植物細(xì)胞工程課件第一章實驗室基本技術(shù)(編輯修改稿)
2025-02-16 07:37 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 Met、 Phe、 Thr、Cys、 Ser等 （ 2）非必需氨基酸 ? 維生素類 ? 鹽類 ? 葡萄糖 ? 緩沖系統(tǒng) 大多數(shù)平衡液采用磷酸鹽緩沖系統(tǒng)。HEPEs現(xiàn)被廣泛使用，常用濃度為 25mmol/L。 ? 礦物類 ? 有機補充物 如核苷類、 TCA中間產(chǎn)物、丙酮酸鹽、類脂化合物等。 ? 激素類 如 insulin、生長激素、氫化可的松等。 ? 生長因子類 如血小板衍生出來的生長因子（ PDGF）、成纖維細(xì)胞生長因子（ FGF）、表皮生長因子（ EGF）、內(nèi)皮生長因子及增殖刺激活性因子（ MsA）等。 培養(yǎng)基配方及培養(yǎng)基選擇 ? 平衡液溶液（ BSS） ? 天然培養(yǎng)液 ? 合成培養(yǎng)液 ? 無血清培養(yǎng)基 ? 其他常用液 Ringer PBS Tyrode Earle Hanks Dulbecco Dhanks NaCl KCl CaCl2 O KH2PO4 NaHCO3 葡萄糖 酚紅 表 1 幾種常用的 BSS （ g/L） 天然培養(yǎng)液 ? 血漿 ? 血清 ? 胚胎浸出液 ? 鼠尾膠原 合成培養(yǎng)液 ? 人工方法模擬合成 如 TC19 MEM、 RPM16DMEM、 Ham’s F12等。 ? 主要成分是氨基酸、 vitamin、碳水化合物、無機鹽和其他一些輔助物質(zhì)等。 無血清培養(yǎng)基 ? 包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和附加成分。 ? 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：一般用人工合成的培養(yǎng)液，常用Ham F12和 DMEM， 1： 1混合，加含 15mmol/L HEPEs的 。 ? 附加成分： ?培養(yǎng)基質(zhì) （纖維連結(jié)素、多聚物、膠原等。） ?營養(yǎng)成分 （轉(zhuǎn)鐵蛋白、硒酸鈉、胰島素、生長因子等） ?酶抑制劑 （ %－ %大豆胰酶抑制劑） 其他常用液 ? 消化液 適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的組織 ， 常用濃度 %、%， T： 370C或室溫 ， 。 ? pH調(diào)整液 %HAc液 一種 H＋ 緩沖劑 ， 可長時間保持較強的緩沖作用 ， 維持恒定的 pH值 。 ? 200mmol/LGln ? 抗菌液 青霉素 、 鏈霉素 （ 雙抗 ） 液 卡那霉素液 、 制霉菌素液 ? 肝素抗凝劑 培養(yǎng)基配制 ? BSS配制方法 以 Hanks液為例： 1. 按配方表準(zhǔn)確稱量試劑； 2. 將 CaCl2先溶解在 100ml 水中； 3. 其它成分依次溶解在 750ml水中； 4. 用數(shù)滴 %NaHCO3溶解酚紅； 5. 將 2緩慢倒入 3中，攪動； 6. 將 4加入 5中
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