半薄超薄切片技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-02 12:50 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 有毒 (通風(fēng)櫥 ) 醋酸－巴比妥緩沖液 固定時(shí)不產(chǎn)生沉淀 易長(zhǎng)細(xì)菌 ,只適于配鋨酸固定液 ,不適合配醛類 (緩沖失效 ) 脫水 ? 目的 將組織內(nèi)的游離水徹底清除 ,保證包埋介質(zhì) 完全 滲入組織內(nèi)部。 ? 方法 用一種和水及包埋劑均能相混溶的液體來(lái)取代水 ,常用的脫水劑是乙醇 和 丙酮 。 注意事項(xiàng) ? 脫水梯度逐級(jí)進(jìn)行 , 急劇脫水會(huì)引起細(xì)胞收縮 。（ 30% →50%→70%→80%→95%→100%→100% ） 。 ? 更換溶液動(dòng)作要快 。長(zhǎng)時(shí)間暴露空氣中會(huì)在組織內(nèi)外產(chǎn)生微小氣泡，影響滲透； ? 脫水過(guò)程中應(yīng)在 70%脫水劑中 4℃ 停留或過(guò)夜 ,過(guò)度脫水不僅引起更多物質(zhì)的抽提，而且會(huì)使樣品發(fā)脆，造成切片困難 。 ? 置換 用脫水劑：環(huán)氧丙烷（ Epon812）、二甲苯（石蠟）。 4 滲透和包埋、聚合 滲透就是利用 包埋劑 滲入到組織內(nèi)部取代 脫水劑 的過(guò)程。 包埋劑在單體狀態(tài)時(shí) (聚合前 )為液體，能夠滲入組織內(nèi)，當(dāng)加入某些催化劑，經(jīng)加溫或其他條件，能聚合成固體，以便進(jìn)行超薄切片。 包埋、聚合 包埋操作： 將組織塊包埋在多孔橡膠包埋模板中或膠囊中，一定條件下可聚合硬化，形成包埋塊。 包埋板 1 包埋管 膠囊 常用的包埋劑 Epon812 滲透效果好，切片的圖像對(duì)比度強(qiáng)，電子束照射下穩(wěn)定 吸潮性很強(qiáng)，潮濕和炎熱的環(huán)境下，樹脂會(huì)變軟 Spurr 黏度低，可較好地滲透具有 硬的木質(zhì)化細(xì)胞壁的植物細(xì)胞 、脂肪含量很高的 內(nèi)胚乳 、高度液泡化的 成熟果實(shí) ,電子束照射下穩(wěn)定 圖像對(duì)比度較弱 Araldite 聚合均勻，收縮量很小，超薄切片可直接沾在沒有支持膜的載網(wǎng)上，電子束照射下十分穩(wěn)定，用重金屬染色時(shí)易著色。 ◆ 環(huán)氧樹脂 (epoxy resin) ◆ 水溶性樹脂－丙烯酸類樹脂 LR White、 Lowicryls、 GMA、 PEG 等，適于進(jìn)行組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)研究的樣品制備。 適于低溫包埋，通常用于免疫電鏡樣品的制備。 包埋操作中的注意事項(xiàng) 167。 所有 試劑 要 防潮 ，最好存放在干燥器中； 167。 所用 器皿 應(yīng)烘干； 167。 配包埋劑時(shí)，每加入一種試劑要攪拌均勻； 167。 包埋時(shí)動(dòng)作
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