【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 0L 一 致CO2氣 體 氣 體 ， 15kg/瓶 6 瓶 6 瓶 一 致氧 氣 氣 體 ， 15kg/瓶 1 瓶 1 瓶 一 致 水 源 及 水 平 衡本 項(xiàng) 目 用 水 主 要 包 括 器 皿 清 洗 用 水 、 實(shí) 驗(yàn) 室 保 潔 用 水 、 實(shí) 驗(yàn) 服 清 潔 用 水 、 配液 用 水 、 生 活 用 水 、 高 壓 鍋 、 蒸 汽 發(fā) 生 器 、 水 浴 鍋 用 水 ， 由 高 新 區(qū) 市 政 供 水 管 網(wǎng)提 供 。 項(xiàng) 目 勞 動(dòng) 定 員 6 人 ， 年 工 作 256 天 。本 項(xiàng) 目 廢 水 來 源 于 器 皿 清 洗 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn) 室 保 潔 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn) 服 清 洗 廢 水 ， 生 活污 水 。 器 皿 清 洗 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn) 室 保 潔 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn) 服 清 洗 廢 水 經(jīng) 1 套 “ 沉 淀 +二 氧 化氯 消 毒 ”裝 置 處 理 后 ， 與 生 活 污 水 一 起 進(jìn) 入 電 子 電 器 產(chǎn) 業(yè) 園 化 糞 池 進(jìn) 一 步 處 理 ，12最 終 通 過 市 政 管 網(wǎng) 排 入 雙 橋 污 水 處 理 廠 進(jìn) 一 步 處 理 。 經(jīng) 監(jiān) 測(cè) 器 皿 清 洗 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn)室 保 潔 廢 水 、 實(shí) 驗(yàn) 服 清 洗 廢 水 排 放 量 為 ， 由 于 無 法 單 獨(dú) 監(jiān) 測(cè) 生 活 污 水 量 ，根 據(jù) 建 設(shè) 單 位 提 供 的 資 料 ， 生 活 污 水 量 為 。 項(xiàng) 目 廢 水 排 放 量 。本 項(xiàng) 目 水 平 衡 圖 見 圖 1。 器 皿 清 洗 凈 水 地 面 保 潔 驗(yàn) 服 清 洗 辦 公 生 活 蒸 餾 水 器 配 廢 壓 鍋 、 蒸 汽 發(fā) 生 器 、 水 浴 （ 純 凈 水 ）污 水 處 理 設(shè) 化 糞 池雙 橋 污 水 處 理 廠排 放 1 項(xiàng) 目 水 平 衡 示 意 圖 （ 單 位 m3/d）13主 要 工 藝 流 程 及 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié) （ 附 處 理 工 藝 流 程 圖 ， 標(biāo) 出 產(chǎn) 污 節(jié) 點(diǎn) ） 研 發(fā) 工 藝 流 程本 項(xiàng) 目 為 動(dòng) 物 疫 苗 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 技 術(shù) 研 發(fā) 實(shí) 驗(yàn) 室 建 設(shè) 項(xiàng) 目 ， 利 用 公 司 已 經(jīng) 建立 的 成 熟 懸 浮 培 養(yǎng) 傳 代 細(xì) 胞 MDCK、 VeroE Marc14 ST、 F81 等 ， 進(jìn) 行 豬流 行 性 腹 瀉 病 毒 、 豬 偽 狂 犬 病 毒 ， 水 貂 犬 溫 熱 病 毒 和 水 貂 細(xì) 小 病 毒 疫 苗 的 研 發(fā) 。因 每 一 種 病 毒 的 培 養(yǎng) 特 性 不 同 ， 這 些 病 毒 的 懸 浮 培 養(yǎng) 技 術(shù) 工 藝 需 要 進(jìn) 一 步 的 優(yōu)化 。 本 項(xiàng) 目 主 要 進(jìn) 行 工 藝 技 術(shù) 的 研 發(fā) ， 將 優(yōu) 化 成 功 的 技 術(shù) 成 果 轉(zhuǎn) 讓 給 疫 苗 生 產(chǎn) 企業(yè) 使 用 ， 對(duì) 企 業(yè) 做 技 術(shù) 服 務(wù) 。 本 項(xiàng) 目 具 體 工 藝 流 程 為 ： 細(xì) 胞 復(fù) 蘇 → 貼 壁 細(xì) 胞 培 養(yǎng)→ 病 毒 繁 殖 → 懸 浮 培 養(yǎng) → 澄 清 → 病 毒 滅 活 → 純 化 → 無 菌 過 濾 → 乳 化 → 分 裝 → 成品 。 具 體 研 發(fā) 工 藝 流 程 如 下 ：（ 1） 細(xì) 胞 復(fù) 蘇將 冷 凍 在 196℃ 液 氮 中 的 細(xì) 胞 快 速 融 化 ， 使 細(xì) 胞 外 凍 存 時(shí) 的 冰 晶 迅 速 融 化 ，具 體 操 作 是 迅 速 將 凍 存 管 投 入 到 已 經(jīng) 預(yù) 熱 的 水 浴 鍋 （ 水 浴 溫 度 為 40℃ ） 中 復(fù) 蘇 ，復(fù) 蘇 后 細(xì) 胞 移 至 細(xì) 胞 瓶 中 ， 加 入 培 養(yǎng) 基 溶 液 及 小 牛 血 清 ， 于 37℃ 的 5%的 CO2細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng) 3~4d。 此 過 程 會(huì) 產(chǎn) 生 廢 棄 的 細(xì) 胞 瓶 、 微 量 培 養(yǎng) 廢 氣 。（ 2） 貼 壁 細(xì) 胞 培 養(yǎng)從 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱 中 取 出 細(xì) 胞 瓶 ， 倒 掉 原 培 養(yǎng) 基 溶 液 ， 用 磷 酸 鹽 緩 沖 液 漂 洗 兩 遍細(xì) 胞 瓶 ， 倒 掉 磷 酸 鹽 緩 沖 液 ， 加 入 配 制 好 的 EDTA胰 酶 溶 液 ， 放 回 37℃ 培 養(yǎng) 箱消 化 。 取 出 細(xì) 胞 瓶 ， 加 入 培 養(yǎng) 基 溶 液 及 小 牛 血 清 ， 吹 打 均 勻 ， 于 37℃ 的 5%的CO2 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng) 3~4d。貼 壁 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 過 程 中 會(huì) 產(chǎn) 生 廢 培 養(yǎng) 液 、 廢 磷 酸 鹽 緩 沖 液 、 廢 棄 細(xì) 胞 瓶 、 微 量培 養(yǎng) 廢 氣 。（ 3） 病 毒 繁 殖將 來 自 疫 苗 廠 家 的 病 毒 毒 種 經(jīng) 分 子 生 物 學(xué) 鑒 定 合 格 后 按 照 一 定 比 例 接 種 至單 層 貼 壁 細(xì) 胞 中 ， 置 于 37℃ 的 5%二 氧 化 碳 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng) 3~4 天 ， 收 獲 于20℃ 冰 箱 凍 存 。 此 過 程 會(huì) 產(chǎn) 生 廢 培 養(yǎng) 液 、 廢 細(xì) 胞 瓶 、 微 量 病 原 微 生 物 氣 溶 膠 。（ 4） 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng)① 搖 瓶 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng)細(xì) 胞 間 的 超 凈 工 作 臺(tái) 經(jīng) 紫 外 線 照 射 消 毒 后 ， 準(zhǔn) 備 好 培 養(yǎng) 基 和 搖 瓶 ， 復(fù) 蘇 后 的14細(xì) 胞 經(jīng) 初 步 培 養(yǎng) 后 轉(zhuǎn) 移 后 搖 瓶 中 逐 步 擴(kuò) 增 培 養(yǎng) ， 搖 瓶 和 培 養(yǎng) 基 液 的 用 量 逐 步 擴(kuò)大 ， 細(xì) 胞 按 比 例 傳 代 。 置 于 37℃ 的 5%二 氧 化 碳 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱 中 培 養(yǎng) 。② 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 罐 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng)細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 罐 主 要 為 細(xì) 胞 代 謝 提 供 一 個(gè) 適 宜 的 生 長(zhǎng) 環(huán) 境 ， 使 細(xì) 胞 能 夠 快 速大 量 增 殖 。 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 罐 先 經(jīng) 蒸 汽 滅 菌 ， 然 后 在 細(xì) 胞 間 的 超 凈 工 作 臺(tái) 中 接 種 搖瓶 懸 浮 培 養(yǎng) 好 的 細(xì) 胞 ， 經(jīng) 擴(kuò) 增 后 的 細(xì) 胞 被 轉(zhuǎn) 入 5L 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 罐 進(jìn) 行 懸 浮 培 養(yǎng) ，隨 后 轉(zhuǎn) 入 40L 的 細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 罐 懸 浮 培 養(yǎng) ， 加 入 相 應(yīng) 需 求 量 的 培 養(yǎng) 基 液 ， 控 制培 養(yǎng) 溫 度 為 37℃ ， 以 使 細(xì) 胞 能 夠 正 常 繁 殖 ， 補(bǔ) 充 通 入 一 定 量 的 壓 縮 空 氣 、 O2和CO2， 調(diào) 節(jié) 溶 液 的 pH， 細(xì) 胞 通 過 呼 吸 作 用 也 釋 放 出 少 量 的 CO2， 因 此 該 過 程 會(huì)有 少 量 以 CO2等 氣 體 為 主 的 培 養(yǎng) 廢 氣 。③ 病 毒 懸 浮 培 養(yǎng)將 病 毒 種 子 接 種 于 懸 浮 培 養(yǎng) 的 細(xì) 胞 ， 培 養(yǎng) 24 天 后 收 獲 ， 置 于 20℃ 冰 箱 。細(xì) 胞 懸 浮 培 養(yǎng) 過 程 中 有 廢 培 養(yǎng) 液 、 培 養(yǎng) 廢 氣 產(chǎn) 生 。（ 5） 病 毒 效 價(jià) 測(cè) 定培 養(yǎng) 好 的 細(xì) 胞 進(jìn) 行 病 毒 效 價(jià) 測(cè) 定 。 此 過 程 有 廢 培 養(yǎng) 板 、 廢 培 養(yǎng) 液 、 少 量 病 原微 生 物 氣 溶 膠 產(chǎn) 生 。（ 6） 病 毒 液 澄 清在 細(xì) 胞 間 的 超 凈 工 作 臺(tái) 中 ， 向 病 毒 液 倒 入 PEG6000， 于 4℃ 冰 箱 中 靜 置 過 夜 ，然 后 用 離 心 機(jī) 離 心 澄 清 ， 取 樣 檢 測(cè) 病 毒 效 價(jià) 。 此 過 程 有 廢 液 產(chǎn) 生 。（ 7） 病 毒 液 滅 活取 合 格 病 毒 液 加 2溴 乙 胺 氫 溴 酸 鹽 進(jìn) 行 滅 活 ， 于 37℃ 靜 置 48 小 時(shí) ， 再 加 入硫 代 硫 酸 鈉 終 止 滅 活 ， 取 樣 ， 加 入 細(xì) 胞 瓶 中 培 養(yǎng) 3 天 ， 盲 傳 3 代 ， 用 顯 微 鏡 觀 察有 無 細(xì) 胞 病 變 ， 確 定 滅 活 徹 底 。此 過 程 中 有 廢 病 毒 液 產(chǎn) 生 。（ 8） 純 化滅 活 后 的 病 毒 液 先 經(jīng) PVDF 中 空 纖 維 柱 超 濾 膜 濃 縮 ， 然 后 取 樣 檢 測(cè) 病 毒 效價(jià) 。 病 毒 液 流 經(jīng) 中 空 纖 維 柱 時(shí) ， 大 部 分 有 效 組 分 被 截 留 在 中 空 纖 維 柱 中 ， 少 部 分隨 液 體 流 出 。 即 得 到 純 化 后 的 病 毒 液 。 用 2%氫 氧 化 鈉 溶 液 沖 洗 中 空 纖 維 柱 ， 此過 程 有 廢 液 產(chǎn) 生 。15中 空 纖 維 柱 濃 縮 液 再 通 過 層 析 柱 分 子 篩 純 化 ， 進(jìn) 而 獲 得 高 純 度 病 毒 抗 原 。分 子 篩 層 析 又 稱 為 凝 膠 過 濾 層 析 或 體 積 排 阻 層 析 。 分 子 篩 層 析 是 利 用 有 一 定孔 徑 范 圍 的 多 孔 凝 膠 作 為 固 定 相 。 對(duì) 混 合 物 中 各 組 分 按 分 子 大 小 進(jìn) 行 分 離 的 層 析技 術(shù) 。 經(jīng) 過 裝 柱 ， 上 樣 ， PBS 洗 脫 獲 得 高 純 度 的 病 毒 液 ， 此 過 程 有 廢 液 產(chǎn) 生 。（ 9） 無 菌 過 濾高 純 病 毒 液 經(jīng) 囊 式 過 濾 器 過 濾 除 菌 ， 此 過 程 有 廢 囊 式 過 濾 器 產(chǎn) 生 。（ 10） 乳 化病 毒 抗 原 與 疫 苗 佐 劑 206 按 照 1:1 體 積 比 混 勻 ， 制 備 疫 苗 。（ 11） 疫 苗 分 裝在 細(xì) 胞 間 的 層 流 罩 內(nèi) 用 灌 裝 加 塞 扎 蓋 機(jī) 分 裝 。（ 12） 成 品 檢 驗(yàn)制 得 的 成 品 不 流 向 市 場(chǎng) ， 委 托 第 三 方 進(jìn) 行 安 全 檢 驗(yàn) 和 效 能 評(píng) 價(jià) 。生 產(chǎn) 工 藝 流 程 及 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié) 示 意 圖 見 圖 2。 滅 活 方 式 、 工 藝所 有 涉 及 病 原 微 生 物 的 固 廢 均 經(jīng) 高 溫 高 壓 滅 菌 處 理 后 委 托 有 資 質(zhì) 單 位 處 理 ，重 復(fù) 使 用 的 接 觸 病 毒 器 皿 經(jīng) 高 溫 高 壓 滅 菌 處 理 后 清 洗 。 項(xiàng) 目 產(chǎn) 生 的 含 病 原 微 生 物固 廢 均 裝 入 專 用 滅 菌 袋 ， 統(tǒng) 一 由 滅 菌 鍋 經(jīng) 121℃ 、 壓 力 不 小 于 103kPa， 40min 濕熱 滅 菌 后 暫 存 于 危 險(xiǎn) 廢 物 暫 存 間 。 為 保 證 滅 菌 鍋 的 消 毒 效 率 ， 建 設(shè) 單 位 應(yīng) 嚴(yán) 格 按照 驗(yàn) 證 規(guī) 程 ， 檢 查 設(shè) 備 是 否 處 于 正 常 狀 態(tài) ， 定 期 對(duì) 滅 菌 鍋 的 處 理 效 果 做 例 行 檢 測(cè) ，檢 測(cè) 頻 率 為 每 年 不 少 于 1 次 。16貼 壁 細(xì) 胞 培 養(yǎng)培 養(yǎng) 基 溶 液 、 小 牛 血 清佐 劑 206細(xì) 胞 復(fù) 蘇澄 清純 化乳 化成 品無 菌 過 濾分 裝病 毒 滅 活懸 浮 培 養(yǎng)來 自 疫 苗 廠 家 的 病 毒生 物 分 子 學(xué) 鑒 定 病 毒 繁 殖 G、SG、 S G、SG、SSSS S W廢 水G廢 氣S固 廢 （ 包 括 廢 液 ）G、S細(xì) 胞圖 2 本 項(xiàng) 目 生 產(chǎn) 工 藝 流 程 及 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié) 示 意 圖 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié)項(xiàng) 目 的 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié) 見 表 9。表 9 本 項(xiàng) 目 主 要 污 染 工 序 一 覽 表類 別 產(chǎn) 污 環(huán) 節(jié) 污 染 物 污 染 因 子廢 氣 研 發(fā) 過 程 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 廢 氣 及 病 原 微 生 物氣 溶 膠 CO O 微 生 物 氣 溶 膠研 發(fā) 過 程 乙 醇 廢 氣 乙 醇消 毒 工 序 消 毒 異 味 異 味17廢 水 器 皿 清 洗 器 皿 清 洗 廢 水 pH、 COD、 BOD 氨 氮 、 SS實(shí) 驗(yàn) 室 保 潔 實(shí) 驗(yàn) 室 保 潔 廢 水 pH、 COD、 BOD 氨 氮 、 SS實(shí) 驗(yàn) 服 清 洗 實(shí) 驗(yàn) 服 清 洗 廢 水 pH、 COD、 氨 氮 、 SS職 工 辦 公 生 活 污 水 pH、 COD、 BOD NH3N、 SS噪 聲 研 發(fā) 過 程 空 調(diào) 外 掛 機(jī) 、 空 氣 壓 縮 機(jī) 、離 心 機(jī) 、 風(fēng) 機(jī) 、 西 淋 瓶 灌 裝加 塞 扎 蓋 機(jī) 運(yùn) 行 時(shí) 噪 聲 設(shè) 備 運(yùn) 行 機(jī) 械 噪 聲固 體廢 物 研 發(fā) 過 程 實(shí) 驗(yàn) 廢 液 危 險(xiǎn) 廢 物含 有 危 險(xiǎn) 化 學(xué) 品 的 廢 包 裝 物廢 試 劑廢 棄 耗 材廢 活 性 炭職 工 辦 公 生 活 生 活 垃 圾 一 般 固 廢 項(xiàng) 目 變 動(dòng) 情 況本 項(xiàng) 目 建 設(shè) 過 程 中 未 發(fā) 生 重 大 變 動(dòng) ， 建 成 后 規(guī) 模 不 變 、 設(shè) 備 不 變 、 生 產(chǎn) 工 藝不 變 、 主 要 變 動(dòng) 情 況 為 環(huán) 保 設(shè) 施 的 變 動(dòng) 。項(xiàng) 目 環(huán) 保 設(shè) 施 變 動(dòng) 情 況 見 表 10。表 10 項(xiàng) 目 環(huán) 保 設(shè) 施 內(nèi) 容 變 動(dòng) 情 況 一 覽 表類 別 環(huán) 評(píng) 及 批 復(fù) 建 設(shè) 內(nèi) 容 實(shí) 際 建 設(shè) 內(nèi) 容 相 符 性固 廢 治 理 1 座 2危 廢 暫 存 間 2 個(gè) 不 銹 鋼 材 質(zhì) 危 廢 暫 存 間 總 面 積不 變變 動(dòng) 情 況 分 析 ：根 據(jù) 環(huán) 評(píng) 及 批 復(fù) ， 實(shí) 驗(yàn) 室 設(shè) 置 1 座 廢 暫 存 間 ， 實(shí) 際 建 設(shè) 2 個(gè) 銹 鋼 材 質(zhì) 的 危 廢 暫 存 間 ， 總 面 積 與 環(huán) 評(píng) 及 批 復(fù) 一 致 。綜 上 ， 本 項(xiàng) 目 危 廢 暫 存 間 由 1 座 更 至 2 座 ， 總 面 積 保 持 不 變 ，因 此 本 項(xiàng) 目 的 變 動(dòng) 情 況 不 屬 于 重 大 變 動(dòng) 。18表 三主 要 污 染 源 、 污 染 物 處 理 和 排 放 （ 附 處 理 流 程 示 意 圖 ， 標(biāo) 出 廢 水 、 廢 氣 、 廠 界噪 聲 監(jiān) 測(cè) 點(diǎn) 位 ） 廢 水 污 染 物 治 理 及 處 置 設(shè) 施從 研 發(fā) 工 藝 流 程 可 知 ， 本 項(xiàng)