半薄超薄切片技術ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-02 12:50 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 有毒 (通風櫥 ) 醋酸－巴比妥緩沖液 固定時不產(chǎn)生沉淀 易長細菌 ,只適于配鋨酸固定液 ,不適合配醛類 (緩沖失效 ) 脫水 ? 目的 將組織內(nèi)的游離水徹底清除 ,保證包埋介質(zhì) 完全 滲入組織內(nèi)部。 ? 方法 用一種和水及包埋劑均能相混溶的液體來取代水 ,常用的脫水劑是乙醇 和 丙酮 。 注意事項 ? 脫水梯度逐級進行 , 急劇脫水會引起細胞收縮 。（ 30% →50%→70%→80%→95%→100%→100% ） 。 ? 更換溶液動作要快 。長時間暴露空氣中會在組織內(nèi)外產(chǎn)生微小氣泡，影響滲透； ? 脫水過程中應在 70%脫水劑中 4℃ 停留或過夜 ,過度脫水不僅引起更多物質(zhì)的抽提，而且會使樣品發(fā)脆，造成切片困難 。 ? 置換 用脫水劑：環(huán)氧丙烷（ Epon812）、二甲苯（石蠟）。 4 滲透和包埋、聚合 滲透就是利用 包埋劑 滲入到組織內(nèi)部取代 脫水劑 的過程。 包埋劑在單體狀態(tài)時 (聚合前 )為液體，能夠滲入組織內(nèi)，當加入某些催化劑，經(jīng)加溫或其他條件，能聚合成固體，以便進行超薄切片。 包埋、聚合 包埋操作： 將組織塊包埋在多孔橡膠包埋模板中或膠囊中，一定條件下可聚合硬化，形成包埋塊。 包埋板 1 包埋管 膠囊 常用的包埋劑 Epon812 滲透效果好，切片的圖像對比度強，電子束照射下穩(wěn)定 吸潮性很強，潮濕和炎熱的環(huán)境下，樹脂會變軟 Spurr 黏度低，可較好地滲透具有 硬的木質(zhì)化細胞壁的植物細胞 、脂肪含量很高的 內(nèi)胚乳 、高度液泡化的 成熟果實 ,電子束照射下穩(wěn)定 圖像對比度較弱 Araldite 聚合均勻，收縮量很小，超薄切片可直接沾在沒有支持膜的載網(wǎng)上，電子束照射下十分穩(wěn)定，用重金屬染色時易著色。 ◆ 環(huán)氧樹脂 (epoxy resin) ◆ 水溶性樹脂－丙烯酸類樹脂 LR White、 Lowicryls、 GMA、 PEG 等，適于進行組織化學和細胞化學研究的樣品制備。 適于低溫包埋，通常用于免疫電鏡樣品的制備。 包埋操作中的注意事項 167。 所有 試劑 要 防潮 ，最好存放在干燥器中； 167。 所用 器皿 應烘干； 167。 配包埋劑時，每加入一種試劑要攪拌均勻； 167。 包埋時動作
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