β-內(nèi)酰胺類抗生素高分子雜質(zhì)測定法(編輯修改稿)
2025-06-03 18:15 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 5 2 磷酸緩沖液 4121 檸檬酸緩沖液 3120 流動相對頭孢他啶高分子雜質(zhì)色譜行為的影響 2022/6/4 40 ?分析證明，影響這種變化的決定因素是緩沖液中的 陰離子種類 ，陰離子所帶的負電荷越多，溶質(zhì)的 Kav值相對越大，色譜峰也越易拖尾。 2022/6/4 41 色譜條件的影響 ? pH的影響 對于弱酸，流動相的 pH值越小，組分的 k值越大，當 pH值遠遠小于弱酸的 pKa值時，弱酸主要以分子形式存在；對弱堿，情況相反。 當流動相中有多元酸 /鹽存在時， pH通過影響多元酸的解離，改變緩沖液中的陰離子類型，來改變?nèi)苜|(zhì)的保留時間。 2022/6/4 42 色譜條件的影響 ? 流速越大，溶質(zhì)的保留值減小。反之，溶質(zhì)的保留值增大。 這是由于流速較快時，溶質(zhì)分子進入凝膠顆粒內(nèi)部的概率減小，導(dǎo)致與葡聚糖凝膠相互作用的機會減少之故。 2022/6/4 43 色譜條件的影響 ? β內(nèi)酰胺抗生素在 Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng)中的半峰寬與其保留時間均呈線性關(guān)系。也就是說，保留時間越大，半峰寬越大，峰型越難看。 2022/6/4 44 第三節(jié) 分子排阻色譜法 ?中國藥典 2022版二部規(guī)定， 分子排阻色譜法是根據(jù)待測組分的分子大小進行分離的一種液相色譜技術(shù)，其分離原理即為凝膠色譜柱的分子篩機制。 β內(nèi)酰胺類抗生素中的高分子雜質(zhì)的測定采用分子排阻色譜法。 2022/6/4 45 自身對照外標法 ?原理 —— 在 Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng)中，由于 Sephadex G10的排阻分子量僅為 700道爾頓，因此，除部分寡聚物外， β內(nèi)酰胺抗生素中的高分子雜質(zhì)在色譜過程中均不保留；即所有高分子雜質(zhì)表現(xiàn)為單一的色譜峰，其kav=0 。 2022/6/4 46 自身對照外標法 ?在特定條件下， β內(nèi)酰胺抗生素由于分子間的氫鍵、靜電、疏水相互作用等次級相互作用，可以形成 締合物 ，導(dǎo)致其表觀分子量增大。此時，在 Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng)中和高分子雜質(zhì)具有相似的色譜行為，即在kav=0處表現(xiàn)為單一的色譜峰。 2022/6/4 47 自身對照外標法 ?測定方法 —— 利用以上所述原理，在 Sephadex G10凝膠色譜系統(tǒng)中，以藥物自身為對照品，測定其在特定條件下 締合時的峰 響應(yīng)指標；再改變色譜條件，測定樣品高分子雜質(zhì)和藥物分離后， kav=0處 高分子雜質(zhì)的峰 響應(yīng)指標；按外標法計算，既得藥品中高分子雜質(zhì)相當于藥品本身的相對含量。 流動相 B：水 流動相 A：磷酸鹽緩沖液 2022/6/4 48 ?為什么采用自身對照外標法？ 定量分析法的理論基礎(chǔ)：通過檢測器的物質(zhì)的量與檢測器的響應(yīng)信號成正比，其檢測器響應(yīng)可以是面積或峰高。 含量 響應(yīng)值 (A或H) 定量方法： ? 外標法 ? 內(nèi)標法 ? 峰面積歸一法 ?主成分對照法 2022/6/4 49 ? 以 待測物質(zhì)的對照品 為參照物，根據(jù)供試品的量和對照品的量以及對應(yīng)的響應(yīng)信號進行定量的方法。 高聚物對照品較難制備，即使制備的高聚物對照品由于不穩(wěn)定也較難保存，而且不同批制備的對照品很難同質(zhì)。 β內(nèi)酰胺抗生素高分子雜質(zhì)具有高度的不均一性和不確定性。 2022/6/4 50 ? 2. 歸一化法 將測得色譜圖上， 所有色譜峰 面積求和，與每個色譜峰面積相比較，即得每個色譜峰的百分比，把所有的色譜峰的百分比相加即得 100%，稱為峰面積歸一化。 對于高分子雜質(zhì)來說，其含量和藥物本身含量相差甚遠，測量誤差較大。 2022/6/4 51 高分子雜質(zhì) 樣品主峰 2022/6/4 52 ? 內(nèi)標法是結(jié)合了峰面積歸一法和外標法的優(yōu)點的一種方法，它在加入內(nèi)標后，按峰面積歸一法的分析方法進行分析，這就避免了由于進樣的一致性及樣品歧視效應(yīng)導(dǎo)致的偶然誤差，因而，它的分析精密度也是比較高的，是氣相色譜的一種比較理想的定量分析方法。 2022/6/4 53 ? 由于 Sephadex G10凝膠色譜分離系統(tǒng)的柱效較低，進樣微量的藥物很難表現(xiàn)出色譜峰。 2022/6/4 54 基本分析方法 2022/6/4 55 儀 器 ? 1）轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)速范圍： 120rpm,正反轉(zhuǎn)可逆 2）調(diào)速方式：無級調(diào)速配以線性數(shù)碼旋鈕連續(xù)可調(diào) 3）速度分辯率： 30rpm以下為 ， 30rpm以上為 1rpm ? 硅膠管 1）粗細合適 2）壁厚 3）耐磨 2022/6/4 56 儀 器 ? 合理選擇層析柱的長度和直徑，是保證分離效果的重要環(huán)節(jié)，理想的層析柱的直徑與長度之比一般為1： 25～ 1： 100. 2022/6/4 57 儀 器 ? β內(nèi)酰胺抗生素通常都有較明顯的紫外吸收特征，所以測定中一般選擇紫外檢測器，通常用到的檢測波長是 254nm。 2022/6/4 58 儀 器 ? 積分儀 ? 選擇性記錄 , ? 進行積分處理和定量計算 色譜工作站 ? 色譜控制 \數(shù)據(jù)采集 \記錄 \計算 \分析 \圖譜保存 \實驗結(jié)果編排 \打印于一體 2022/6/4 59 ?系統(tǒng)適用性試驗 2022的保留時間來表示高分子雜質(zhì)的保留特征，考察對照品色譜峰及高分子雜質(zhì)色譜峰與藍色葡聚糖 2022溶液色譜峰保留時間的比值均應(yīng)不超過某一限度。 中國藥典要求是 ～ 。 對照品峰和供試品溶液聚合物峰與相應(yīng)色譜中藍色葡聚糖 2022峰的保留時間的比值也是 ～ 。 2022/6/4 60 流動相 A：磷酸鹽緩沖液 流動相 B：水 2022/6/4 61 ? 在兩種流動相系統(tǒng)中，按藍色葡聚糖2022峰計算，理論板數(shù)均 不小于 700。 2212σ ??????????????????Wtntn RR 或2022/6/4 62 ? 在兩種流動相系統(tǒng)中，按藍色葡聚糖2022峰計算，拖尾因子均 小于 。 ABA
教學課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1