動物細胞的融合與單克隆抗體(編輯修改稿)
2025-09-12 03:19 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 ①首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞 ① 細胞合成 DNA有 D和 S兩條途徑，其中 D途徑能被氨基嘌呤阻斷。 ② 人淋巴細胞中有這兩種 DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。 ③ 鼠骨髓瘤細胞中只有 D途徑，沒有 S途徑，可是能不斷分裂增殖。 你想到篩選雜交瘤細胞的方案了么？ 小資料： 在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細胞！ 加入氨基嘌呤后，使 D 合成途徑阻斷，僅有 D 合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖， 但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞因為可以利用淋巴細胞中的 S 途徑合成DNA而增殖。 通常 采用有限稀釋克隆細胞的方法 ，將雜交瘤細胞多倍稀釋，接種在多孔細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細胞不超過一個， 再由這些單細胞克隆生長， 然后檢測各孔上清液中細胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預定特異抗體的雜交細胞株進行擴大培養(yǎng)。 ② 再篩選出 能分泌所需抗體的雜交瘤細胞 陽性孔 方法 —— 抗原 抗體雜交法 在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。 ⑻ 如何得到大量的單克隆抗體？ 體內(nèi)培養(yǎng) 體外培養(yǎng) 單克隆抗體 —— 化學性質(zhì)單一、特異性強 單克隆抗體 篩 選 雜交細胞 雜交瘤細胞 體外或體內(nèi) 細胞培養(yǎng) 篩選 骨髓瘤 細胞 誘導細胞融合 特異性雜交瘤細胞 雜交瘤細胞系 提取 經(jīng)過免疫的 B淋巴細胞 動物細胞融合技術 動物細胞培養(yǎng)技術 單克隆抗體的制備過程： 特點：既能產(chǎn)生專一抗體又能大量繁殖 特點：特異性強靈敏度高可大量制備 注射抗原 免疫 單抗隆抗體的應用 ① 作為診斷試劑 ② 定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病 用于體外診斷人類和動植物疾病及病原鑒定， 純度高、特異性強 ，具有 準確、高效、簡易、快速 的優(yōu)點。 ③ 用于治療疾病和運載藥物 利用同位素標記單抗，在特定組織成像 制成 生物導彈 ，將藥物定向帶到癌細胞所在的位置，在原位殺死癌細胞，療效高、副作用小。 單克隆抗體的優(yōu)點： 特異性強，靈敏度高，并可以大量制備。 ⑵用于治療疾病和運載藥物 ①特異性強、靈敏度高 生物導彈 —— 單克隆抗體＋抗癌藥物 ②療效高、毒副作用小 結合同位素的單抗 生物導彈 結合同位素的單抗 生物導彈 單抗 放射性同位素 項目 動物細胞融合 植物體細胞雜交 原理 細胞膜的流動性 細胞膜的流動性和植物細胞的全能性 融合前提 分散成單個細胞 去除細胞壁 誘導方法 聚乙二醇、離心、振動、電激、 滅活病毒 聚乙二醇、離心、振動、電激、 結果 獲得雜種細胞或細胞產(chǎn)物 獲得雜種植株 用途 制備單克隆抗體 培育作物新品種 意義 使遠緣雜交成為可能 克服遠緣雜交障礙 對比 比較項目 植物體細胞雜交 單克隆抗體的制備 原理 融合前處理 促融方法 用途 過 程 第一步 第二步 第三步 第四步 細胞膜的流動性、細胞的全能性 細胞膜的流動性、細胞 增殖 酶解法去壁 小鼠要免疫處理 物理法 化學法 物理、化學、生物法 原生質(zhì)體的制備 融合親本細胞的準備 原生質(zhì)體的融合 與篩選 動物細胞融合與 兩次篩選 雜種細胞的形成與培養(yǎng) 對產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞培養(yǎng) 雜種植株的鑒定 單克隆抗體的分離提純 單抗有助于疾病的診斷、治療 獲得具優(yōu)良性狀的雜種植株 動物細胞工程小結 ? 動物細胞培養(yǎng)： 原理、營養(yǎng)、條件、過程、細胞生長特點、結果、應用 ? 動物細胞融合： 原理、誘導方法、過程、應用 ? 單克隆抗體的制備： 原理、過程、特點、應用 ? 核移植與克隆動物： 供體、受體、核移植方法、克隆動物的方法、克隆動物的遺傳特性、應用 ? 動、植物細胞工程的比較： 植物組培技術與動物細胞培養(yǎng)技術、植物體細胞雜交技術與動物細胞融合技術 ⑶ 圖中 B為 ________過程， 常用 _________作為誘導劑 ，該細胞繼承 ___________的遺傳特性，既能__________,又能 ___________ 。 B 體外培養(yǎng) 骨髓瘤細胞 雜交瘤細胞 足夠數(shù)量的細胞群 注射到 小鼠腹腔 A C ，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案 ⑴ 該實驗方案的 目是 ； ⑵ A是從小鼠的脾臟中取得 _______,該細胞能夠產(chǎn)生 ； 制備單克隆抗體 B細胞 專一抗體 細胞融合 滅活病毒 雙親細胞 分泌專一
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