畜牧微生物學(xué)第三章非細(xì)胞型微生物—病毒(編輯修改稿)
2025-02-12 19:45 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 cation cycle page 53 33 （ 一 ） 病毒的增殖 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 吸附 侵入 病毒大分子合成 脫殼 裝配和釋放 病毒的復(fù)制周期 ：可分為 5個(gè)連續(xù)的階段。 34 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 病毒吸附蛋白與 細(xì)胞受體間的結(jié)合力來(lái)源于空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性，相互間的電荷、氫鍵、疏水性相互作用及范得華力。 一、吸附 adsoprption 病毒受體：是宿主細(xì)胞表面的特殊結(jié)構(gòu)，多為糖蛋白。 噬菌體的吸附 桿狀病毒的吸附 35 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 尾部的酶水解細(xì)胞壁的肽聚糖，使細(xì)胞壁產(chǎn)生小孔；尾鞘收縮，核酸通過(guò)中空的尾管壓入胞內(nèi)，蛋白質(zhì)外殼留在胞外。 吸附 尾釘固著 尾鞘收縮 尾管穿入 DNA注入 二、侵入 peration 36 37 38 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 三、脫殼 encoating 動(dòng)物病毒穿入宿主細(xì)胞并脫殼的過(guò)程： 1）在胞漿膜穿入并脫殼：囊膜與細(xì)胞膜融合。 2）在內(nèi)吞小體脫殼：病毒胞飲形成 內(nèi)吞小體 。 3）在核膜脫殼：貼近核孔復(fù)合物，病毒基因組進(jìn)入核內(nèi)。 細(xì)胞內(nèi)吞的過(guò)程 39 病毒利用宿主的生物合成機(jī)構(gòu)和場(chǎng)所，使病毒核酸表達(dá)和復(fù)制，產(chǎn)生大量的病毒蛋白質(zhì)和核酸。 mRNA的轉(zhuǎn)錄 蛋白質(zhì)及 DNA或 RNA的合成 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 四、病毒大分子合成 40 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 五、 裝配 assembly 多數(shù) DNA病毒在胞漿內(nèi)合成的結(jié)構(gòu)蛋白遷移到胞核內(nèi)，與在胞核內(nèi)合成的病毒 DNA裝備成核衣殼，RNA病毒幾乎都在胞漿內(nèi)裝配形成核衣殼。 41 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 五、 釋放 release ，如 T4噬菌體、腺病毒等通過(guò)細(xì)胞裂解 或局部破裂而釋放。 DNA病毒，如皰疹病毒，以細(xì)胞質(zhì)中 通道 釋放到細(xì)胞外。 RNA病毒，如副流感病毒用 出芽 方式通過(guò)寄主細(xì)胞膜， 釋放到細(xì)胞外并獲得細(xì)胞源性的包膜和產(chǎn)生刺突。 動(dòng)物病毒的釋放方式多種多樣，主要有以下幾種形式： HIV以出芽形式釋放 42 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 五、裝配和釋放 包涵體 (inclusion body /inclusion )：是某些病毒感染細(xì)胞產(chǎn)生的特征性的形態(tài)變化，可通過(guò)固定染色而后在光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)。包涵體可在細(xì)胞核內(nèi)或胞漿內(nèi)，可單個(gè)或多個(gè)，有的較大有的較小，或圓形或無(wú)規(guī)律形態(tài)，可嗜酸或嗜堿，因病毒的種類(lèi)而異。細(xì)胞內(nèi) 包涵體 的位置即是病毒合成及裝配的部位。 天花病毒包涵體叫 顧氏小體 ；狂犬病毒包涵體叫 內(nèi)基小體 ；煙草花葉病毒包涵體叫 X小體 。昆蟲(chóng)病毒的包涵體叫 多角體 。 43 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) HIV增殖過(guò)程模擬圖 44 45 46 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 1. cultivation in the chick embryo 簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)、方便。 SPF雞胚。 47 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 2. cultivation in cell culture 經(jīng)濟(jì)、效果好、用途廣，用于病毒分離、增殖、病毒抗原疫苗的制備、中和試驗(yàn)、病毒空斑測(cè)定及克隆純化。 48 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)： 細(xì)胞培養(yǎng)中的每個(gè)細(xì)胞的生理特性基本一致； 沒(méi)有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的個(gè)體差異； 試驗(yàn)數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)動(dòng)物或雞胚； 可在無(wú)菌條件下進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)，可重復(fù)性好。 49 細(xì)胞培養(yǎng)的類(lèi)型： primary cell：動(dòng)物組織經(jīng)胰蛋白酶消化、分散，獲得單個(gè)細(xì)胞，再生長(zhǎng)于培養(yǎng)器皿中。大多數(shù)組織均可制備原代細(xì)胞，但生長(zhǎng)的快慢難易程度不一。 常用的有：雞胚成纖維細(xì)胞、豬腎、豬睪丸細(xì)胞等 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 50 細(xì)胞培養(yǎng)的類(lèi)型： diploid cell strain：將長(zhǎng)成的原代細(xì)胞消化分散成單個(gè)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)傳代，其細(xì)胞染色體與原代細(xì)胞一樣，仍為二倍體。 缺點(diǎn)：原代和二倍體細(xì)胞在體外培養(yǎng)的代次不長(zhǎng) 。 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 51 continuous cell line：細(xì)胞可在體外無(wú)限制分裂，亦可無(wú)限制傳代。有的來(lái)源于腫瘤組織或轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，染色體數(shù)目不正常，為異倍體。優(yōu)點(diǎn)是傳代及培養(yǎng)方便；缺點(diǎn)是對(duì)分離野毒不敏感。常見(jiàn)的有Vero(非洲綠猴腎 )細(xì)胞、 HeLa(人子宮頸癌 )細(xì)胞、IBRS2(豬腎 )細(xì)胞。 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) Vero細(xì)胞 Hela細(xì)胞 52 （ 二 ） 病毒的人工培養(yǎng) 第四節(jié) 病毒的增殖與人工培養(yǎng) 常用的細(xì)胞培養(yǎng)方法： 靜止培養(yǎng)法
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