研究生分子醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技能實(shí)驗(yàn)二(編輯修改稿)
2025-03-20 14:15 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 電泳儀 , 微量移液槍 , 微波爐或電爐 ,紫外透射儀或凝膠成像系統(tǒng)。 八、 試劑 5 TBE電泳緩沖液：稱取 Tris 54g，硼酸 ，并加入 EDTA () 20ml，定溶至 1000ml。 6 電泳載樣緩沖液： ％ 溴粉藍(lán)， 40％ (w/v) 蔗糖水溶液（或 30 ％ 甘油），貯存于 4℃ 。 溴化乙錠 (EB)溶液母液 :將 EB配制成 10mg/ml,用鋁箔或黑紙包裹容器 ,儲(chǔ)于室溫即可。 九、操作步驟 取 5 TBE緩沖液 20ml加水至 200ml,配制成 TBE稀釋緩沖液 ,待用。 膠液的制備 ：稱取 ,置于 200ml錐形瓶中 ,加入 50ml TBE稀釋緩沖液 ,放入微波爐里 (或電爐上 )加熱至瓊脂糖全部熔化 ,取出搖勻 ,此為 ％瓊脂糖凝膠液。加熱過(guò)程中要不時(shí)搖動(dòng) ,使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進(jìn)入溶液。加熱時(shí)應(yīng)蓋上封口膜 ,以減少水份蒸發(fā)。 膠板的制備： 將融化的瓊脂冷卻至 5060℃ ， 而后到入制膠模具 （ 預(yù)先插上樣品梳子 ） 中 ， 待膠完全凝固后撥出梳子 ， 取出膠塊 ， 放入加有 TBE 電泳緩沖液的電泳槽內(nèi) 。 加樣： 取 8μlDNA樣品與 2μl 6 載樣液混勻 ,用微量移液槍小心加入樣品槽中 。 電泳 ：加完樣后 ,合上電泳槽蓋 ,立即接通電源 。 控制電壓保持在 6080V, 電流在 40mA以上 。 電泳方向由負(fù)極向正極 ， 當(dāng)溴酚藍(lán)條帶移動(dòng)到距凝膠前沿約 2cm時(shí) ,停止電泳 。 染色 ：未加 EB的膠板在電泳完畢后移入 溶液中 , 室溫下染色 510 分鐘 。 觀察和拍照：在波長(zhǎng)為 254nm的長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外燈下觀察染色后的或已加有 EB的電泳膠板 。 DNA存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶 。 紫光燈下觀察時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡或有機(jī)玻璃面罩 ,以免損傷眼睛 。 五 注意事項(xiàng) 1 倒膠時(shí)把握好膠的溫度，不要高于 60℃ ，否則溫度太高會(huì)使制板變形 2 膠一定要凝固好才能拔梳子，方向一定要豎直向上，不要弄壞點(diǎn)樣孔 3 點(diǎn)
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