【文章內(nèi)容簡介】 一個測量參數(shù)， Y軸代表第二個測量參數(shù)。每個點代表一個細胞 .TwoParameter Data Displays點圖 (dot plot) 用等高線來表示細胞數(shù)，在一條等高線上細胞數(shù)相同，不同的等高線上細胞數(shù)不同。二維等高圖 縱軸與橫軸分別代表被測細胞的兩個測量參數(shù) ,Z軸為細胞數(shù)。假三維等高圖３ .多參數(shù)數(shù)據(jù)的顯示 在單一圖上同時顯示多參數(shù)是不可能的。實際工作中是 用若干個單參數(shù)直方圖和各種不同組合的雙參數(shù)數(shù)據(jù)顯示來反映各種信息的。 多參數(shù)測量另一重要意義是通過有關(guān)參數(shù)進行 “設(shè)門 ”分析 ( gating analysis )可以是單參數(shù)設(shè)門，也可以是雙參數(shù)設(shè)門 。單參數(shù)設(shè)門調(diào)出雙參數(shù)顯示簡稱 “一調(diào)二 ”。不難理解也有 “一調(diào)一 ”和 “二調(diào)一 ”和 “二調(diào)二”等。MultipleParameter Data Displays 三維坐標勻為參數(shù)（散射光或熒光）而非細胞數(shù)。多參數(shù)直方圖 一般利用所得參數(shù)的兩兩組合并利用設(shè)門（ Gate)技術(shù)，來分析參數(shù)之間的相互關(guān)系。多參數(shù)顯示Pseudo 3D Plot 3D Plot多參數(shù)顯示通過雙參數(shù)調(diào)閱單參數(shù)通過單參數(shù)調(diào)閱雙 參數(shù)１ . 單參數(shù)分布直方圖的設(shè)區(qū)分析２ . 細胞 DNA含量分布直方圖的數(shù)據(jù)分析３ . 雙參數(shù)數(shù)據(jù)的設(shè)門分區(qū)分析４ . 多參數(shù)數(shù)據(jù)的分析（三） FCM數(shù)據(jù)的分析１ .單參數(shù)分布直方圖的設(shè)區(qū)分析 這是單參數(shù)數(shù)據(jù)分析中最簡單的一種方法。由于 FCM一次測量的細胞數(shù)多，配合設(shè)門和調(diào)用等手段獲得感興趣的細胞參數(shù)分布直方圖。這種統(tǒng)計分布直方圖一般可直觀地反映出眾多有用的信息 。１ .單參數(shù)分布直方圖的設(shè)區(qū)分析 通過細胞 DNA含量測定，了解細胞增殖群體中 G0/G S、 G2/M細胞各占的比例，進而分析其細胞動力學各參數(shù)。這是 FCM的重要應用之一。 細胞 DNA含量分布直方圖的數(shù)據(jù)分析通常有兩種方法， 作圖分析法和計算機擬合法 ( Curve fitting )。２ .細胞 DNA含量分布直方圖的數(shù)據(jù)分析細胞 DNA含量分布直方圖的數(shù)據(jù)分析細胞 DNA含量分布直方圖的數(shù)據(jù)分析計算機擬合法適用范大，應用中要注意以下一些方面：1） FCM儀器 CV值與細胞熒光染色的好壞會 直接影響曲線擬合的結(jié)果。2）在細胞群體中數(shù)量較少的細胞亞群， 如 G2/M細胞群的分析誤差一般大于細 胞數(shù)量多的亞群。3）曲線擬合有時會出現(xiàn)偏離生物學意義的 分析結(jié)果。這種情況下，可改變參量或 選用其他數(shù)學模型重新分析 。３ .雙參數(shù)數(shù)據(jù)的設(shè)門分區(qū)分析 在雙參數(shù)的顯示圖上，細胞結(jié)構(gòu)和細胞功能相同的細胞亞群總表現(xiàn)為集中分布的趨勢，不同細胞亞群有其各自的分布區(qū)域。設(shè)門分區(qū)可以是方形、矩形、圓形、橢園形甚至各種不規(guī)則圖形，按細胞亞群實際的分布情況而定。 點圖 縱軸與橫軸分別代表被測細胞的兩個測量參數(shù) ,在圖中每一個點代表一個細胞雙參數(shù)數(shù)據(jù)的設(shè)門分區(qū)分析 多參數(shù)數(shù)據(jù)分析的關(guān)鍵在于如何正確通過設(shè)門和調(diào)用獲取有價值的單參數(shù)顯示和 /或雙參數(shù)顯示。由于多參數(shù)相關(guān)測量包含的信息量大，故經(jīng)常會用多個單參數(shù)和 /或雙參數(shù)顯示來全面反映其中的各種信息。 由于樣品細胞的種類、處理過程、染色方法等的差異，不可能規(guī)定不變的數(shù)據(jù)處理步驟。細致認真的數(shù)據(jù)處理可獲得大量的正確結(jié)果。４ .多參數(shù)數(shù)據(jù)的分析重點提要重點提要 :流式細胞術(shù) FCM如何采用層流技術(shù)？FCM細胞散色光信號FCM的熒光補償FCM的數(shù)據(jù)儲存方式FCM的不同顯示方式 流式細胞術(shù)樣品制備 Flow Cytometry Sample Preparation流式細胞術(shù)操作流程 ：培養(yǎng)細胞新鮮組織石蠟包埋單細胞懸液制備 熒光抗體標記 上機檢測表型測定 細胞分選繼續(xù)培養(yǎng)FISHPCR統(tǒng)計學分析FCM的細胞樣品制備技術(shù)三個部分：一、單分散細胞懸液制備二、選擇性分離細胞亞群三、細胞熒光染色 流式細胞術(shù)對細胞的分析檢測 必須 基于 單個細胞 的基礎(chǔ)上，這是 流式細胞術(shù)帶來的特殊要求 。一、單個分散細胞懸液的制備技術(shù)（一） 實體組織 的單細胞懸液的制備（二）石蠟包埋組織單細胞懸液的制備 常用的分散細胞的方法如下 酶消化法 機械法 化學試劑處理法（一）實體組織的單細胞懸液的制備（ 1） 原理（ 2）常用的酶類試劑（ 3） 酶反應的條件（ 4） 酶消化法的一般步驟酶消化法 ：（１） 原理 ：這種方法是利用 酶 的蛋白質(zhì)大分子 不能進入活細胞膜 ，但能夠 破壞 細胞與細胞之間的 膠原纖維 ，水解細胞間的 粘多糖成分，分解細胞間的細胞 緊密連結(jié)裝置 的蛋白性物質(zhì)，而使細胞能從組織塊上游離到懸浮液中，制備成細胞懸液。１、酶消化法： 如胃蛋白酶、胰蛋白酶、鏈蛋白酶等，其中胰蛋白酶 ( Trypsin )最常用。 ( Collagenase）：膠原酶能降解幾種分子類型的膠原。 其它常用的酶還有彈性蛋白酶，透明質(zhì)酸酶和木瓜蛋白酶等。 不同類型的組織其化學組成不相同使用不同種類的酶，見表 11。（２）常用的酶類劑表 11 酶種類的選擇胰蛋白酶 鏈蛋白酶 膠元酶人結(jié)腸肉瘤 人前列腺 小鼠骨髓瘤大鼠腎臟 人瘤腮腺 小鼠乳腺腫瘤人扁桃體 大鼠乳腺 小鼠睪丸倉鼠前列腺 倉鼠腎臟 大鼠睪丸小鼠肝臟 倉鼠胰腺 人脾臟倉鼠腮腺 人何杰金氏腫瘤大鼠結(jié)腸肉瘤 為使組織細胞分散下來，須注意 條件的選擇和影響因素： A. 配制酶溶液試劑時要兼顧酶反應的適宜條件與活細胞要求的生理環(huán)境， 其中包括 滲透壓， pH值 (緩沖液 )， 各種 離子濃度，酶激動劑等。 B. 酶溶液的適用濃度：胃蛋白酶 % 膠原酶 %