dna測序原理和方法(編輯修改稿)
2025-05-04 05:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ，T7引物等。6．滅菌去離子水或三蒸水。7． 蓋體分離，PE公司產(chǎn)品。8．3mol/L 醋酸鈉() NaAc3H2O溶于70ml蒸餾水中，定容至100ml，高壓滅菌后分裝。9．70%乙醇和無水乙醇。10．NaAc/乙醇混合液 3mol/L NaAc混勻，室溫可保存1年。11．POP 6測序膠 ABI產(chǎn)品。12．模板抑制試劑(TSR) ABI產(chǎn)品。13．10電泳緩沖液 ABI產(chǎn)品。14．ABI PRISM 310型全自動DNA測序儀。15．2400型或9600型PCR儀。16．臺式冷凍高速離心機(jī)。17．臺式高速離心機(jī)或袖珍離心機(jī)。【操作步驟】1．PCR測序反應(yīng) (1) ，用記號筆編號，將管插在顆粒冰中，按下表加試劑：所加試劑 測定模板管 標(biāo)準(zhǔn)對照管 BigDye Mix 1μl 1μl待測的質(zhì)粒DNA 1μl －pGEM3Zf (+) 雙鏈DNA － 1μl待測DNA的正向引物 1μl －M13(21)引物 － 1μl滅菌去離子水 2μl 2μl總反應(yīng)體積5μl，不加輕礦物油或石蠟油，蓋緊PCR管，用手指彈管混勻，稍離心。(2) 將PCR管置于9600或2400型PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。98℃變性2min后進(jìn)行PCR循環(huán)，PCR循環(huán)參數(shù)為96℃ 10s，50℃ 5s，60℃4min，25個循環(huán)，擴(kuò)增結(jié)束后設(shè)置4℃保溫。2．醋酸鈉/乙醇法純化PCR產(chǎn)物(1) 將混合物離心， EP管中。(2) 加入25μl醋酸鈉/乙醇混合液，充分振蕩，置冰上1
公司管理相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1