電鏡超薄切ppt課件(2)(編輯修改稿)
2025-05-29 07:44 本頁面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 %的鋨酸緩沖液 10ml 應(yīng)為 戊二醛固定液的配制 25%戊二醛 （ ml） 1 重蒸水 （ ml） 4 （ ml） 5 5 5 戊二醛最終濃度 1 4 ?調(diào)節(jié)固定液 PH值到 ?（ 3） 脫水 ? 1） 清洗 :固定后均用和固定液相同的緩沖液沖洗 3次 ， 每次 15分鐘 ? 2） 脫水：常用的脫水劑為乙醇和丙酮 。乙醇引起組織中脂類物質(zhì)抽提較丙酮少 ， 且不會(huì)使組織變硬 、 變脆 ， 故為常用脫水劑 ，然乙醇不容易和用于包埋劑的環(huán)氧樹脂相混溶 ， 因此在進(jìn)入包埋劑之前常用中間劑環(huán)氧丙烷置換 。 脫水程序如下表 濃度 50% 70% 90% 100% 時(shí)間 10′ 15′ 10′15′ 10′15′ 3次 （ 每次 10′15′） 溫度 4oC 4oC 轉(zhuǎn)室溫 室溫 ?經(jīng)驗(yàn)： ?① 脫水劑臨時(shí)配制 。 ?② 濃度梯度上升 。 ?③ 脫水時(shí)間和濃度 。 ?④ 脫水時(shí)的連續(xù)性 。 ?⑤ 脫水劑的選擇 。 ?（ 4）浸透：其目的是通過脫水劑稀釋包埋劑，最終讓包埋劑取代脫水劑，使其滲透到組織中去。 脫水和包埋劑的比例 2:1 1:2 純包埋劑 時(shí)間 12h 23h 2h 溫度 室溫 室溫 37oC溫箱 ?經(jīng)驗(yàn)： ?① 浸透時(shí)間 。 ?② 浸透溫度 。 ?（ 5） 包埋： ?目的 :包埋的目的是讓包埋劑完全浸透到組織內(nèi)部 ， 經(jīng)加溫逐漸聚合成堅(jiān)硬的固體 ，成為細(xì)胞結(jié)構(gòu)的支架 ， 能夠承受切片的各種力的作用 ， 有利于切薄片 。 ?包埋劑的性質(zhì) :① 粘度適中 ， 有良好的切割性能 。 ② 能耐受電子束的轟擊 ， 高溫不易升華 、 不變形 。 ③ 透明度好 。 ④ 對(duì)人無害 。 包埋劑的種類 ? ①環(huán)氧樹脂類：目前國內(nèi)使用較多的環(huán)氧樹脂有進(jìn)口的 Epon 812和國產(chǎn)的 618。 ? 原理 :環(huán)氧樹脂具有環(huán)氧基和羥基兩個(gè)主要化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)，環(huán)氧基是線型聚合物的末端，易與其它含活性氫原子的化合物如胺類反應(yīng)，形成首尾相接的長(zhǎng)鏈狀聚合物。而單體中的羥基能與酸酐結(jié)合，形成分子間的橫橋連接。因此，將環(huán)氧樹脂、胺類和酸酐三者按比例混合，在一定溫度條件下，可形成具有三維空間結(jié)構(gòu)的交鏈狀聚合物。 ? 這種聚合物收縮率小、均勻，組織損傷小，耐電子束的轟擊。包埋后可保存細(xì)胞內(nèi)的微細(xì)結(jié)構(gòu)。其缺點(diǎn)是粘度較大，操作不便、切片較為困難，而且反差較弱。 ②低粘度包埋劑 (Spurr) ? 為適應(yīng)臨床診斷電鏡的需要，目前低粘度包埋劑的應(yīng)用已日趨廣泛。這是一種低粘度的樹脂，能較好地滲入組織內(nèi)部，對(duì)組織結(jié)構(gòu)保存好，耐電子束轟擊，可廣泛應(yīng)用于各種生物材料，尤其適宜于
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