分子實(shí)驗(yàn)室、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室常用配方(編輯修改稿)
2025-05-13 22:21 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 dH20 定容到100 mL （調(diào)節(jié)pH：）l 4X Elution Buffer：（室溫保存）pH： g（200mM）NaC （）咪唑 g（1M）dH20 定容到100 mL（調(diào)節(jié)pH：）l EDTA:（100mM） EDTA gdH20 定容到100 mLl NiSO4:NiSO4 .6H2O （100mM） dH20 定容到100 mLl 溶菌酶：（使用時(shí)1ml溶液加入20ul）粉末 50mg ddH20 1mL(四)利用Histag從細(xì)胞中富集蛋白配方l 磷酸鈉緩沖液 M MNaH2PO4溶液，得到兩種緩沖液，.pH M Na2HPO4體積/mL MNaH2PO4體積/mLl 細(xì)胞裂解液(最好新鮮配制，當(dāng)天使用)Cell lysis buffer終濃度配10ml配15ml配20ml配40ml配30ml鹽酸胍(g)6MTris(g)10 mMpH (ml)100 mM5102015（!）（注意二價(jià)陽(yáng)離子螯合劑，還原劑，會(huì)導(dǎo)致鎳從樹(shù)脂上的洗脫）本實(shí)驗(yàn)的所有試劑中EDTA濃度不得超過(guò)1 mM,DTT濃度不超過(guò)5 mM，巰基乙醇濃度不超過(guò)20 mM。l pH （最好新鮮配制，當(dāng)天使用）pH buffer終濃度配100ml配50ml配20ml配40ml配30mlUrea尿素(g)8MTris(g)10 mM(ml)100 mM5025102015Triton X100(ul)% (vol/vol)10050204030(ul)5 mM35714l pH wash buffer (現(xiàn)配現(xiàn)用)pH buffer終濃度100ml配50ml配30mlpH bufferUrea尿素(g)8MUrea尿素(g)Tris(g)10 mMTris(g)(ml)100 mM502515(ml)Triton X100(ul)% (vol/vol)1005030Triton X100(ul)，而且pH不得低于6，pH要精確配制，非常重要！Histidine的質(zhì)子化，會(huì)導(dǎo)致鎳樹(shù)脂上的解離，所以要精確測(cè)定pH，并且以pH試紙校對(duì)，而不是僅僅依靠pH儀器。l 洗脫溶液200mMImidazole咪唑，5% (wt/vol)SDS，150mM TrisHCl(pH )30% (vol/vol)丙三醇720mM巰基乙醇%(wt/vol)溴酚藍(lán)注意wt/vol是質(zhì)量/體積之比例，而vol/vol是體積：體積的比例。(五)雙向電泳溶液配制l 水化上樣緩沖液（I）：尿素(8M) CHAPS(4%) DTT(65mM) (現(xiàn)加)%（w/v） 50mI(40%現(xiàn)加)% 10mI(1%溴酚藍(lán))MilliQ水 定容到10mI,分裝成10小管，20度冰箱保存l 上樣緩沖液（II）：尿素(7M) 硫脲(2M) CHAPS(4%) DTT(65mM) (現(xiàn)加)%（w/v） 50mI(40%現(xiàn)加)% 10mI(1%溴酚藍(lán))MilliQ水 定容到10mI,分裝成10小管，20度冰箱保存l 上樣緩沖液（III）尿素(5M) 3g硫脲(2M) CHAPS(2%) SB 310(2%) DTT(65mM) (現(xiàn)加)%（w/v） 50mI(40%現(xiàn)加)% 10mI(1%溴酚藍(lán))MilliQ水 定容到10mI,分
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