【文章內(nèi)容簡介】 10都是大致位點(diǎn) 46 47 ?因子起著識(shí)別啟動(dòng)子的作用； 在菌體細(xì)胞中，只有很少的 RNA聚合酶分子 （核心酶）呈游離狀態(tài)， 大部分與 DNA分子結(jié)合存在 。這種結(jié)合為松弛型結(jié)合，形成松弛型復(fù)合物，并且核心酶對(duì)啟動(dòng)子無特殊的親和力； 全酶形成后，對(duì)啟動(dòng)子的親和力大大提高， 轉(zhuǎn)錄酶沿 DNA 滑行至啟動(dòng)子，由 ? 因子識(shí)別并緊密結(jié)合， 形成緊密 閉合 型復(fù)合物； （二）轉(zhuǎn)錄的起始 48 全酶在很長的基因組中（大腸桿菌 106bp）尋找到約 60bp的啟動(dòng)子是一個(gè)復(fù)雜的過程； RNA聚合酶 沿 DNA 滑行至啟動(dòng)子，由 ? 因子識(shí)別并緊密 與啟動(dòng)子 35序列 結(jié)合后，與 DNA形成封閉型啟動(dòng)子 酶二元復(fù)合物 （ closed binary plex） ； 與－ 10區(qū)左右的 DNA發(fā)生熔解， 在 TATAAT 盒處解鏈，形成 12～ 17bp的單鏈區(qū)，形成開放型啟動(dòng)子二元復(fù)合物；此時(shí) RNA聚合酶大約與 75bp 的 DNA（－ 55～＋20）相互接觸； 49 在開放型啟動(dòng)子起始復(fù)合物中， RNA聚合酶 移動(dòng)到轉(zhuǎn)錄起點(diǎn) I，酶 上的起始位點(diǎn)和延伸位點(diǎn)被相應(yīng)的核苷酸占據(jù)， 在 ?亞基的催化下形成第一個(gè)磷酸二酯鍵 ，從而形成 酶 啟動(dòng)子 rNTP三元復(fù)合體 （ ternary plex） 轉(zhuǎn)錄開始，當(dāng) RNA 合成至長約 9 核苷酸時(shí)， ?因子解離下來，形成延伸復(fù)合物，此時(shí)核心酶約與 55bp（－35～＋ 20）的 DNA相互接觸。 50 – 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 1 1 0 2 0 3 0 起始復(fù)合體 含 σ 因子 覆蓋 7 5 ~ 8 0 b p 開始的延伸復(fù)合體 丟失 σ 因子 核心酶已離開 – 35 ~ – 55 區(qū)域 普通的延伸復(fù)合體 在 1 5 ~ 2 0 b p 處形成 RN A 酶僅覆蓋 3 0 ~ 4 0 b p 圖 1 2 1 0 RN A 聚合酶起始轉(zhuǎn)錄（三） RNA的合成延伸 ? 在酶分子上有兩個(gè)核苷酸結(jié)合位點(diǎn)，一是 起始位點(diǎn) ，一是 延伸位點(diǎn) ； ? 當(dāng)兩個(gè)位點(diǎn)都與模板互補(bǔ)的核苷酸結(jié)合后， 第一磷酸二酯鍵才能形成； ? 隨著 RNA聚合酶沿著模板鏈的滑動(dòng)，由 β 亞 基 催化合成 RNA鏈； ? 延伸方向?yàn)?5′ 3′ 。 轉(zhuǎn)錄過程 轉(zhuǎn)錄酶沿編碼鏈 5? ? 3? 方向移動(dòng)，開放復(fù)合體（保持約 17bp 長）隨之前移， RNA 鏈以 5? ? 3? 方向合成延伸，速度約為 43 核苷酸 / 秒。 酶的后端移 酶的前端動(dòng) 1 b p 3 5 b p 不移動(dòng) RN A 上加 1 N t酶的合端繼續(xù)移動(dòng) , 酶的前端每移動(dòng) 1 b p RN A 就 不移動(dòng)增加 1 N t , 目前已增 3 4 bp加了 8 N t . 酶的前端把連續(xù)地 向前移動(dòng)數(shù)個(gè) bp酶的合端繼續(xù)移 2 7 bp動(dòng) 1 b p , RN A 已增加 9 N t 3 5 bp 圖 1 2 1 1 在延伸時(shí) RN A p o l 的移動(dòng)特點(diǎn) 三、轉(zhuǎn)錄的終止 ? 在開放復(fù)合體中， RNA 與 DNA 的氫鍵結(jié)合能夠防止轉(zhuǎn)錄酶脫離 DNA。當(dāng) RNADNA 雜交區(qū)被迫分離時(shí)，則轉(zhuǎn)錄酶和 RNA 均脫離 DNA，轉(zhuǎn)錄結(jié)束。 ? 終止子（ terminator,t）： 在轉(zhuǎn)錄過程中，提供轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)的序列，按終止方式不同分為 強(qiáng)終止子 和 弱終止子。 ? 強(qiáng)終止子：內(nèi)部終止子 （ intrinsic terminators） 或稱自發(fā)終止； ? 弱終止子：需要 ρ 因子 （ rho factor） 又稱為 ρ 依賴性終止子 （ rhodependent terminator） 。 自發(fā) 終止 ? 在 RNA 鏈中需要兩種序列元件： ? 位于 RNA 3? 末端的富含 U 的序列，即 U串； ? 靠近 RNA 3? 末端的自互補(bǔ)序列（即回文序列），可形成莖 環(huán)結(jié)構(gòu)。 ? 莖 環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄酶停止合成 RNA。接著由于 UA 間氫鍵較弱，故而 RNA 自行脫離 DNA，從而終止轉(zhuǎn)錄。 強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu) … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCTTTTTTNNN… … NNTTCGCGGCNNNGGCCGCGAAAAAANNN… DNA … NNAAGCGCCGNNNCCGGCGCUUUUUUNNN… RNA N N N N N G C C G C G G C C G G C C U … NNNNC U UUUU… OH 3’ mRNA 強(qiáng)終止子結(jié)構(gòu)的模式圖 發(fā)夾結(jié)構(gòu) 強(qiáng)終止子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： (1)有回文結(jié)構(gòu)存在； (2)莖的區(qū)域內(nèi)富含 GC； (3)強(qiáng)終止子 3′ 端上有連續(xù) 6個(gè) U。 終止機(jī)制： * 終止作用發(fā)生在 RNA水平上 ,形成的頸環(huán)空間結(jié)構(gòu)阻止了轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行 ,同時(shí) 3′ 端上連續(xù) 6個(gè) U使 RNA易解離 ,脫離 DNA模板 ,于是整個(gè)mRNA釋放出來 ,轉(zhuǎn)錄停止 。 依賴于 ? 因子的終止 ? 大腸桿菌中的 ? 因子為堿性蛋白，分子量為 46 kDa，有解旋酶功能。 ? ? 因子識(shí)別 RNA 上的 rut 位點(diǎn)，與之結(jié)合，然后向轉(zhuǎn)錄酶移動(dòng)。當(dāng)轉(zhuǎn)錄酶到達(dá)終止序列時(shí)，則停止合成 RNA，于是 ? 因子趕上轉(zhuǎn)錄酶，使 RNADNA 雜交鏈解開，從而 RNA 和轉(zhuǎn)錄酶脫離，轉(zhuǎn)錄結(jié)束。 ? 含有 IR序列，也能形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)； ? C的含量多， G的含量少； ? 缺少 U串； *RNA聚合酶在此處暫停，若加入 ρ 因子， 則使轉(zhuǎn)錄停止在特定的終止位點(diǎn)。 ρ依賴性終止子結(jié)構(gòu)與終止機(jī)制 A U C GC U A C C U C A U A U C C GC A C C U C C U C A A A C GC U A C C U C GA