【文章內容簡介】 層析（萃取的原理） ? A、 B兩個溶液系統(tǒng)、 ? I（ A:B=2:1） 1g II（ A:B=1:3） 1g ? 第一次萃取后 ? A中 I有 2/3g, II有 1/4g I:II=8:3 （ ） ? B中 I有 1/3g, II有 3/4g I:II=4:9 （ ） ? 第二次萃取后 ? A中 I有 4/9g, II有 1/16g I:II=64:9 （ 倍） ? B中 I有 1/9g, II有 9/16g I:II=16:81（ 倍） ? HPLC:根據(jù)出峰的位置及峰高或峰面積，可以定性及定量。層析法與光學、電學或電化學儀器連用，可使操作及數(shù)據(jù)處理自動化，大大縮短分析時間。由于層析法具有分辨率高、靈敏度高、速度快等特點，因此適用于雜質多、含量少的復雜樣品分析，尤其適用于生物樣品的分離分析。近年來，已成為生物化學及分子生物學常用的分析方法。在醫(yī)藥衛(wèi)生、環(huán)境化學、高分子材料、石油化工等方面也得到了廣泛的應用。 二、電泳法 (electrophoresis) ? 概念：帶點質點在電場中與本身電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。 ? 氨基酸具有兩性解離， PH值決定帶電情況。 ? 凝膠電泳 ? 等點聚焦電泳 ? 雙向凝膠電泳 三、氨基酸的顯色反應 各種氨基酸 %茚三酮乙醇溶液 藍紫色 多種氨基酸 1%吲哚醌酒精冰醋酸溶液 不同顏色 各種氨基酸 1%溴酚藍酒精溶液 藍色 甘氨酸 %鄰苯二醛酒精溶液 墨綠色 酪氨酸 α亞硝基 β萘酚酒精硝 酸溶液 紅色 酪氨酸 對氨基苯磺酸 碳酸溶液 淺紅色 組氨酸 對氨基苯磺酸 碳酸溶液 桔紅色 絲氨酸 碘酸鈉甲醇溶液及醋酸銨溶液 黃色 精氨酸 尿素萘酚酒精溶液、氫氧化鈉溴溶液 紅色 半胱氨酸 亞硝酸鐵氰化鈉甲醇溶液 紅色 脯氨酸 吲哚醌 醋酸鋅異丙醇溶液 藍色 色氨酸 對甲基苯甲醛丙酮溶液 藍紫色 第四節(jié) 蛋白質的分子結構 概念 ? 蛋白質是由一條或多條多肽 (polypeptide)鏈以特殊方式結合而成的生物大分子。 ? 蛋白質與多肽并無嚴格的界線，通常是將分子量在 6000道爾頓以上的多肽稱為蛋白質。 ? 蛋白質分子量變化范圍很大 , 從大約 6000到1000000道爾頓甚至更大 一、蛋白質分類 ? 生物體內的作用不同 ? 結構蛋白 ? 功能蛋白：活性蛋白、信息蛋白 ? 分子形狀分 ? 球狀蛋白 ? 纖維狀蛋白 一、蛋白質分類 ? 分子組成成分 (1)清蛋白、球蛋白：水，甘氨酸 (2)谷蛋白、醇溶蛋白：不溶于水 (3)精蛋白、組蛋白：堿性氨基酸，細胞核 (4)硬蛋白：纖維狀蛋白，不溶于水、稀酸稀堿和有機溶劑，含大量胱氨酸 一、蛋白質分類 ? 分子組成成分 (1)核蛋白：核酸 (2)色蛋白：輔基是金屬色素 (3)糖蛋白：輔基是糖或者糖的衍生物，所有組織，多種功能 (4)脂蛋白：脂肪類脂結合，與脂質代謝、運輸 (5)磷蛋白：輔基磷酸。酯鍵，絲氨酸，蘇氨酸羥基結合。酪蛋白 二、蛋白質結構中的化學鍵 ? peptide bond（化學鍵） ? disuffide bond（化學鍵） ? 不同肽鏈，同一肽鏈不同部位 ? 半胱氨酸 ? 穩(wěn)定共價鍵、穩(wěn)定肽鏈空間結構 ? 破壞，蛋白質活性喪失。 ? 角蛋白 二、蛋白質結構中的化學鍵 ? ester bond（化學鍵） ? 絲氨酸、蘇氨酸羥基與氨基酸的羧基 ? 磷蛋白：絲氨酸、蘇氨酸羥基 ? 維系蛋白質結構，行使功能 ? ionic bond（庫倫作用） ? 相反電荷的基團 ? 堿性氨基酸，生理條件下 ? 高濃度鹽、過高過低 PH ? 羧基 PK低，氨基 PK高， 12個 PH單位 二、蛋白質結構中的化學鍵 ? dative bond（共價鍵） ? 金屬離子： Fe,Cu,Mn,Zn ? 高級結構：鋅指結構 ? 螯合劑，蛋白質解離成亞基，變形失活 ? hydrogen bond ? 氫原子與兩個電負性強的原子（ F,O,N） ? 弱鍵，供體原子、氫、受體原子處在一條直線 ? 氫供體： =NH,OH,NH2,NH3+,CONH2 ? 氫受體： COO,C=O 二、蛋白質結構中的化學鍵 ? ? 原子、基團、分子之間弱相互作用 ? 非專一性的吸引力 ? 取向力、誘導力，色散力 ? 與距離 6次方成反比，吸引不相碰 ? 蛋白質內部非極性結構，維系蛋白質高級結構 ? hydrophobic bond ? 非極性側鏈（疏水基團）在極性溶劑中為了避開水相互彼此靠近所產(chǎn)生的作用力 ? 本質范德華作用力 ? 蛋白質的內部結構中 次級鍵介導蛋白質高級結構形成 （一）、蛋白質的基本結構形式 連接方式： 肽鍵 ?肽鍵 (peptide bond)：一個氨基酸的羧基與另一氨基酸的氨基縮水而成的酰胺鍵稱為肽鍵。（ …CONH… ） ?肽平面 (peptide unit)：由肽鍵中的四個原子和與之相鄰的兩個碳原子共同構成的剛性平面。（ CαCONHCα） 特點： ? 肽鍵的特點是氮原子上的孤對電子與羰基具有明顯的共軛作用。 ? 肽鍵中的 CN鍵具有部分雙鍵性質，不能自由旋轉。 ? 組成肽鍵的原子處于同一平面。 ? 在大多數(shù)情況下，以反式結構存在。 肽分類、命名 ? 在多肽鏈中，氨基酸殘基按一定的順序排列，這種排列順序稱為氨基酸順序 ? 通常在多肽鏈的一端含有一個游離的 α氨基，稱為氨基端或 N端；在另一端含有一個游離的 α羧基，稱為羧基端或 C端。 ? 氨基酸的順序是從 N端的氨基酸殘基開始，以 α端氨基酸殘基為終點的排列順序。如上述五肽可表示為： ? SerValTyrAspGln C C N C C N C C N C C N CC H 2 C H C H 2 C H 2 C H 2C O OO H C O 2 H C H 2C O N H 2O HC H 3H 3 N+O O O OH H H H HH H H HS er V al T y r A s p G l nC H 3N 端 C 端肽鍵生物活性肽： ?谷胱甘肽 ?神經(jīng)肽：腦啡肽 (5)、內啡肽 (3116)、強啡肽 (17,9)、 P物質、 Y肽 ?肽類激素：催產(chǎn)素、胰高血糖素、促腎上腺皮質激素、加壓素等 ?其他：生長因子；短桿菌肽；青霉素等 二、蛋白質的一級結構 (primary structure) ?一級結構是指蛋白質的多肽鏈中氨基酸的排列順序；主要靠肽鍵維系。 ?二～四級結構稱為蛋白質的空間結構，或空間構象；主要靠次級鍵維系，尤其是疏水鍵。 ?一級結構體現(xiàn)生物信息： 20n …………. 多樣 ?一級結構是空間結構及生物活性的基礎 ….. 特異 ? （一）蛋白質的氨基酸組成 ? 氨基酸組成的種類、含量 ? 蛋白質純化 ? 蛋白質徹底水解成氨基酸 ? 利用層析技術將氨基酸進行分離