【文章內(nèi)容簡介】 入平皿后，應(yīng)及時將涼至46℃營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（可放置于46177。1℃水浴保溫）注入培養(yǎng)皿約15mL，并轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿使混合均勻。同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液滅菌培養(yǎng)皿內(nèi)作空白對照。 待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板,置36℃177。1℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h177。2h。 菌落計數(shù)方法 做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀查，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。 菌落計數(shù)的報告 平板菌落數(shù)的選擇 選取菌落數(shù)在30～300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘2以代表全皿菌落數(shù)。平板內(nèi)如有鏈狀菌落生長時（菌落之間無明顯界線），若僅有一條鏈，可視為一個菌落；如果有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈作為一個菌落計。 稀釋度的選擇 應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30～300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表1中例1)。 若有兩個稀釋度，其生長的菌落數(shù)均在30～300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，應(yīng)報告其平均數(shù)；若大于2則報告其中較小的數(shù)字（見表1中例2及例3）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以釋稀倍數(shù)報告之（見表1中例4）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例5）。 若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例6）。 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30～300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1中例7）。 菌落數(shù)的報告 菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實(shí)有數(shù)報告，大于100時，采用兩位有效數(shù)字,在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可用10的指數(shù)來表示（見表1）。表1 稀釋度選擇及菌落數(shù)報告方式例次稀釋液及菌落數(shù)兩稀釋液之比菌落總數(shù)/[cfu/g(ml)]報告方式/[cfu/g(ml)]1011021031多不可計16420—164001042多不可計29546377501043多不可計27160271001044多不可計多不可計313—313000105527115—2701026000—＜110＜107多不可計30512—30500104大腸菌群的測定執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：GB/T 1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中大腸菌群的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于各類食品中大腸菌群的測定。2 規(guī)范性引用文件GB/T 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn) 染色法、培養(yǎng)基和試劑3 術(shù)語與定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 大腸菌群 一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭式陰性無芽胞桿菌。該菌主要來源于人蓄糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評價食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100ml（g）檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)（MPN）表示。 最可能數(shù) most probable number，MPN基于松泊分布的一種間接技術(shù)方法。4 設(shè)備和材料 冰箱：0℃～4℃。 恒溫培養(yǎng)箱：36℃177。1℃。 恒溫水浴鍋：46℃177。1℃。 顯微鏡：10～100。 均質(zhì)器或滅菌乳缽。 架盤藥物天平：0 g～500 g。 滅菌吸管：1mL（）、10mL（）。 滅菌錐形瓶：500mL。 滅菌玻璃珠：直徑約5mm。 滅菌培養(yǎng)皿：直徑90mm。 滅菌試管：16mm～16mm。 滅菌刀、剪子、鑷子等。5 培養(yǎng)基和試劑 乳糖膽鹽發(fā)酵管：按GB/T 。 伊紅美藍(lán)瓊脂平板：按GB/T 。 乳糖發(fā)酵管：按GB/T 。 EC肉湯：按GB/T 。 磷酸鹽緩沖液：按GB/T 。 %滅菌生理鹽水 革蘭氏染色液：按GB/T 。6 檢驗(yàn)程序大腸菌群檢驗(yàn)程序見下頁圖。7 操作步驟 檢樣稀釋 以無菌操作將檢樣25g（mL）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)（瓶內(nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000～10000r/min的速度處理1min，做成1:10的均勻稀釋液。 用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1:100的稀釋液。 另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管。 根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種3管。乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)氣不產(chǎn)氣伊紅美藍(lán)瓊脂平板大腸菌群陰性革蘭氏染色乳糖發(fā)酵管大腸菌群陽性大腸菌群陰性檢樣稀釋36℃177。1℃24h177。2h36℃177。1℃報告告24h177。2h36℃177。1℃產(chǎn)氣不產(chǎn)氣報告革蘭氏陽性革蘭氏陰性無芽孢桿菌大腸菌群陰性報告報告24h177。2h 乳糖發(fā)酵試驗(yàn)將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24h177。2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。 分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)18h～24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。 證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1個～2個進(jìn)行革蘭氏染色，同時接種乳糖發(fā)酵管，置36℃177。1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h177。2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。 報告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN值。第五章、計量器具管理制度一、目的：加強(qiáng)公司計量儀器的統(tǒng)一管理，保證其測量的精度和準(zhǔn)確性，以確保產(chǎn)品符合規(guī)定要求。二、適用范圍：適用于公司所有的計量儀器三、執(zhí)行部門：質(zhì)管部、采購部、生產(chǎn)部。四、內(nèi)容： 各使用部門根據(jù)需要填寫申購單，經(jīng)相關(guān)領(lǐng)導(dǎo)簽字后，交采購部。 采購部在購買時，應(yīng)選擇有計量器具生產(chǎn)許可證的供應(yīng)商。 對于新購置的計量儀器由生產(chǎn)部和質(zhì)管部共同實(shí)施驗(yàn)收，待各種文件資料齊全后再入庫，技術(shù)資料由生產(chǎn)部收集后交質(zhì)管部統(tǒng)一歸檔保存，或是質(zhì)管部需要有復(fù)印件。 公司所有計量器具均實(shí)行周期檢定或校準(zhǔn)，新的計量器具應(yīng)進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)后方可投入使用。 質(zhì)管部根據(jù)公司計量器具的情況及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求，于每年年初制定計量器具的檢定校準(zhǔn)計劃，經(jīng)部門經(jīng)理審核，報總經(jīng)理簽批同意后執(zhí)行。特殊情況下也可另行提報檢定校準(zhǔn)計劃。，以了解各計量器具的檢定及校準(zhǔn)情況。 質(zhì)管部負(fù)責(zé)送儀器到上級計量部門進(jìn)行檢定，或是聯(lián)系計量部門到公司現(xiàn)場檢定，確保各部門使用的計量儀器是經(jīng)上級計量部門檢定合格的。需檢定的計量器具有：化驗(yàn)室的檢測設(shè)備（一年一次）、壓力表（一年兩次）、電子稱（一年一次）、臺稱（一年兩次）、轉(zhuǎn)速表（一年一次）。 溫度計的校準(zhǔn) 由化驗(yàn)員每半年在國家法定計量機(jī)構(gòu)檢定一支標(biāo)準(zhǔn)溫度計（水銀溫度計）；其他溫度計,每月校準(zhǔn)一次； 根據(jù)溫度計的實(shí)際使用計量范圍，選擇幾個溫度點(diǎn)進(jìn)行比較校對： 油溫表校以下幾點(diǎn)：0、80、100、111150、170℃； 烘箱溫度表校以下幾點(diǎn)： 50、60、110℃。 若與標(biāo)準(zhǔn)溫度計比較各點(diǎn)溫度誤差不超過3℃，則表示合格，正常使用（加上修正值）；若超過4℃，則應(yīng)將該溫度表送外部機(jī)構(gòu)進(jìn)行修理、檢定。 經(jīng)校準(zhǔn)的溫度計，由質(zhì)管部化驗(yàn)員填寫校準(zhǔn)記錄，保管檢定或校準(zhǔn)合格證，并進(jìn)行校準(zhǔn)或檢定狀態(tài)標(biāo)識 計時鐘的校準(zhǔn) 計時鐘由質(zhì)管部質(zhì)檢員校準(zhǔn)，每月校準(zhǔn)一次。 將計時鐘與網(wǎng)絡(luò)時間對比，若誤差在1分鐘內(nèi)，則正常使用。若誤差超過1分鐘，在2 分鐘內(nèi)，仍可使用，但須將時間進(jìn)行修正，