殼寡糖的酶法制備和分離技術(shù)可行性研究報(bào)告(編輯修改稿)
2025-06-03 22:38 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一性差，分離純化難度高以及污染嚴(yán)重等問題；物理方法也有一定的缺點(diǎn), 不能作為主體方法用于殼寡糖的制備；酶降解法條件溫和, 產(chǎn)物不用脫鹽，工藝易于控制, 易于得到所需聚合度的殼寡糖, 并且對(duì)環(huán)境不產(chǎn)生污染，是較理想的制備方法，特別是酶降解和反應(yīng)器聯(lián)合方法, 已經(jīng)在產(chǎn)業(yè)化道路上邁出第一步，但在制備工藝上還有許多有待改進(jìn)提高產(chǎn)量的地方。20世紀(jì)90年代末，酶法生產(chǎn)殼寡糖在日本、韓國實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化。我國對(duì)該產(chǎn)品的研究雖起步較晚，但近年來做了大量的工作，并趨于活躍。2002年8月，山力、濟(jì)南海得貝公司利用復(fù)合酶法制備殼寡糖的生產(chǎn)線正式投產(chǎn)，殼寡糖在我國第一次實(shí)現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。復(fù)合酶比起專一性酶制備殼寡糖，所得降解產(chǎn)物相對(duì)分子量分布不容易控制，聚合度不夠均一。但因?yàn)槟壳笆袌錾蠈Ｒ恍悦竷r(jià)格昂貴，如何尋找到降解效果好、成本又不高的專一性酶，是一個(gè)急需解決的技術(shù)難題。而這一技術(shù)難題的解決無疑將為我國整個(gè)甲殼素行業(yè)的發(fā)展提供幫助。三、項(xiàng)目主要研究開發(fā)內(nèi)容、技術(shù)關(guān)鍵以及科研創(chuàng)新的主要方式（一）主要研究內(nèi)容：專一性酶菌種的篩選。通過制作以殼聚糖為唯一碳源的平板篩選分離培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。采用平板劃線分離法接種，放入30℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)34天。之后，觀察培養(yǎng)基，取有透明圈的平板，挑選菌種，進(jìn)一步進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，測定酶活。產(chǎn)酶菌種的發(fā)酵培養(yǎng)。根據(jù)已優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)條件進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，對(duì)發(fā)酵上清液中粗酶，采用75%飽和度乙醇沉淀，獲得粗酶粉，測定酶活力，低溫保存。殼寡糖的酶法制備和性質(zhì)研究通過還原端基、酶解產(chǎn)物聚合度、水解液調(diào)堿性后透光率變化測定以及酶解產(chǎn)物的TLC、 HPLC分析，研究殼聚糖酶降解殼聚糖過程中殼聚糖脫乙酰化度、殼聚糖濃度、酶用量、反應(yīng)時(shí)間和pH值對(duì)酶促反應(yīng)速率和產(chǎn)物聚合度的影響。研究殼寡糖的分離技術(shù)、純化工藝；超濾/離子交換樹脂 殼寡糖的含量檢測方法研究；采用高效液相色譜法(HPLC)、測定低聚糖類的含量。殼寡糖產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定。（二）關(guān)鍵技術(shù)：高活力殼聚糖酶制劑的制備以及殼聚糖酶酶活的測定；殼寡糖的酶法制備技術(shù)；殼寡糖的分離技術(shù)；殼寡糖制品分析檢驗(yàn)技術(shù)，包括還原端基、酶解產(chǎn)物聚合度、水解液調(diào)堿性后透光率變化的測定；殼寡糖的含量和純度、相對(duì)分子質(zhì)量、雜質(zhì)含量的測定；殼寡糖水溶性、水分的測定以及酶解產(chǎn)物的TLC 、HPLC分析。（三）創(chuàng)新的主要方式：殼寡糖產(chǎn)品加工采用酶法工藝，克服了傳統(tǒng)化學(xué)法分子量分布范圍寬、易變色的缺點(diǎn)，且不會(huì)帶來環(huán)境污染問題為殼聚糖的高值化利用提供了新途徑。四、項(xiàng)目預(yù)期目標(biāo)（一）主要技術(shù)
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