血痕法醫(yī)學ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-12 06:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 兔抗人血紅蛋白血清 兔血清 ? 抗人血紅蛋白膠體金試驗 膠體金吸附免疫球蛋白，固定在硝纖膜上，與相應抗原結(jié)合后再與相應抗體結(jié)合，膠體金顆粒聚集，呈現(xiàn)紅色。 ? 適用于微量檢材 膠體金 抗原 抗體 ()僅在控制區(qū)出現(xiàn)一條紅色帶而在測定區(qū) 無紅色帶的出現(xiàn)為陰性 (+)在控制區(qū)和測定區(qū)都有紅色線的出現(xiàn)則為陽性， 表明檢材中有人的 Hb ? 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） enzymelinked immunosorbent assay 是一種固相酶免疫分析法。 將血痕浸泡液包被于反應板上。 抗人血清抗體滴于反應板上。 加入酶標羊抗兔抗體。 加入底物顯色。不顯色 陰性 褐色 陽性 DNA 檢驗 ? 根據(jù) Alu序列作種屬鑒定 Alu家族： DNA中一段中度重復序列，重復單位 長約 300bp。其中在 170bp附近有限制 性內(nèi)切酶 Alu切割的 AGCT序列，命名 為 “ Alu”家族。 Alu序列為人和靈長類所特有，具有種屬特異性 。 用 PCR擴增血痕檢材 Alu家族進行檢測，作種屬鑒定。 ? Alu引物序列： Alu 539。GGC ACT TTG GGA GGC CAA GG3’ Alu 539。TAC AAG CTT GTG CCA CCA TGC CCA AC3’ 擴增產(chǎn)物在 2％瓊脂糖凝膠中電泳，可獲得 DNA長度為 130bp的特異性條帶。牛、大鼠、蛙、鯽魚等的擴增片段大于 130bp，且擴增產(chǎn)量非常少。除猴血外，其他動物均無擴增產(chǎn)物。 根據(jù) 28SrRNA序列鑒定種屬 40s ? 人類 rRNA 28s 60s 5s 28s rRNA編碼序列的區(qū)域進化緩慢相對保守， 但保守區(qū)中的可變區(qū)進化較快，種屬之間差異較大。 針對這一區(qū)域進行 PCR擴增，可獲得人和動物有差異 的特異性片段。 28SrRNA引物序列 ? 引物 A： 5’一 ATC TAG TAG CTG GTT CCC TC3 ? 引物 B： 539。CCT CTA ATC ATT CGC TTT AC3’ ? 經(jīng) PCR擴增，電泳檢測，人類 DNA擴增片段為 10 10 101及 99bp，主要產(chǎn)物為99bp，不同動物 PCR擴增產(chǎn)物長度不同。 細胞色素 b基因序列 ? 位于 mtDNA上 ? 具有種屬差異，幾乎所有的生物檢材都可檢 驗。 ? 檢測的靈敏度較高 ? 人和其他哺乳動物的細胞色素 b基因片段均存在 Alu I酶切位點，但酶切片段大小不同，可區(qū)分人與其他哺乳動物。 引物序列 ? 引物 1： 5’一 CAT CGA CCT TCC AGC CCC ATC AAA CAT3引物 2： 5~TGT TCT ACT GGT TGG CCT CCA ATT CA3’ ? PCR擴增產(chǎn)物 瓊脂糖凝膠檢測，可見一條 981bp長的 DNA片段 兩種限制酶切割 (Alu I、 Nco I) 聚丙烯酰胺凝膠電泳分離
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