常用分子生物學(xué)技術(shù)的原理及其應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-02-09 22:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 （二）基因突變 目錄 將 PCR技術(shù)引入 DNA序列測定 ， 使測序工作大為簡化 ， 也提高了測序的速度； 待測 DNA片段既可克隆到特定的載體后進(jìn)行序列測定 ， 也可直接測定 。 PCR與其他技術(shù)的結(jié)合可以大大提高基因突變檢測的敏感性 。 （四） DNA序列測定 （五）基因突變分析 目錄 ? 逆轉(zhuǎn)錄 PCR(reverse transcription PCR， RTPCR)是將 RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)和 PCR反應(yīng)聯(lián)合應(yīng)用的一種技術(shù)。 ? RTPCR是目前從組織或細(xì)胞中獲得目的基因以及對已知序列的 RNA進(jìn)行定性及半定量分析的最有效方法。 （一）逆轉(zhuǎn)錄 PCR技術(shù) 三、幾種重要的 PCR衍生技術(shù) 目錄 ? 原位 PCR(in situ PCR)是在組織切片或細(xì)胞涂片上的單個細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行的 PCR反應(yīng) ， 然后用特異性探針進(jìn)行原位雜交 ， 即可檢出待測 DNA或RNA是否在該組織或細(xì)胞中存在 。 ? 原位 PCR方法彌補了 PCR技術(shù)和原位雜交技術(shù)的不足 ， 是將目的基因的擴增與定位相結(jié)合的一種最佳方法 。 （二）原位 PCR技術(shù) 目錄 （三）實時 PCR技術(shù) 實時 PCR(realtime PCR)技術(shù)通過動態(tài)監(jiān)測反應(yīng)過程中的產(chǎn)物量 ， 消除了產(chǎn)物堆積對定量分析的干擾 ， 亦被稱為定量 PCR。 目錄 ?實時 PCR技術(shù)原理 Q R 339。 339。 539。 539。 上游引物 下游引物 熒光標(biāo)記引物 R Q 339。 339。 539。 539。 目錄 ?實時 PCR分類： 實時 PRC 非探針類 探針類 1. TaqMan探針法 2. 分子信標(biāo)探針法 3. FRET探針法 目錄 圖 203 TaqMan探針法實時 PCR原理示意圖 目錄 第三節(jié) 基因文庫 Gene Library 目錄 ? 基因組 DNA文庫 (genomic DNA li
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