分子實驗室、細(xì)胞實驗室常用配方-免費(fèi)閱讀
【正文】 在37℃溫浴至少12h，然后在15 psi 條件下高壓滅菌20min，以使殘余的DEPC失活。分子量終濃度稱取NaCI280mMKCI10mMNa2HPO4葡萄糖12mMHEPES50mMdd H20定容到80mll CaCI22Na5mIMgCI2培養(yǎng)基冷卻到室溫后，再在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂l 1M IPTG（異丙基硫代βD半乳糖苷（））溶液IPTG粉末 ddH20 定容到10ml，分裝成1ml小份貯存于20℃。2H2O ddH20定容到 1Ll 封閉液脫脂奶粉 5g疊氮鈉 (現(xiàn)配現(xiàn)用時可不加)PBS 定容到100mLl 染色液(室溫)1L500ml200ml100ml甲醇500mL25010050乙酸100 mL502010R250考馬斯亮藍(lán) g g gH20400 mL2008040l 脫色液：(室溫)甲醇 165mL 乙酸 50 mL H20 785 mL l :（,4度保存）100ml200mlTris10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200ml l Buffer: （,4度保存）100ml200mlTris6．06g10%SDS4mL8mlddH20定容至100mL200mll 轉(zhuǎn)移緩沖液（10trans buffer）：（常溫保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末ddH20定容至1L定容至2L使用時甲醇 200mL轉(zhuǎn)移緩沖液（10） 100 mLddH20 700 mLl 電泳緩沖液（10）(running buffer)：（常溫保存）1L2L甘氨酸144g288gTris粉末SDS10g20gddH20定容至1L定容至2Ll 10Х)TBS: （常溫保存）NaCl Tris粉末 ddH20 定容至1Ll TBST(1X) TBS(1X) 500ml Tween 20 500μll Stripping buffer(可反復(fù)利用)溫老師組配方10%SDS 10mlΒ巰基乙醇 350mlTrisHCI（） （）加入ddH2O 至50mLl Stripping buffer(可反復(fù)利用)郭老師給配方甘氨酸 15gSDS 1gTween20 1mldd ddH2O 1L作這個buffer洗20min，然后用PBST洗3次，再重新封閉孵抗體。l pH （最好新鮮配制，當(dāng)天使用）pH buffer終濃度配100ml配50ml配20ml配40ml配30mlUrea尿素(g)8MTris(g)10 mM(ml)100 mM5025102015Triton X100(ul)% (vol/vol)10050204030(ul)5 mM35714l pH wash buffer (現(xiàn)配現(xiàn)用)pH buffer終濃度100ml配50ml配30mlpH bufferUrea尿素(g)8MUrea尿素(g)Tris(g)10 mMTris(g)(ml)100 mM502515(ml)Triton X100(ul)% (vol/vol)1005030Triton X100(ul)，而且pH不得低于6，pH要精確配制，非常重要！Histid
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