動(dòng)物細(xì)胞的融合與單克隆抗體(編輯修改稿)
2025-09-12 03:19 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 ①首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞 ① 細(xì)胞合成 DNA有 D和 S兩條途徑，其中 D途徑能被氨基嘌呤阻斷。 ② 人淋巴細(xì)胞中有這兩種 DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 ③ 鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有 D途徑，沒有 S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？ 小資料： 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細(xì)胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖， 但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因?yàn)榭梢岳昧馨图?xì)胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。 通常 采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法 ，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)， 再由這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)， 然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽(yáng)性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。 ② 再篩選出 能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞 陽(yáng)性孔 方法 —— 抗原 抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 ⑻ 如何得到大量的單克隆抗體？ 體內(nèi)培養(yǎng) 體外培養(yǎng) 單克隆抗體 —— 化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng) 單克隆抗體 篩 選 雜交細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 體外或體內(nèi) 細(xì)胞培養(yǎng) 篩選 骨髓瘤 細(xì)胞 誘導(dǎo)細(xì)胞融合 特異性雜交瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞系 提取 經(jīng)過免疫的 B淋巴細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù) 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 單克隆抗體的制備過程： 特點(diǎn)：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖 特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備 注射抗原 免疫 單抗隆抗體的應(yīng)用 ① 作為診斷試劑 ② 定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病 用于體外診斷人類和動(dòng)植物疾病及病原鑒定， 純度高、特異性強(qiáng) ，具有 準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速 的優(yōu)點(diǎn)。 ③ 用于治療疾病和運(yùn)載藥物 利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像 制成 生物導(dǎo)彈 ，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小。 單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)： 特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可以大量制備。 ⑵用于治療疾病和運(yùn)載藥物 ①特異性強(qiáng)、靈敏度高 生物導(dǎo)彈 —— 單克隆抗體＋抗癌藥物 ②療效高、毒副作用小 結(jié)合同位素的單抗 生物導(dǎo)彈 結(jié)合同位素的單抗 生物導(dǎo)彈 單抗 放射性同位素 項(xiàng)目 動(dòng)物細(xì)胞融合 植物體細(xì)胞雜交 原理 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性 融合前提 分散成單個(gè)細(xì)胞 去除細(xì)胞壁 誘導(dǎo)方法 聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、 滅活病毒 聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、 結(jié)果 獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物 獲得雜種植株 用途 制備單克隆抗體 培育作物新品種 意義 使遠(yuǎn)緣雜交成為可能 克服遠(yuǎn)緣雜交障礙 對(duì)比 比較項(xiàng)目 植物體細(xì)胞雜交 單克隆抗體的制備 原理 融合前處理 促融方法 用途 過 程 第一步 第二步 第三步 第四步 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞 增殖 酶解法去壁 小鼠要免疫處理 物理法 化學(xué)法 物理、化學(xué)、生物法 原生質(zhì)體的制備 融合親本細(xì)胞的準(zhǔn)備 原生質(zhì)體的融合 與篩選 動(dòng)物細(xì)胞融合與 兩次篩選 雜種細(xì)胞的形成與培養(yǎng) 對(duì)產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng) 雜種植株的鑒定 單克隆抗體的分離提純 單抗有助于疾病的診斷、治療 獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株 動(dòng)物細(xì)胞工程小結(jié) ? 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)： 原理、營(yíng)養(yǎng)、條件、過程、細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)、結(jié)果、應(yīng)用 ? 動(dòng)物細(xì)胞融合： 原理、誘導(dǎo)方法、過程、應(yīng)用 ? 單克隆抗體的制備： 原理、過程、特點(diǎn)、應(yīng)用 ? 核移植與克隆動(dòng)物： 供體、受體、核移植方法、克隆動(dòng)物的方法、克隆動(dòng)物的遺傳特性、應(yīng)用 ? 動(dòng)、植物細(xì)胞工程的比較： 植物組培技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù) ⑶ 圖中 B為 ________過程， 常用 _________作為誘導(dǎo)劑 ，該細(xì)胞繼承 ___________的遺傳特性，既能__________,又能 ___________ 。 B 體外培養(yǎng) 骨髓瘤細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 足夠數(shù)量的細(xì)胞群 注射到 小鼠腹腔 A C ，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案 ⑴ 該實(shí)驗(yàn)方案的 目是 ； ⑵ A是從小鼠的脾臟中取得 _______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生 ； 制備單克隆抗體 B細(xì)胞 專一抗體 細(xì)胞融合 滅活病毒 雙親細(xì)胞 分泌專一
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