【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 。2h,培養(yǎng)后不產(chǎn)氣則報(bào)告為陰性；將產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于EMB上，培養(yǎng)18～24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。報(bào)告同上。 微生物檢驗(yàn)還有兩個(gè)重要指標(biāo)就是霉菌、酵母的計(jì)數(shù)及致病菌的檢驗(yàn)，因?yàn)槠髽I(yè)的出廠檢驗(yàn)微生物這塊主要是菌落總數(shù)和大腸菌群，所以后兩個(gè)指標(biāo)我就給大家簡(jiǎn)單介紹一下，讓大家了解一下。霉菌和酵母的培養(yǎng)可以使用同一種培養(yǎng)基，通過(guò)長(zhǎng)出的菌落形態(tài)特征來(lái)判斷計(jì)數(shù)，霉菌最顯著的特征就是一般有菌絲，不規(guī)則無(wú)固定大小，最初往往是白色或淺色，當(dāng)長(zhǎng)出孢子后就成好多顏色，像紅色、綠色、黑色等等。而酵母菌一般比較光滑，隆起，多為乳白色，少數(shù)有紅色，與細(xì)菌菌落特征相似。一般使用的培養(yǎng)基是孟加拉紅，檢樣操作和前面一樣，但是培養(yǎng)霉菌要求稀釋樣品要充分振搖30min以上，還要反復(fù)吹吸50次，一是霉菌孢子充分散開(kāi)。檢樣完畢后選擇合適的稀釋度，取1mL稀釋液加到平板內(nèi)，加入培養(yǎng)基待凝固后倒置放入25℃～28℃的培養(yǎng)箱內(nèi)，3天后開(kāi)始觀察，共培養(yǎng)觀察5天。然后選擇菌落數(shù)在10～150之間的進(jìn)行報(bào)數(shù)，稀釋度的選擇及菌落的報(bào)告方式都可參照菌落總數(shù)報(bào)出方式。我們?cè)賮?lái)說(shuō)說(shuō)致病菌的檢驗(yàn)，主要的是三種沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌。我們以沙門(mén)氏菌為例簡(jiǎn)單的介紹一下操作，致病菌的檢測(cè)第一步都要進(jìn)行增菌，將25g樣品加入到225mL緩沖蛋白胨水（BP）中于36℃177。1℃培養(yǎng)4h,取10mL加入到100mL四硫酸鈉煌綠增菌液(TTB)內(nèi)于42℃培養(yǎng)18h～24h,同時(shí)，另取10mL于100mL亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液內(nèi)于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h。分離，取增菌液劃線接種一個(gè)亞硫酸鉍（BS）瓊脂和一個(gè)HEKTOEN氏腸道菌（HE）瓊脂上，于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h，BS 上培養(yǎng)40～48h。根據(jù)沙門(mén)氏菌在每種培養(yǎng)基上菌落形態(tài)挑取典型的可疑菌落(BS上產(chǎn)硫化氫的菌落呈褐色，灰色或黑色，有時(shí)帶有金屬光澤。有些菌株不產(chǎn)生硫化氫，形成灰綠色的菌落，周?chē)囵B(yǎng)基不變；HE上菌落呈蘭綠至蘭色，帶或不帶黑色中心。許多沙門(mén)氏菌培養(yǎng)物可呈現(xiàn)大的光澤黑色中心或幾乎全部黑色的菌落，多數(shù)產(chǎn)硫化氫)進(jìn)行生化試驗(yàn)接種到三糖鐵上，于36℃177。1℃培養(yǎng)18h～24h，通過(guò)在TSI內(nèi)的反應(yīng)來(lái)判定，然后進(jìn)一步進(jìn)行血清學(xué)的鑒定。我們都知道微生物的檢測(cè)最主要的就是要保證無(wú)菌操作，只有這樣才能保證出具數(shù)據(jù)的真實(shí)性和可靠性。下面講的內(nèi)容就是怎樣做才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確。首先我們來(lái)區(qū)別兩個(gè)概念，消毒和滅菌這兩個(gè)詞在實(shí)際使用中常被混用，其實(shí)它們的含義是有所不同的。消毒是指應(yīng)用消毒劑等方法殺滅物體表面和內(nèi)部的病原菌營(yíng)養(yǎng)體的方法，而滅菌是指用物理和化學(xué)方法殺死物體表面和內(nèi)部的所有微生物，使之呈無(wú)菌狀態(tài)。從概念中我們就能看出來(lái)我們?cè)谧鑫⑸锏脑囼?yàn)是要進(jìn)行前期的滅菌工作，而不是簡(jiǎn)單的消毒。我們就來(lái)看看通常采用地滅菌方法：　一、物理方法：有高溫、輻射、超聲波、激光、過(guò)濾等等，在實(shí)驗(yàn)室中最常用的就是高溫滅菌和輻射滅菌。高溫　　利用高溫進(jìn)行滅菌、消毒或防腐，是最常用而又方便有效的方法。高溫可使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)和酶類(lèi)發(fā)生變性而失活，從而起滅菌作用，不光是高溫可以殺菌，通常低溫也可以起抑菌作用，所以我們可以把預(yù)先配好的培養(yǎng)基放到冰箱里進(jìn)行保存。高溫滅菌包括干熱滅菌法和濕熱滅菌法，在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因?yàn)橐环矫鏉駸嵋子趥鬟f熱量，另一方面由于濕熱更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵結(jié)構(gòu)，從而加速蛋白質(zhì)變性而迅速死亡。１）干熱滅菌法:　?。豪没鹧嬷苯影盐⑸餆?。此法徹底可靠，滅菌迅速，但易焚毀物品，所以使用范圍有限，只適合于接種針、環(huán)、試管口及放培養(yǎng)基的瓶口，檢樣使用的剪子鑷子等。　?。杭窗汛郎缇奈锲肪鶆虻胤湃牒嫦渲?，升溫至160176。C，恒溫1小時(shí)即可。此法適用于玻璃皿、金屬用具等的滅菌。這一般這可以用來(lái)烘干滅好菌的平板和吸管。２）濕熱滅菌法:多數(shù)細(xì)菌和真菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在60℃左右處理5～10分鐘即可殺死，酵母菌和真菌的孢子稍耐熱些，要用80℃以上處理才能殺死，而細(xì)菌的芽孢最耐熱，一般要在120℃下處理15分鐘才能殺死。這就是為什么器皿及蒸餾水的滅菌都要在121℃高壓滅菌15分鐘以上，而一般的培養(yǎng)基滅菌也都采用121℃高壓滅菌15分鐘。濕熱滅菌法包括常壓法和加壓法。常壓法：　?。河行┦澄飼?huì)因高溫破壞營(yíng)養(yǎng)成分或影響質(zhì)量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以只能用較低的溫度來(lái)殺死其中的病原微生物，這樣既保持食物的營(yíng)養(yǎng)和風(fēng)味，又進(jìn)行了消毒，保證了食品衛(wèi)生。該法一般在60～85℃處理15秒至30分鐘既可達(dá)到消毒目的。此法為法國(guó)微生物學(xué)家巴斯德首創(chuàng)，故名為巴氏消毒法。　?。褐苯訉⒁镜奈锲贩湃肭逅?，煮沸數(shù)分鐘，即可殺死細(xì)菌的全部營(yíng)養(yǎng)和部分芽孢。此法適用于注射器、毛巾及解剖用具的消毒。：適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。具體做法是：將待滅菌的培養(yǎng)基在80～100176。C蒸煮15～60分鐘，殺死其中所有微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。然后置室溫或放入37176。C恒溫箱中過(guò)夜，誘導(dǎo)殘留的芽孢發(fā)芽。第2天再重復(fù)上述步驟，三次左右，就可達(dá)到滅菌的目的。此法不需加壓滅菌鍋，但操作麻煩，所需時(shí)間長(zhǎng)。加壓法：常規(guī)加壓滅菌法和連續(xù)加壓滅菌法　 常規(guī) 加壓滅菌法：這是發(fā)酵工業(yè)、醫(yī)療保健、食品檢測(cè)和微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中最常用的一種滅菌方法。它適用于各種耐熱、體積大的培養(yǎng)基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌?！　〕Ｒ?guī)加壓蒸汽滅菌是把待滅菌的物品放在一個(gè)可密閉的盛有適量水的加壓蒸汽滅菌鍋中，把鍋內(nèi)的水加熱煮沸，并把其中原有的空氣徹底驅(qū)盡后將鍋密封。再繼續(xù)加熱就會(huì)使其中壓力升高。由于蒸汽壓的上升，從而溫度也隨之提高到100℃以上。在蒸汽壓達(dá)到1kg/，加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)的溫度可達(dá)到121176。C。在這種情況下，微生物（包括芽孢）在15~20分鐘便會(huì)被殺死，而達(dá)到滅菌目的。如滅菌的對(duì)象是砂土、石蠟油等面積大、含菌多、傳熱差的物品，則應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間。在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的一個(gè)問(wèn)題是，在恒壓之前，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對(duì)應(yīng)關(guān)系，這樣會(huì)大大降低滅菌效果。2影響加壓蒸汽滅菌的因素　　。多數(shù)微生物的營(yíng)養(yǎng)體和病毒在50~65176。C，10分鐘就會(huì)被殺死；但各種孢子、特別是細(xì)菌芽孢最能抗熱，要在121176。C，15分鐘才被殺死。對(duì)同種微生物來(lái)講，幼齡菌比老齡菌對(duì)熱更敏感?！　?，數(shù)量越多，熱死時(shí)間越長(zhǎng)。 ～，微生物較不易死亡；PH＜，最易引起死亡。 原理是在驅(qū)盡鍋內(nèi)空氣的前提下，通過(guò)加熱把密閉鍋內(nèi)純水蒸汽的壓力升高而使蒸汽溫度相應(yīng)提高，也就是說(shuō)是依靠溫度而不是壓力達(dá)到滅菌的目的。因此，在一切利用加壓蒸汽滅菌法的場(chǎng)合下，必須做到徹底排除滅菌鍋內(nèi)的殘余空氣。 滅菌對(duì)象體積的大小會(huì)影響熱的傳導(dǎo)速率。3滅菌對(duì)培養(yǎng)基成分的影響 除對(duì)培養(yǎng)基中的淀粉成分有促進(jìn)糊化和水解等少數(shù)有利影響外，很多是不利因素：　　，普遍下降?！　。@主要是由于一些離子發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生混濁或沉淀。例如Ca+2與PO43化合，就會(huì)產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。　　，提高色澤，不少培養(yǎng)基顏色加深?！　?，降低濃度氣溫低時(shí)會(huì)增加冷凝水?！　】梢圆捎锰厥饧訜釡缇姆椒ㄏ泻τ绊懀駥?duì)含有在高溫下易破壞成分的培養(yǎng)基，如含糖組合培養(yǎng)基，可進(jìn)行低壓滅菌15分鐘，所以像我們培養(yǎng)大腸菌群所用的乳糖膽鹽培養(yǎng)基就是采用了115℃。２、輻射　　利用輻射進(jìn)行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學(xué)藥劑消毒的缺點(diǎn)，所以應(yīng)用越來(lái)越廣，目前主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面：　?。保┫裎⑸飳?shí)驗(yàn)室、超凈工作臺(tái)都應(yīng)用紫外燈殺菌。避免紫外燈的照射，打開(kāi)時(shí)人員要離開(kāi)?！　。玻┻€有應(yīng)用β射線作食品表面殺菌，γ射線用于食品內(nèi)部殺菌。經(jīng)輻射后的食品，因大量微生物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期延長(zhǎng)。３、過(guò)濾　　采用機(jī)械方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過(guò)濾器。通過(guò)過(guò)濾，只讓液體培養(yǎng)基從篩子中流下，而把各種微生物菌體留在篩子上面，從而達(dá)到除菌的目的。這種滅菌方法適用于一些對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基的滅菌以及氣體的滅菌。它的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。但是比細(xì)菌還小的病毒仍然能留在液體培養(yǎng)基內(nèi)，有時(shí)會(huì)給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)一定的麻煩。二、化學(xué)方法　　一般化學(xué)藥劑無(wú)法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物，所以是起消毒劑的作用，而不是滅菌劑。能迅速殺滅病原微生物的藥物，稱(chēng)為消毒劑。能抑制或阻止微生物生長(zhǎng)繁殖的藥物，稱(chēng)為防腐劑。但是一種化學(xué)藥物是殺菌還是抑菌，常不易嚴(yán)格區(qū)分。消毒劑在低濃度時(shí)也能殺菌（如1：1000硫柳汞）。由于消毒防腐劑沒(méi)有選擇性，因此對(duì)一切活細(xì)胞都有毒性，不僅能殺死或抑制病原微生物，而且對(duì)人體組織細(xì)胞也有損傷作用，所以只能用于體表、器械、排泄物和周?chē)h(huán)境的消毒。常用的化學(xué)消毒劑有：石碳酸、來(lái)蘇水（甲醛溶液）、氯化汞、碘酒、酒精等。像在做試驗(yàn)時(shí)可以用75%的酒精對(duì)手進(jìn)行消毒。為了保證滅好菌的器皿和培養(yǎng)基不被污染都要將口包好密封，而且為了避免微生物的滋生和繁殖，做完實(shí)驗(yàn)的器具必須先進(jìn)行滅菌再洗刷。總之微生物檢驗(yàn)既要保證環(huán)境的無(wú)菌又要保證操作規(guī)范不引入外來(lái)菌。我想在座的各位其中應(yīng)該有罐頭生產(chǎn)企業(yè)，罐頭的微生物檢驗(yàn)要求商業(yè)無(wú)菌，那我簡(jiǎn)單的介紹一下商業(yè)無(wú)菌的檢測(cè)。首先打開(kāi)一罐測(cè)一下PH值，，然后最少取3罐進(jìn)行保溫，低酸型于36℃177。1℃保溫10天，酸性的于30℃177。1℃保溫10天。保溫過(guò)程中每天觀察，如有胖聽(tīng)或泄漏等現(xiàn)象，立即剔出作開(kāi)罐檢查。胖聽(tīng)是由于罐頭內(nèi)微生物活動(dòng)或化學(xué)作用產(chǎn)生氣體，形成正壓，使一端或兩端外凸的現(xiàn)象。泄漏是罐頭密封結(jié)構(gòu)有缺陷，或由于撞擊而破壞密封，或罐壁腐蝕而穿孔致使微生物侵入的現(xiàn)象。開(kāi)罐檢查包括PH測(cè)定，看與開(kāi)始時(shí)有否顯著差異；感官檢查，外觀、色澤、狀態(tài)、氣味等進(jìn)行觀察和嗅聞、用餐具按住食品或戴薄紙?zhí)滓允种赣|感，鑒別是否腐敗變質(zhì)。對(duì)感官或PH檢查結(jié)果認(rèn)為可疑的，進(jìn)行涂