半薄超薄切片技術(shù)ppt課件-wenkub
2023-05-21 12:50:13 本頁面
【正文】 的固定液的小瓶中。 (3)減小損傷 ，切割器械鋒利，操作輕，避免牽拉、挫傷與擠壓組織。 (4)低溫操作 ，最好在低溫 (0℃ ～ 4℃ )下進(jìn)行，降低酶的活性。 植物材料的取材可以先切成薄片，經(jīng)適當(dāng)固定后再切成小方塊繼續(xù)固定。 常用固定劑 (1)四氧化鋨 (OsO4) OSMIUM TETRAOXIDE ※ 強(qiáng)氧化劑，與氮原子有較強(qiáng)的親和力，可較好的固定 脂肪、蛋白質(zhì)、磷酸脂蛋白 ； ※ 固定變性 DNA及核蛋白， 不能 固定天然 DNA、 RNA及糖原； ※ 具有 固定 和 電子染色 雙重作用，樣品圖象反差較好； ▼ 酶的鈍化劑，不適合細(xì)胞化學(xué)的固定； ▼ 與乙醇 /醛類反應(yīng)生產(chǎn)沉淀－－漂洗 ● 分子較大 ,滲透速度緩慢 ,但反應(yīng)迅速 ,均勻 固定深度 ㎜ ； ● 固定時(shí)間一般為 12小時(shí) ,時(shí)間太長易使組織變脆 ,切片困難； ● 鋨酸固定液常用濃度： 1％－ 2％ 。 (4)高錳酸鉀 ※ 強(qiáng)氧化劑，較好固定 脂蛋白 。（ 30% →50%→70%→80%→95%→100%→100% ） 。 4 滲透和包埋、聚合 滲透就是利用 包埋劑 滲入到組織內(nèi)部取代 脫水劑 的過程。 ◆ 環(huán)氧樹脂 (epoxy resin) ◆ 水溶性樹脂－丙烯酸類樹脂 LR White、 Lowicryls、 GMA、 PEG 等，適于進(jìn)行組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)研究的樣品制備。 所用 器皿 應(yīng)烘干； 167。 皮膚盡量不要接觸包埋劑，以免引起皮炎； 5 超薄切片 削去表面的包埋劑，露出組織，然后在組織的四周以和水平面成 45度的角度削去包埋劑，修成金字塔形，頂面修成梯形或長方形，每邊的長度為 ～ 。 C保存 2）漂洗： PBS 充分漂洗 34次， 2030Min/次 3）后固定 1%鋨酸固定 in PBS， 4176。 ※ 幼嫩材料用 50%酒精代替 70%酒精，防止材料收縮； ※ 加入 5%甘油可防固定液蒸發(fā)和材料變硬。 C, overnight,可以停下） 80%95%100%100%） 用丙酮置換乙醇： 乙醇 :丙酮 =1:1，純丙酮 2次， 每級 2030分鐘 6）滲透 丙酮 :樹脂 =2:1， 1:1（可以停下了， overnight） ， 1:2 23h/級 純樹脂 12h， 換純樹脂 12h （從進(jìn)入樹脂開
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