trizol法提取rna實(shí)驗(yàn)步驟(編輯修改稿)
2025-05-13 12:35 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振蕩混勻后室溫放置15min。注：禁用漩渦振蕩器，以免基因組DNA斷裂。 4℃ 12,000g離心15min。 吸取上層水相，至另一離心管中。注：千萬(wàn)不要吸取中間界面；若同時(shí)提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，則棄下層酚相。 室溫放置510min。 4℃ 12,000g離心10min，棄上清，RNA沉于管底。 按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。 4℃ 8,000g離心5min，盡量棄上清。 室溫晾干或真空干燥510min。 注：RNA樣品不要過(guò)于干燥，否則很難溶解。 1可用50ul H2O，TE %SDS溶解RNA樣品，5560℃,510min。注：H2O、%SDS均須用DEPC處理并高壓。 1注：此方法提取RNA A260/；產(chǎn)率估計(jì)：組織標(biāo)本：（ug RNA/mg組織）110ug，培養(yǎng)細(xì)胞（ug RNA/106 Cell）：515ug。注：組織或細(xì)胞量過(guò)少，可酌情減少Trizol用量；組織或細(xì)胞用量過(guò)多，會(huì)引起DNA對(duì)RNA的污染；高蛋白、脂肪或多糖類(lèi)組織，肌肉組織或塊狀植物組織等，組織勻漿或液氮研磨后須4℃ 12,000g離心10min去掉不溶物，再進(jìn)行下面操作，若頂層有脂肪物，則也須去掉；熱天提RN
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