疫共沉淀原理及注意事項(編輯修改稿)
2025-05-27 02:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 4℃ 過夜 ) ↓ 離心，收集沉淀，預(yù)冷 RIPA Buffer洗 3遍 ↓ 上樣緩沖液懸浮沉淀，加熱游離抗原、抗體、珠子 ↓ ↓ 四 實驗結(jié)果分析 ?SDSPAGE ?Western blotting分析 ?質(zhì)譜分析檢測目的蛋白 SDSPAGE結(jié)果分析 標難曲線只對同一塊凝膠上的樣品的分子量測定才具有可靠性。 = 蛋 白 樣 品 距 加 樣 端 遷 移 距 離 （ c m ）溴 酚 藍 區(qū) 帶 中 心 距 加 樣 端 距 離 （ c m ） 相 對 遷 移 率 以每個蛋白標準的分子量對數(shù)對它的相對遷移率作圖得標準曲線，量出未知蛋白的遷移率即可測出其分于量。 一抗 一抗 一抗 (兔抗 Actin) 曝光后的蛋白條帶 二抗 (辣根酶標記的羊抗兔 IgG) ECL X光片曝光顯影 ECL 試劑 含有轉(zhuǎn)印蛋白的 PVDF膜 + + 轉(zhuǎn)印膜上蛋白檢測示意圖 WB結(jié)果分析 COIP與質(zhì)譜分析流程 三 實驗的關(guān)鍵 ? 1. 實驗最需要注意點就是 抗體的性質(zhì) 。特別是多抗的特異性是問題。 ? 2. 為防止蛋白的分解、修飾，溶解抗原的緩沖液必須 加蛋白酶抑制劑 ， 低溫 下進行實驗。 ? 3. 考慮 抗體 /緩沖液的比例 ?？贵w過少就不能檢出抗原，過多則就不能沉降在 beads上，殘存在上清。緩沖劑太少則不能溶解抗原，過多則抗原被稀釋。 ? 4. 確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細胞中，而不是
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