植物細胞工程課件第一章實驗室基本技術(參考版)
2025-01-23 07:37本頁面
【正文】 。 外植體取材 a. 根據(jù)培養(yǎng)需求選擇植物部位 b. 多年生植物注意樹齡和季節(jié) c. 在不影響培養(yǎng)目的的前提下盡可能選擇自然繁殖器官作外植體 外植體滅菌 外植體 清洗整理 殺菌劑滅菌 無菌水清洗 不同外植體 在滅菌劑濃度、 時間、程序上 應有所區(qū)別 幾種常用消毒劑的效果比較 消 毒 劑 使用濃度 (%) 消毒時間 (min.) 效 果 殘液去除難易 次氯酸鈣 /納 10 5～ 30 好 易 新潔爾滅 10～ 20 5～ 30 好 易 氯化汞 ～ 1 2～ 10 最好 最難 過氧化氫 10～ 12 5～ 15 較好 最易 抗菌素 4～50mgl1 30～ 60 較好 較難 課后思考 ? 請思考細胞工程實驗技術與其它生物技術實驗不同之處。 外植體接種培養(yǎng) 植物離體培養(yǎng)類型： ※ 組織培養(yǎng) ※ 器官培養(yǎng) ※ 細胞培養(yǎng) ※ 原生質(zhì)體培養(yǎng) 植物材料的培養(yǎng)與外植體選取 外植體滅菌 接種培養(yǎng)及培養(yǎng)條件的控制 植物離體培養(yǎng)基本程序 外植體的來源 ※ 外植體 （ explant） 是指用于離體培養(yǎng)的活的植物組織 、 器官等材料 。 大多數(shù)動物細胞對滲透壓的忍耐程度較強 ， 只要培養(yǎng)基的滲透壓變化不是很劇烈 ， 一般對培養(yǎng)物不會造成致命傷害 。 除了氧氣供應外 ， 還應注意培養(yǎng)基的氧氣和 CO2的平衡 。 培養(yǎng)細胞對 pH的要求因培養(yǎng)時間長短有關 ，一般原代細胞要求較嚴格 ， 而永久細胞系對 pH具有較強的忍耐性 。 如哺乳低溫細胞在 45℃ 下只能存活 1小時 ， 但在 25℃ 條件下仍然能慢速生長 ， 并維持長時間不死 ，甚至在 4℃ 下數(shù)小時后 ， 再置于適宜溫度下細胞仍然可以正常生長 。 由于外植體的吸收 ， 引起培養(yǎng)過程中的 pH變化；高壓滅菌引起 pH 變化 。 植物培養(yǎng)通常使用的 pH值 范圍是～ 。 周圍環(huán)境的相對濕度低于 60%時 ， 培養(yǎng)基容易干涸 ， 會改變培養(yǎng)基的滲透壓；相反 ， 若周圍環(huán)境濕度過高時 ， 培養(yǎng)室易滋生各種細菌和霉菌 。 在大多數(shù)情況下 ， 適溫有利于細胞分裂 ， 即可以提高細胞分裂速率 ， 而適當提高溫度則有利于細胞生長 ， 在一定范圍內(nèi)降低培養(yǎng)溫度則使細胞分裂和生長速度均減緩 ， 而且使細胞的質(zhì)量增加 。 依植物生活習性可將其分為喜溫性植物和冷涼性植物兩大類型 。 光周期 指的是光照和黑暗交替的時間，影響細胞脫分化和再分化的效應。 離體培養(yǎng)下一般用白熾熒光燈進行光照 ， 光譜成分主要是藍光 ， 光譜波長為 419nm。 離體培養(yǎng)條件下常用的光量一般為1000－ 4000lx。 細胞培
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