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植物細胞工程課件第一章實驗室基本技術(編輯修改稿)

2025-02-16 07:37 本頁面
 

【文章內容簡介】 Met、 Phe、 Thr、Cys、 Ser等 ( 2)非必需氨基酸 ? 維生素類 ? 鹽類 ? 葡萄糖 ? 緩沖系統(tǒng) 大多數(shù)平衡液采用磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。HEPEs現(xiàn)被廣泛使用,常用濃度為 25mmol/L。 ? 礦物類 ? 有機補充物 如核苷類、 TCA中間產(chǎn)物、丙酮酸鹽、類脂化合物等。 ? 激素類 如 insulin、生長激素、氫化可的松等。 ? 生長因子類 如血小板衍生出來的生長因子( PDGF)、成纖維細胞生長因子( FGF)、表皮生長因子( EGF)、內皮生長因子及增殖刺激活性因子( MsA)等。 培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)基選擇 ? 平衡液溶液( BSS) ? 天然培養(yǎng)液 ? 合成培養(yǎng)液 ? 無血清培養(yǎng)基 ? 其他常用液 Ringer PBS Tyrode Earle Hanks Dulbecco Dhanks NaCl KCl CaCl2 O KH2PO4 NaHCO3 葡萄糖 酚紅 表 1 幾種常用的 BSS ( g/L) 天然培養(yǎng)液 ? 血漿 ? 血清 ? 胚胎浸出液 ? 鼠尾膠原 合成培養(yǎng)液 ? 人工方法模擬合成 如 TC19 MEM、 RPM16DMEM、 Ham’s F12等。 ? 主要成分是氨基酸、 vitamin、碳水化合物、無機鹽和其他一些輔助物質等。 無血清培養(yǎng)基 ? 包括基礎培養(yǎng)基和附加成分。 ? 基礎培養(yǎng)基:一般用人工合成的培養(yǎng)液,常用Ham F12和 DMEM, 1: 1混合,加含 15mmol/L HEPEs的 。 ? 附加成分: ?培養(yǎng)基質 (纖維連結素、多聚物、膠原等。) ?營養(yǎng)成分 (轉鐵蛋白、硒酸鈉、胰島素、生長因子等) ?酶抑制劑 ( %- %大豆胰酶抑制劑) 其他常用液 ? 消化液 適用于消化細胞間質較少的組織 , 常用濃度 %、%, T: 370C或室溫 , 。 ? pH調整液 %HAc液 一種 H+ 緩沖劑 , 可長時間保持較強的緩沖作用 , 維持恒定的 pH值 。 ? 200mmol/LGln ? 抗菌液 青霉素 、 鏈霉素 ( 雙抗 ) 液 卡那霉素液 、 制霉菌素液 ? 肝素抗凝劑 培養(yǎng)基配制 ? BSS配制方法 以 Hanks液為例: 1. 按配方表準確稱量試劑; 2. 將 CaCl2先溶解在 100ml 水中; 3. 其它成分依次溶解在 750ml水中; 4. 用數(shù)滴 %NaHCO3溶解酚紅; 5. 將 2緩慢倒入 3中,攪動; 6. 將 4加入 5中
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