感受態(tài)細胞的制備與連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化克隆菌株(編輯修改稿)
2025-05-27 23:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 一個非常有用的嚴緊型宿主菌。 BL21是應(yīng)用最廣的宿主菌來源，具有 lon和 ompT蛋白酶缺陷的優(yōu)點 . （ DE3）宿主菌是 lDE3溶原菌，染色體上帶有一拷貝由 lacUV5啟動子控制的 T7 RNA聚合酶基因。這類菌株配合 pET載體一起表達。 pLysS是帶有可以與 pET共存的、編碼 T7溶菌酶（ T7 RNA聚合酶的天然抑制物）的質(zhì)粒。 pLysS 菌株在被誘導(dǎo)前 T7 RNA聚合酶的基礎(chǔ)表達被抑制，這樣可以使表達會影響宿主細胞生長和活力的重組體在宿主中更穩(wěn)定。帶有 pLacI質(zhì)粒的宿主菌產(chǎn)生額外的抑制 pETBlue和 pTriEx載體基礎(chǔ)表達的 lac阻遏蛋白。 Inductive Expression Introduction LacI pETBlue 大腸桿菌基因組 Lac啟動子 T7啟動子 IPTG誘導(dǎo) IPTG誘導(dǎo) 大腸桿菌 RNA聚合酶 T7 RNA聚合酶基因 1 T7RNA聚合酶 T7RNA聚合酶 靶基因 pETBlue系統(tǒng)調(diào)控元件 LacI Lac阻遏物 Lac阻遏物 DE3 LacO LacO pLacI TunerTMDE3LacI Inductive Expression Introduction Xgal： 5溴 4氫 3吲哚 β D半乳糖苷 Xgal（無色） 深藍色 β半乳糖苷酶 Α互補： ω片段（無活性，宿主） + α片段（無活性，載體） β半乳糖苷酶（活性） 無菌 冰浴 輕柔 制備感受態(tài)細胞 預(yù) 培 養(yǎng) : (昨天下午 ) LB培養(yǎng)基 （ 4mL，含 ） 37 ℃ 、 190rpm振蕩培養(yǎng)過夜 擴 大 培 養(yǎng) : (今天早晨 ) ＋ 40mL LB液體培養(yǎng)基（ 含 ） 37 ℃ 、 250rpm振蕩培養(yǎng) NovaBlue 收集細胞： 終
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