半薄超薄切片技術(shù)ppt課件(存儲(chǔ)版)
【正文】 ★ 固定 ★ 漂洗、脫水 ★ 滲透、包埋 ★ 超薄切片 ★ 超薄切片染色 每一步都是關(guān)鍵 ,任何 環(huán)節(jié)的疏忽 都會(huì)導(dǎo)致制片的 失敗 1 取材 取材的基本要求 (1)動(dòng)作迅速 ，取材后快速放入固定液中； (2)體積要小 ，一般 1㎜ 3， 如果來(lái)不及，例如野外取材，也可將組織修成（ 1 1 2） mm大小長(zhǎng)條形，之后再進(jìn)行分割。 ︾ 目的是盡可能使細(xì)胞中的各種 細(xì)胞器 以及大分子結(jié)構(gòu) 保持生活狀態(tài)，牢固地固定在它們 原來(lái) 所在的 位置 上，不發(fā)生位移。 ? 方法 用一種和水及包埋劑均能相混溶的液體來(lái)取代水 ,常用的脫水劑是乙醇 和 丙酮 。 包埋、聚合 包埋操作： 將組織塊包埋在多孔橡膠包埋模板中或膠囊中，一定條件下可聚合硬化，形成包埋塊。 包埋時(shí)動(dòng)作要輕巧，防止產(chǎn)生氣泡； 167。 C, overnight,可以停下） 80%95%100%100%） 用丙酮置換乙醇： 乙醇 :丙酮 =1:1，純丙酮 2次， 每級(jí) 2030分鐘 6）滲透 丙酮 :樹(shù)脂 =2:1， 1:1（可以停下了， overnight） ， 1:2 23h/級(jí) 純樹(shù)脂 12h， 換純樹(shù)脂 12h （從進(jìn)入樹(shù)脂開(kāi)始更要嚴(yán)格防潮?。? 7）包埋聚合 60176。 C保存 2）漂洗： PBS 充分漂洗 34次， 2030Min/次 3）后固定 1%鋨酸固定 in PBS， 4176。 所用 器皿 應(yīng)烘干； 167。 4 滲透和包埋、聚合 滲透就是利用 包埋劑 滲入到組織內(nèi)部取代 脫水劑 的過(guò)程。 (4)高錳酸鉀 ※ 強(qiáng)氧化劑，較好固定 脂蛋白 。 植物材料的取材可以先切成薄片，經(jīng)適當(dāng)固定后再切成小方塊繼續(xù)固定。 (3)減小損傷 ，切割器械鋒利，操作輕，避免牽拉、挫傷與擠壓組織。 ︾ 良好的固定是獲得精細(xì)結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)圖象的關(guān)鍵。 注意事項(xiàng) ? 脫水梯度逐級(jí)進(jìn)行 , 急劇脫水會(huì)引起細(xì)胞收縮 。 包埋板 1 包埋管 膠囊 常用的包埋劑 Epon812 滲透效果好，切片的圖像對(duì)比度強(qiáng)，電子束照射下穩(wěn)定 吸潮性很強(qiáng)，潮濕和炎熱的環(huán)境下，樹(shù)脂會(huì)變軟 Spurr 黏度低，可較好地滲透具有 硬的木質(zhì)化細(xì)胞壁的植物細(xì)胞 、脂肪含量很
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