【文章內(nèi)容簡介】 。2h,培養(yǎng)后不產(chǎn)氣則報告為陰性；將產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于EMB上，培養(yǎng)18～24h，凡平板上有典型菌落者，則證實為糞大腸菌群陽性。報告同上。 微生物檢驗還有兩個重要指標(biāo)就是霉菌、酵母的計數(shù)及致病菌的檢驗，因為企業(yè)的出廠檢驗微生物這塊主要是菌落總數(shù)和大腸菌群，所以后兩個指標(biāo)我就給大家簡單介紹一下，讓大家了解一下。霉菌和酵母的培養(yǎng)可以使用同一種培養(yǎng)基，通過長出的菌落形態(tài)特征來判斷計數(shù)，霉菌最顯著的特征就是一般有菌絲，不規(guī)則無固定大小，最初往往是白色或淺色，當(dāng)長出孢子后就成好多顏色，像紅色、綠色、黑色等等。而酵母菌一般比較光滑，隆起，多為乳白色，少數(shù)有紅色，與細菌菌落特征相似。一般使用的培養(yǎng)基是孟加拉紅，檢樣操作和前面一樣，但是培養(yǎng)霉菌要求稀釋樣品要充分振搖30min以上，還要反復(fù)吹吸50次，一是霉菌孢子充分散開。檢樣完畢后選擇合適的稀釋度，取1mL稀釋液加到平板內(nèi)，加入培養(yǎng)基待凝固后倒置放入25℃～28℃的培養(yǎng)箱內(nèi)，3天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察5天。然后選擇菌落數(shù)在10～150之間的進行報數(shù)，稀釋度的選擇及菌落的報告方式都可參照菌落總數(shù)報出方式。我們再來說說致病菌的檢驗，主要的是三種沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌。我們以沙門氏菌為例簡單的介紹一下操作，致病菌的檢測第一步都要進行增菌，將25g樣品加入到225mL緩沖蛋白胨水（BP）中于36℃177。1℃培養(yǎng)4h,取10mL加入到100mL四硫酸鈉煌綠增菌液(TTB)內(nèi)于42℃培養(yǎng)18h～24h,同時，另取10mL于100mL亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液內(nèi)于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h。分離，取增菌液劃線接種一個亞硫酸鉍（BS）瓊脂和一個HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂上，于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h，BS 上培養(yǎng)40～48h。根據(jù)沙門氏菌在每種培養(yǎng)基上菌落形態(tài)挑取典型的可疑菌落(BS上產(chǎn)硫化氫的菌落呈褐色，灰色或黑色，有時帶有金屬光澤。有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變；HE上菌落呈蘭綠至蘭色，帶或不帶黑色中心。許多沙門氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的光澤黑色中心或幾乎全部黑色的菌落，多數(shù)產(chǎn)硫化氫)進行生化試驗接種到三糖鐵上，于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h，通過在TSI內(nèi)的反應(yīng)來判定，然后進一步進行血清學(xué)的鑒定。我們都知道微生物的檢測最主要的就是要保證無菌操作，只有這樣才能保證出具數(shù)據(jù)的真實性和可靠性。下面講的內(nèi)容就是怎樣做才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確。首先我們來區(qū)別兩個概念，消毒和滅菌這兩個詞在實際使用中常被混用，其實它們的含義是有所不同的。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無菌狀態(tài)。從概念中我們就能看出來我們在做微生物的試驗是要進行前期的滅菌工作，而不是簡單的消毒。我們就來看看通常采用地滅菌方法：　一、物理方法：有高溫、輻射、超聲波、激光、過濾等等，在實驗室中最常用的就是高溫滅菌和輻射滅菌。高溫　　利用高溫進行滅菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用，不光是高溫可以殺菌，通常低溫也可以起抑菌作用，所以我們可以把預(yù)先配好的培養(yǎng)基放到冰箱里進行保存。高溫滅菌包括干熱滅菌法和濕熱滅菌法，在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為一方面濕熱易于傳遞熱量，另一方面由于濕熱更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵結(jié)構(gòu)，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。１）干熱滅菌法:　?。豪没鹧嬷苯影盐⑸餆?。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及放培養(yǎng)基的瓶口，檢樣使用的剪子鑷子等。　?。杭窗汛郎缇奈锲肪鶆虻胤湃牒嫦渲?，升溫至160176。C，恒溫1小時即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。這一般這可以用來烘干滅好菌的平板和吸管。２）濕熱滅菌法:多數(shù)細菌和真菌的營養(yǎng)細胞在60℃左右處理5～10分鐘即可殺死，酵母菌和真菌的孢子稍耐熱些，要用80℃以上處理才能殺死，而細菌的芽孢最耐熱，一般要在120℃下處理15分鐘才能殺死。這就是為什么器皿及蒸餾水的滅菌都要在121℃高壓滅菌15分鐘以上，而一般的培養(yǎng)基滅菌也都采用121℃高壓滅菌15分鐘。濕熱滅菌法包括常壓法和加壓法。常壓法：　?。河行┦澄飼蚋邷仄茐臓I養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營養(yǎng)和風(fēng)味，又進行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在60～85℃處理15秒至30分鐘既可達到消毒目的。此法為法國微生物學(xué)家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法?！　。褐苯訉⒁镜奈锲贩湃肭逅?，煮沸數(shù)分鐘，即可殺死細菌的全部營養(yǎng)和部分芽孢。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。：適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。具體做法是：將待滅菌的培養(yǎng)基在80～100176。C蒸煮15～60分鐘，殺死其中所有微生物的營養(yǎng)細胞。然后置室溫或放入37176。C恒溫箱中過夜，誘導(dǎo)殘留的芽孢發(fā)芽。第2天再重復(fù)上述步驟，三次左右，就可達到滅菌的目的。此法不需加壓滅菌鍋，但操作麻煩，所需時間長。加壓法：常規(guī)加壓滅菌法和連續(xù)加壓滅菌法　 常規(guī) 加壓滅菌法：這是發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健、食品檢測和微生物學(xué)實驗室中最常用的一種滅菌方法。它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。　　常規(guī)加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個可密閉的盛有適量水的加壓蒸汽滅菌鍋中，把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，并把其中原有的空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密封。再繼續(xù)加熱就會使其中壓力升高。由于蒸汽壓的上升，從而溫度也隨之提高到100℃以上。在蒸汽壓達到1kg/，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達到121176。C。在這種情況下，微生物（包括芽孢）在15~20分鐘便會被殺死，而達到滅菌目的。如滅菌的對象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應(yīng)適當(dāng)延長滅菌時間。在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的一個問題是，在恒壓之前，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對應(yīng)關(guān)系，這樣會大大降低滅菌效果。2影響加壓蒸汽滅菌的因素　　。多數(shù)微生物的營養(yǎng)體和病毒在50~65176。C，10分鐘就會被殺死；但各種孢子、特別是細菌芽孢最能抗熱，要在121176。C，15分鐘才被殺死。對同種微生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感?！　?，數(shù)量越多，熱死時間越長。 ～，微生物較不易死亡；PH＜，最易引起死亡。 原理是在驅(qū)盡鍋內(nèi)空氣的前提下，通過加熱把密閉鍋內(nèi)純水蒸汽的壓力升高而使蒸汽溫度相應(yīng)提高，也就是說是依靠溫度而不是壓力達到滅菌的目的。因此，在一切利用加壓蒸汽滅菌法的場合下，必須做到徹底排除滅菌鍋內(nèi)的殘余空氣。 滅菌對象體積的大小會影響熱的傳導(dǎo)速率。3滅菌對培養(yǎng)基成分的影響 除對培養(yǎng)基中的淀粉成分有促進糊化和水解等少數(shù)有利影響外，很多是不利因素：　　，普遍下降?！　?，這主要是由于一些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀。例如Ca+2與PO43化合，就會產(chǎn)生磷酸鈣沉淀?！　。岣呱珴?，不少培養(yǎng)基顏色加深?！　。档蜐舛葰鉁氐蜁r會增加冷凝水?！　】梢圆捎锰厥饧訜釡缇姆椒ㄏ泻τ绊懀駥性诟邷叵乱灼茐某煞值呐囵B(yǎng)基，如含糖組合培養(yǎng)基，可進行低壓滅菌15分鐘，所以像我們培養(yǎng)大腸菌群所用的乳糖膽鹽培養(yǎng)基就是采用了115℃。２、輻射　　利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點，所以應(yīng)用越來越廣，目前主要應(yīng)用在以下幾個方面：　?。保┫裎⑸飳嶒炇?、超凈工作臺都應(yīng)用紫外燈殺菌。避免紫外燈的照射，打開時人員要離開?！　。玻┻€有應(yīng)用β射線作食品表面殺菌，γ射線用于食品內(nèi)部殺菌。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長。３、過濾　　采用機械方法，設(shè)計一種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種過濾器。通過過濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達到除菌的目的。這種滅菌方法適用于一些對熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優(yōu)點是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時會給實驗帶來一定的麻煩。二、化學(xué)方法　　一般化學(xué)藥劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑。能迅速殺滅病原微生物的藥物，稱為消毒劑。能抑制或阻止微生物生長繁殖的藥物，稱為防腐劑。但是一種化學(xué)藥物是殺菌還是抑菌，常不易嚴(yán)格區(qū)分。消毒劑在低濃度時也能殺菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐劑沒有選擇性，因此對一切活細胞都有毒性，不僅能殺死或抑制病原微生物，而且對人體組織細胞也有損傷作用，所以只能用于體表、器械、排泄物和周圍環(huán)境的消毒。常用的化學(xué)消毒劑有：石碳酸、來蘇水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。像在做試驗時可以用75%的酒精對手進行消毒。為了保證滅好菌的器皿和培養(yǎng)基不被污染都要將口包好密封，而且為了避免微生物的滋生和繁殖，做完實驗的器具必須先進行滅菌再洗刷?？傊⑸餀z驗既要保證環(huán)境的無菌又要保證操作規(guī)范不引入外來菌。我想在座的各位其中應(yīng)該有罐頭生產(chǎn)企業(yè)，罐頭的微生物檢驗要求商業(yè)無菌，那我簡單的介紹一下商業(yè)無菌的檢測。首先打開一罐測一下PH值，，然后最少取3罐進行保溫，低酸型于36℃177。1℃保溫10天，酸性的于30℃177。1℃保溫10天。保溫過程中每天觀察，如有胖聽或泄漏等現(xiàn)象，立即剔出作開罐檢查。胖聽是由于罐頭內(nèi)微生物活動或化學(xué)作用產(chǎn)生氣體，形成正壓，使一端或兩端外凸的現(xiàn)象。泄漏是罐頭密封結(jié)構(gòu)有缺陷，或由于撞擊而破壞密封，或罐壁腐蝕而穿孔致使微生物侵入的現(xiàn)象。開罐檢查包括PH測定，看與開始時有否顯著差異；感官檢查，外觀、色澤、狀態(tài)、氣味等進行觀察和嗅聞、用餐具按住食品或戴薄紙?zhí)滓允种赣|感，鑒別是否腐敗變質(zhì)。對感官或PH檢查結(jié)果認(rèn)為可疑的，進行涂