對入侵感染因素的反應，從而連接天然免疫系統(tǒng)和適應性免疫系統(tǒng) ? DC受細胞因子調控的同時 , 本身也可產(chǎn)生多種細胞因子 , 如 IFNα, IL 12, GM CSF, IL 1, IL 6和 TNF α等 BD Biosciences Immune Function DC將 Ag提呈給初始 T細胞 BD Biosciences Immune Function DC的表面標志 ? 人 DC的主要特征性表面標志為 CD1a和 CD83， CD83還是 DC充分成熟的標志。 ? 成熟 DC高表達 CD80（ B71）， CD86， CD40和 CD54等共刺激分子，而未成熟 DC不表達或低表達這些分子 ? 未成熟 DC具有強大的內(nèi)吞作用，并高表達大多數(shù)趨化因子受體 ? 所有 DC共同的突出特點是能高水平表達 MHCII類分子如 HLADR，DC成熟過程突出的標志是 MHCII類分子的重分布，從